一种低乙醇合成量酿酒酵母及其在促进乙酰辅酶A合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种低乙醇合成量酿酒酵母及其在促进乙酰辅酶A合成中的应用，属于生物技术领域。本发明专利技术为降低酿酒酵母中主要的副产物乙醇的积累量，同时增加乙酰辅酶A的合成量，对MTH1、MED2和HXT2转录因子进行改造，筛选得到降低乙醇合成量的最优转录因子组合，再对整合在酿酒酵母基因组上的不同合成途径的异源的乙酰辅酶A合成途径进行比较，提供了一种重组酿酒酵母菌株。该菌株可实现以葡萄糖为碳源的无菌培养基中生长，为代谢工程改造酿酒酵母合成高价值化合物搭建了平台，且构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种低乙醇合成量酿酒酵母及其在促进乙酰辅酶a合成中的应用，属于生物。

技术介绍

1、酿酒酵母又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，作为食品安全菌株已用于制作面包和馒头等食品、酿酒工业。近年来，学者们开始研究利用酿酒酵母生产天然产物，如青蒿酸、三七皂苷等。酿酒酵母具有高安全性，低致病性，高抗逆性，而且受噬菌体污染的概率较低等优点，因此它也在基因工程领域发挥着重要作用。然而，由于其强大的乙醇合成能力，使其在合成这些产物时会降低产品得率，提高产品生产成本，同时大量的乙醇积累会抑制菌株的生长，不利于产物的合成。乙酰辅酶a是酿酒酵母中重要的中间代谢产物，可以用于合成萜类化合物、脂质和氨基酸的合成。酿酒酵母中胞质乙酰辅酶a主要是由乙酸产生的，当我们抑制乙醇的合成时会导致乙酰辅酶a的合成量有所下降。因此通过基因工程改造工业生产菌株降低乙醇合成，提高乙酰辅酶a的积累对于生产特定的产物具有巨大的潜力，可以提供一个优秀的生产平台。

2、目前降低酿酒酵母合成乙醇的主要通过以下几种方法进行：通过敲除丙酮酸脱羧酶，阻断了丙酮酸向乙本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：所述低乙醇合成量酿酒酵母表达了转录因子突变体MTH1A81D、MED2*432Y和HXT2W466*；

2.根据权利要求1所述的低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：转录因子突变体MTH1A81D、MED2*432Y、HXT2W466*的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、4、5所示。

3.根据权利要求1所述的低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：以酿酒酵母S.cerevisiae CEN PK2-1C MATa；ura3-52；trp1-289；leu2-3,112；his3-Δ1；MAL2-8C；SUC2为宿主菌。

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【技术特征摘要】

1.一种低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：所述低乙醇合成量酿酒酵母表达了转录因子突变体mth1a81d、med2*432y和hxt2w466*；

2.根据权利要求1所述的低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：转录因子突变体mth1a81d、med2*432y、hxt2w466*的核苷酸序列分别如seq id no.1、4、5所示。

3.根据权利要求1所述的低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：以酿酒酵母s.cerevisiae cen pk2-1c mata；ura3-52；trp1-289；leu2-3,112；his3-δ1；mal2-8c；suc2为宿主菌。

4.根据权利要求1所述的低乙醇合成量酿酒酵母，其特征在于：将转录因子突变体mth1a81d整合至mth1位点，将转录因子突变体med2*432y整合至med2位点，将转录因子突变体hxt2w466*整合至hxt2位点。

5.一种低乙醇合成量、高乙酰辅酶a合成量的重组酿酒酵母，其特征在于：以权利要求1-4任一项所述的低乙醇合成量酿酒酵母为出发菌，异源表达

6.根据权利要求5所述的重组酿酒酵母，其特征在于：基因po和基因pta整合至1021位点；基因ppc、基因mtka、基因mtkb、基因mcl和基因hpra整合至pck1位点。

7.根据权利要求5所述的重组酿酒酵母，其特征在于：基因po由启动子ptdh3调控表达，基因pta由启动子pg...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘龙，陈坚，吕雪芹，堵国成，李江华，刘延峰，张晨阳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：