一种无核酸提取的HLA-B27检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种无核酸提取的HLA‑B27检测试剂盒，本发明专利技术的检测试剂盒需要的血液样本量少，只需10μL血液即可进行检测，患者依从性更好，可收集指尖血样本，简化采样过程；对血液新鲜度要求低，长期冻存血样融化后可正常用于检测；不需要单独的提取仪器或提取试剂，只需简单的加热和离心，大大降低了仪器、试剂和人力成本；闭管检测反应，不涉及开管操作，不会产生扩增子污染，对实验场地要求低；本发明专利技术检测试剂盒的检测方法涉及PCR扩增和两步核酸侵入反应，检测信号放大效率高，检测灵敏度高。因此，本发明专利技术能够为临床提供更优的HLA‑B27检测工具，指导医疗资源紧缺地区的疾病筛查和诊断工作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种无核酸提取的hla-b27检测试剂盒。

技术介绍

1、强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，as)是一种发病原因不明的慢性自身免疫性疾病，好发于青年时期的男性，如不能及时诊疗极易发生不可逆转的结构损伤，严重影响患者的生活质量，给患者家庭和社会带来巨大负担。尽管as属于常见的风湿免疫病之一，但as症状易与其他疾病混淆，加之风湿免疫病专科医疗资源缺乏，as诊断延迟现象非常普遍。研究发现人类白细胞抗原b27(human leukocyte antigens b27，hla-b27)与as发病高度相关性，我国as患者群体中hla-b27阳性率已超过90％。鉴于hla-b27与as的高度相关性，hla-b27阳性已作为判断as的重要特征之一被纳入国际脊柱关节炎评估协会的修订标准中，用于辅助as等疾病的早期诊断。因此，提供简便、低成本、准确性有保障的hla-b27检测工具将更有利于as高风险人群的鉴别，实现对疾病的早诊早治早管理。

2、根据检测对象不同目前hla-b27常用的检测技术可分为抗原检本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种无核酸提取的HLA-B27检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括HLA-B27检测液，所述HLA-B27检测液包括HLA-B27等位基因的上游扩增引物F-B27，R1-B27、R2-B27、R3-B27和R4-B27组成的下游扩增引物组，HLA-B27等位基因的上游识别探针Up-B27、下游识别探针Dp-B27、荧光报告探针Rp-1，所述F-B27如SEQ ID NO.1所示，所述R1-B27如SEQ IDNO.2所示，所述R2-B27如SEQ ID NO.3所示，所述R3-B27如SEQ ID NO.4所示，所述R4-B27如SEQ ID NO.5所示，所述Up-B27如S...

【技术特征摘要】

1.一种无核酸提取的hla-b27检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括hla-b27检测液，所述hla-b27检测液包括hla-b27等位基因的上游扩增引物f-b27，r1-b27、r2-b27、r3-b27和r4-b27组成的下游扩增引物组，hla-b27等位基因的上游识别探针up-b27、下游识别探针dp-b27、荧光报告探针rp-1，所述f-b27如seq id no.1所示，所述r1-b27如seq idno.2所示，所述r2-b27如seq id no.3所示，所述r3-b27如seq id no.4所示，所述r4-b27如seq id no.5所示，所述up-b27如seq id no.6所示，所述dp-b27如seq id no.7所示，所述rp-1如seq id no.8所示。

2.根据权利要求1所述的无核酸提取的hla-b27检测试剂盒，其特征在于，所述f-b27、r1-b27、r2-b27、r3-b27、r4-b27、up-b27、dp-b27、rp-1的体积比为4:1:1:1:1:4:1:2。

3.根据权利要求1所述的无核酸提取的hla-b27检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括适用于粗提样本的反应缓冲液、taq dna聚合酶，fen1重组酶，阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3所述的无核酸提取的hla-b27检测试剂盒，其特征在于，所述粗提样本的提取方法为：将血液、尿液、拭子样本保存液或洗脱液类型的样本与无菌双蒸水混合，90℃～100℃加热2～10min，5000rpm～15000rpm离心5～10min，上清即为满足检测反应要求的粗提样本。

5.根据权利要求3所述的无核酸提取的hla-b27检测试剂盒，其特征在于，所述适用于粗提样本的反应缓冲液主要成分包括50～200mm tris-hcl、200～5...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛楠，高瑛瑛，陈晓翔，唐万鹏，
申请(专利权)人：南通市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：