【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗制备领域，特别是涉及一种制备纳米颗粒肿瘤疫苗的重组基因及其应用和纳米颗粒肿瘤疫苗。
技术介绍
1、根据iarc最新数据，全球新增癌症人数共计1,929万人左右，中国新增癌症患者457万人，占比23.7％，成为癌症新增人数最多的国家。在癌症分布类型上，乳腺癌新增人数达226万，首次超过肺癌(221万)，成为全球第一大癌症。
2、肿瘤疫苗在过去40年中一直是各种恶性肿瘤临床研究的主题，但最佳抗原的选择、免疫原性弱和免疫耐受一直是阻碍临床转化的关键问题。抗原的选择会影响关键的疫苗特性，在大量潜在抗原的背景下，符合标准的合适免疫原性抗原数量有限，通用型肿瘤疫苗研发困难重重。目前，筛选合适的抗原、对疫苗进行结构修饰增加免疫原性并提高临床疗效是癌症疫苗的研究热点。
3、肿瘤疫苗是通过免疫接种激发机体对肿瘤的特异性免疫应答，从而发挥抗肿瘤作用的生物药物，根据递送抗原的不同形式可以分为：多肽疫苗，细胞疫苗(例如：修饰的肿瘤细胞，装载肿瘤抗原的树突状细胞(dc)，基因疫苗(例如：质粒，rna，病毒载体)以及其他类型的肿瘤疫苗。
4、细胞疫苗包括含有肿瘤抗原的dc，被修饰的自体癌细胞和异基因肿瘤细胞系。是目前上市最多的肿瘤疫苗，包括基于dc细胞肿瘤疫苗sipuleucel-t(provenge)，治疗性肿瘤疫苗dcvax-brain、m-vaxtm、hybricell、oncophage和cimavaxegf等。遗憾的是细胞疫苗作为获批最早的癌症疫苗，临床试验并没有带来颠覆性的疗效进展，疫苗的免
5、基因疫苗中病毒或质粒可作为编码taas的dna或rna的载体，通过触发模式识别受体激活dc，具有固有的辅助免疫原性，从而引发先天免疫应答，稳定性强，易于制造，诱导细胞内抗原表达。尽管有这些优点，但迄今为止基因疫苗的3期临床试验结果较差导致后期研究有限，dna疫苗allowectin-7在3期试验中，与化疗疗效相比微球蛋白没有改善客观反应率或os，导致开发计划终止。
6、多肽疫苗制备简单，成本可控，稳定性强，但通常需要与强效免疫佐剂联合使用以提高免疫原性。早期多肽疫苗的局限性是使用短肽(<15个氨基酸)，短肽疫苗被非专业apc摄取，无法传递共刺激信号以最佳方式启动和激活ctl，从而促进耐受。长肽疫苗的发展解决了此类缺陷，已被证明可以更集中和选择性地将抗原递送到专业apc。与临床前模型中的短肽疫苗相比，使用合成长肽接种疫苗可诱导更有效持久的t细胞反应。在bivax的多肽亚单位疫苗的开发中，对长肽结构进行两亲性修饰增加了肽的免疫原性，同时嵌入天然癌细胞抗原序列的氨基酸提高了apc结合的稳定性和肿瘤细胞靶向性。
7、筛选合适的抗原，对长肽疫苗进行结构修饰增加免疫原性并提高临床疗效已然成为癌症疫苗的研究热点。抗原的选择是治疗性疫苗设计中最重要的因素。影响疫苗的关键特性包括产生强烈而广泛的免疫反应的能力，靶向癌症干细胞以防止复发，以及避免对正常细胞的杀伤作用。就目前肿瘤疫苗研发进展来看，符合标准的抗原数量有限，单靶点疫苗的免疫原性仍然较弱，免疫系统调控能力差，易造成脱靶反应，难以持续有效的诱导患者的免疫系统靶向杀伤作用，反复给药产生的免疫耐受反应也使肿瘤疫苗的临床试验频频失败。
8、人表皮生长因子受体-2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2，her-2)是跨膜酪氨酸激酶受体，通过与her家族成员形成同源或异源二聚体促进癌细胞分裂、增殖、迁移等恶性生物学行为，在部分乳腺癌、胃癌、卵巢癌患者中均存在过度表达现象。her-2抗原表位在美国国家癌症研究所(nci)制定的“理想”抗原顺序表中位列第六，是癌症治疗中最受欢迎的抗体治疗靶点之一，针对her2靶点的抗体药物形式也是多种多样，治疗策略包括被动免疫治疗(如抗her-2抗体)和主动免疫治疗(如靶向her-2的肽疫苗)。her-2单克隆抗体与her-2受体胞外区域靶向结合，阻断her-2受体的功能，抑制癌细胞生长，并与免疫细胞作用，产生抗体依赖性细胞毒性反应。1998年重组人源化单克隆抗体曲妥珠单抗是全球首个以her-2为靶点生物靶向药，与her-2胞外结构域ⅳ区结合，阻滞非配体依赖的her-2激活模式，是癌症治疗史上的里程碑，开创了现代癌症治疗新药的开发模式。
9、据国际癌症研究机构(iarc)调查的最新数据显示，乳腺癌在全球女性癌症中的发病率为24.2％，位居女性癌症的首位，其中52.9％发生在发展中国家。因此制备简单、成本可控的通用型肿瘤疫苗具有重要的临床价值和市场潜力。
