【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂及其制备方法。
技术介绍
1、聚合酶链反应(pcr)技术基于其快速、简便、灵敏和特异等优点，自1989年开始就被应用于医学检测和临床检验，随后很快地成为医学和诊断学的主要检测手段之一。rna核酸扩增，是将rna的逆转录体系和dna扩增体系相结合的技术。能够实现一步对rna进行检测，不但操作方便，灵敏度也得到了很大的提升，使一些极为微量rna样品分析成为可能。rt-pcr技术灵敏而且用途广泛，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。核酸诊断被广泛应用于各种病原体的检测上，但是核酸扩增反应试剂在常温下保存不稳定，几周就失效了；在2-8℃条件下保存，保存期也只有三个月左右；-20℃条件下的保存期虽然可以达到一年之久，但是每次使用必须要反复冻融，这对试剂的活性也有很大的影响，并且各组分不能混合一起，用时需混合，操作麻烦等缺点，试剂盒的长期保存和长途运输将会受到很大的限制，容易因诊断试剂保存温度不当而使其敏感性下降甚至完全失效，最终导致疫病的检测不及时而造成疫病流行。
2、冷冻干燥技术为核酸扩增试剂的运输和存储提供了新的方案。双糖的羟基能在蛋白质脱水过程中与其氢键连接及时形成水化膜，从而保护了生物大分子的高级结构及功能完整。糖类尤其是海藻糖和蔗糖在pcr体系的冻干中较为常见，海藻糖有结合水，并且极易吸湿，在保存过程中冻干粉吸潮会直接影响冻干试剂的效期，而冻干试剂的稳定性，跟冻干粉残留的水分息息相关，水分越多，稳定性越差，因此单纯使用海藻糖，试剂
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂及其制备方法，以解决冻干保护剂稳定性能较差的问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、本专利技术提供一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂，按重量份计，包括以下组分：
4、改性蔗糖：12-20份；
5、甘露醇：0.6-2份；
6、甘油：2-4份；
7、透明质酸：6-10份；
8、缓冲剂：0.4-1份；
9、其中，改性蔗糖通过如下步骤制备：
10、将蔗糖加入去离子水中，搅拌均匀，加入对羟基苯甲酸和维生素c，n2氛围下，加入h202溶液，搅拌，透析，冷冻干燥得到改性蔗糖。
11、作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述缓冲剂为柠檬酸、柠檬酸钠和柠檬酸钾中的一种。
12、通过采用上述技术方案，缓冲剂的添加促使冻干保护剂的ph值范围变广，扩大了冷冻干燥剂的应用范围，且与改性蔗糖进行复配之后的效果更优。
13、作为本专利技术实施例的另一个优选方案，蔗糖、去离子水、对羟基苯甲酸、维生素c和h202溶液的用量比为1.2g：100ml：0.3-0.6g：0.15-0.2g：1ml；其中h202溶液的体积分数为30％。
14、本专利技术还提供一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：
15、步骤一：将改性蔗糖、甘露醇、甘油、透明质酸和缓冲剂进行搅拌，得到混合液；
16、步骤二：将混合液进行冷冻干燥，经过预冻阶段、第一次冷冻干燥阶段、第二次冷冻干燥阶段，得到冻干保护剂。
17、作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述预冻过程中，温度为-70℃至-50℃，时间为4-5h。
18、作为本专利技术实施例的另一个优选方案，第一次冷冻干燥阶段过程中，真空度为15-20pa，温度为-35℃至-30℃，时间为7-9h。
19、作为本专利技术实施例的另一个优选方案，第二次冷冻干燥阶段过程中，真空度为15-20pa，温度为20℃-30℃，时间为3-5h。
20、通过采用上述技术方案，可以有效减少冻干保护剂出现干缩现象，使其外观平整饱满，可以在短时间内形成均匀悬浮液，同时避免预冻阶段产生不必要的能耗。
21、本专利技术的有益效果：
22、本专利技术中，在维生素c的引发作用下对羟基苯甲酸与蔗糖进行接枝共聚反应，使蔗糖具有一定的抗氧化性能和抑菌性能，提高了冻干保护剂的稳定性，延长了冻干保护剂的使用时长；添加的甘露醇基本无吸湿性，与蔗糖进行复配后，一方面保持蔗糖的无定形，另一方面可以很好地稳定蛋白质，进一步加强冻干保护剂的稳定性能。
23、本专利技术中制备的冻干保护剂的组分简单，制备过程简单，反应条件温和且成本低廉，能够在常温条件下长期保存。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂，其特征在于，按重量份计，包括以下原料：
2.根据权利要求1所述的一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂，其特征在于，所述缓冲剂为柠檬酸、柠檬酸钠和柠檬酸钾中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂，其特征在于，蔗糖、去离子水、对羟基苯甲酸、维生素C和H202溶液的用量比为1.2g：100mL：0.3-0.6g：0.15-0.2g：1mL；其中H202溶液的体积分数为30％。
4.根据权利要求1所述的一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，所述预冻过程中，温度为-70℃至-50℃，时间为4-5h。
6.根据权利要求4所述的一种用于RT-PCR检测的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，第一次冷冻干燥阶段过程中，真空度为15-20Pa，温度为-35℃至-30℃，时间为7-9h。
7.根据权利要求4所述的一种用于RT-PCR检测的冻
...【技术特征摘要】
1.一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂，其特征在于，按重量份计，包括以下原料：
2.根据权利要求1所述的一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂，其特征在于，所述缓冲剂为柠檬酸、柠檬酸钠和柠檬酸钾中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂，其特征在于，蔗糖、去离子水、对羟基苯甲酸、维生素c和h202溶液的用量比为1.2g：100ml：0.3-0.6g：0.15-0.2g：1ml；其中h202溶液的体积分数为30％。
4.根据权利要求1所述的一种用于rt-pcr检测的冻干保护剂的制备方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：李森，雍德祥，张伦，黄策，李娇，
申请(专利权)人：通用生物南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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