10、在乳腺癌模型中，20％-30％的患者her-2表达阳性，该类型乳腺癌具有分化差、增殖快、淋巴结受累以及远处转移率高的特点，肿瘤细胞恶性程度更高、疾病进展速度更快、更易发生复发和转移、且预后不佳，被称为“最凶险的乳腺癌”。曲妥珠单抗的发现是癌症治疗发展的里程碑，开创了现代癌症治疗的开发模式，在乳腺癌临床应用中降低了her-2阳性患者50％的复发和30％的死亡。
11、尽管如此，频发的多药耐药、肿瘤的复发转移以及辅助治疗带来的心脏毒性、胃肠道不适等毒副作用，仍然是乳腺癌免疫治疗面临的巨大挑战。在jacob iii期试验中780名her2阳性患者接受pertuzumab和trastuzumab联合治疗，中位os仅改善了3.3个月，并没有统计学意义。同时，对于her-2呈现阴性的70％乳腺癌患者缺乏除化疗外的有效治疗方式。
12、人磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(hp4)是pebp家族的新成员，被鉴定为一种新型抗凋亡蛋白，在乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌细胞中表达水平升高，但在正常组织中表达水平较低，这使得hp4成为免疫治疗的一个重要靶点。临床标本检查显示，hp4在人乳腺癌组织中高表达，而在正常乳腺组织中低表达，可用于诱导靶向乳腺癌的抗原特异性细胞毒性t淋巴细胞(ctl)，成为乳腺癌免疫治疗的重要靶点。hp4能够在hla-a2.1/k中诱导肽特异性hla-a2.1限制性ctl反应转基因小鼠以及hla匹配乳腺癌患者的外周血淋巴细胞(pbls)中，激活树突状细胞(dc)。研究发现转移性乳腺癌细胞表达的hpebp4水平远高于非转移性乳腺癌细胞，并且hpebp4的表达水平与临床乳腺癌的转移呈正相关，hpebp4过表达显著促进了体外细胞侵袭，增加了体内淋巴结转移的发展。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种制备纳米颗粒肿瘤疫苗的重组基因及其应用和纳米颗粒肿瘤疫苗，本专利技术联合hp4和her-2双靶点修饰hbc vlps，制备肌肉注射用纳米颗粒肿瘤疫苗，在降低临床安全风险的同时，优化her-2肿瘤疫苗面临的问题和挑本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制备纳米颗粒肿瘤疫苗的重组基因，其特征在于，将HBc VLPs基因、Hp4表位基因和HER2表位基因串联，得到重组基因；
2.权利要求1所述重组基因在制备纳米颗粒肿瘤疫苗中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌。
4.一种表达载体，其特征在于，将权利要求1所述的重组基因连接到原始载体中，得到。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述原始载体包括pET28a质粒。
6.根据权利要求4或5所述的表达载体，其特征在于，所述重组基因连接到pET28a质粒的T7启动子下游。
7.一种纳米颗粒肿瘤疫苗，其特征在于，将权利要求4～6所述的表达载体转染大肠杆菌，表达后得到Hp4-HER2-HBc VLPs颗粒，自组装后得到纳米颗粒肿瘤疫苗。
8.根据权利要求7所述的纳米颗粒肿瘤疫苗，其特征在于，所述大肠杆菌包括大肠杆菌BL21。
9.权利要求7或8所述的纳米颗粒肿瘤疫苗在制备治疗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在
...【技术特征摘要】
1.一种制备纳米颗粒肿瘤疫苗的重组基因，其特征在于，将hbc vlps基因、hp4表位基因和her2表位基因串联，得到重组基因；
2.权利要求1所述重组基因在制备纳米颗粒肿瘤疫苗中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌。
4.一种表达载体，其特征在于，将权利要求1所述的重组基因连接到原始载体中，得到。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述原始载体包括pet28a质粒。
6.根据权利要求4或5所述的表达载体，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：王云龙，李玉林，毕胜利，程蕾，王继创，张怡青，王敏，王星兰，任磊，
申请(专利权)人：河南省生物工程技术研究中心，
类型：发明
国别省市：
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