一种新冠病毒抗原及其应用制造技术

本发明专利技术属于冠状病毒检测技术领域，具体涉及一种新冠病毒抗原及其应用。该抗原具有选自S蛋白的片段和选自N蛋白的片段，所述选自S蛋白的片段具有如SEQ ID NO.1‑5所示的氨基酸序列，所述选自N蛋白的片段具有如SEQ ID NO.6‑11所示的氨基酸序列，所述抗原可与新冠病毒抗体特异性结合。该抗原用于新冠病毒的检测时，可有效避免假阳性的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒抗原及其应用
本专利技术属于冠状病毒检测
，具体涉及一种新冠病毒抗原及其应用。
技术介绍
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)为β属的冠状病毒，是目前已知的第7种可感染人类的冠状病毒，其余6种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。该疾病以发热、干咳、乏力为主要表现，常伴有气促和呼吸困难等，在严重病例中，新冠肺炎可导致严重急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克，多功能衰竭甚至死亡。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异IgM和IgG抗体检测写进了国家卫生健康委于2020年3月3日发布的“新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)”，作为临床确诊标准，国家药品监督管理局(NMPA)也应急审批了广州万孚(胶体金试纸条)、英诺特(唐山)(胶体金试剂条)等多个抗体检测试剂盒。徐万洲等在19例核酸检测阴性但基于临床症状确诊的COVID-19患者中，有16例患者IgM阳性，其阳性率达到84.21％，有18例患者IgG阳性，其阳性率达到94.74％，说明抗体的检测可以有效地弥补核酸检测漏检的风险，发挥其在新型冠状肺炎的及时诊治及防控中的作用。但临床现也有反映出现了较多的假阳性，困扰临床决策。特异IgM和IgG免疫测定假阳性通常有以下两个方面的原因，一是试剂盒所用抗原本身的特异性及阳性判断值(Cut-offvalue)的设定；二是患者标本中存在导致免疫测定假阳性的内源性或外源性干扰物质。而试剂盒所用抗原本身的特异性是检测特异性的基础。这是由抗原决定簇和抗体的抗原结合区的空间构象决定的。抗体抗原结合区的空间构象是由该区的氨基酸序列来决定源。氨基酸的序列则由基因序列决定。抗体的特异性，并不是针对抗原，而是针对某个特定的空间构象。这就是为什么有的抗体可以识别道2个毫不相干的抗原。比如抗梅毒抗体，同时可以识别心磷脂。因此，优选特异性抗原片段对减少特异IgM和IgG免疫测定的假阳性有重要意义。SARS-CoV-2核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)位于病毒内部，在β属冠状病毒之间相对比较保守，与其它6种冠状冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)的N蛋白全长具有一定的同源性，检测时容易发生交叉反应性，因此筛选出同源性低，免疫性强的N蛋白片段进行组合，避免交叉反应性，是十分重要的。
技术实现思路
本专利技术提供一种新冠病毒抗原，以解决现有技术中新冠病毒检测特异性差的问题。本专利技术的第二目的在于提供了一种抗体。本专利技术的第三目的在于提供一种标记复合物。本专利技术的第四目的在于提供一种试剂盒本专利技术的目的还在于提供了上述中的任意一项或几项的应用。本专利技术的新冠病毒抗原采用如下技术方案：一种新冠病毒抗原，所述抗原具有选自S蛋白的片段和选自N蛋白的片段，所述选自S蛋白的片段具有如SEQIDNO.1-5所示的氨基酸序列，所述选自N蛋白的片段具有如SEQIDNO.6-11所示的氨基酸序列，所述抗原可与新冠病毒抗体特异性结合。作为进一步的优选技术方案，所述抗原的不同片段之间通过GGGGS连接肽连接。作为进一步的优选技术方案，所述抗原的氨基酸序列如SEQIDNO.12所示。本专利技术的抗体采用如下技术方案：一种抗体，所述抗体通过采用如上述任意一项所述的抗原作为免疫原免疫动物制备得到。例如，可通过将所述抗原用于免疫动物，制备得到抗所述抗原的抗体。本专利技术的抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体，其可用于制备新冠病毒检测试剂(例如，用作制备试剂盒的原料)或作为阳性对照等。本专利技术的标记复合物采用如下技术方案：一种标记复合物，所述标记复合物的组成包括如上述任意一项所述的抗原和标记物，所述标记物包括但不限于下述中的任意一种：胶体金、荧光免疫微球或辣根过氧化物酶。本专利技术的试剂盒采用如下技术方案：一种试剂盒，所述试剂盒包括下述中的任意一种或几种的组合：如上所述任意一项的抗原、如上所述的抗体和如上所述的标记复合物和固相载体。作为进一步优选的技术方案，所述试剂盒为ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括包被有如上述任意一项所述的抗原的包被板和辣根过氧化物酶标记的抗原。本专利技术的应用采用如下技术方案：如上述任意一项所述的抗原/如上所述的抗体/如上所述的标记复合物/如上所述的试剂盒中的任意一项或几项在制备新冠病毒检测试剂中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术的新冠病毒抗原可与新冠病毒抗体(对IgG、IgM均可检测)特异性结合，可有效避免新冠病毒检测假阳性的情况。本专利技术的新冠病毒抗原与其他冠状病毒不会发生特异性结合，可有效提高冠状病毒检测的特异性，避免将其他冠状病毒检测为新冠病毒的情况。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例11.1利用生物信息学手段，结合以往经验，筛选出下述优选的SARS-CoV-2的S片段：123-ATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYH-146(SEQIDNO.1)209-PINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGI-233(SEQIDNO.2)262-AAAYYVGYLQPRTFLLK-278(SEQIDNO.3)485-GFNCYFPLQSYGF-497(SEQIDNO.4)504-GYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPK-528(SEQIDNO.5)1.2筛选得到的优选的SARS-CoV-2的N片段如下：52-WFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRR-89(SEQIDNO.6)106-PRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDH(SEQIDNO.7)IGTRNPANNAAIVLQLPQGTT-166(SEQIDNO.8)217-AALALLLLDRL-227(SEQIDNO.9)243-GQTVTKK-249(SEQIDNO.10)267-AYNVTQA-273(SEQIDNO.11)1.3将上述多肽通过GGGGS连接肽将各部分进行连接，具体氨基酸序列如下：ATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHGGGGSPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGIGGGGSAAAYYVGYLQPRTFLLKGGGGSGFNCYFPLQSYGFGGGGSGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKGGGGSWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRGGGGSPRW本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新冠病毒抗原，其特征在于，所述抗原具有选自S蛋白的片段和选自N蛋白的片段，所述选自S蛋白的片段具有如SEQ ID NO.1-5所示的氨基酸序列，所述选自N蛋白的片段具有如SEQ ID NO.6-11所示的氨基酸序列，所述抗原可与新冠病毒抗体特异性结合。/n

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒抗原，其特征在于，所述抗原具有选自S蛋白的片段和选自N蛋白的片段，所述选自S蛋白的片段具有如SEQIDNO.1-5所示的氨基酸序列，所述选自N蛋白的片段具有如SEQIDNO.6-11所示的氨基酸序列，所述抗原可与新冠病毒抗体特异性结合。


2.根据权利要求1所述的抗原，其特征在于，所述抗原的不同片段之间通过GGGGS连接肽连接。


3.根据权利要求2所述的抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列如SEQIDNO.12所示。


4.一种抗体，其特征在于，所述抗体通过采用如权利要求1-3中任意一项所述的抗原作为免疫原免疫动物制备得到。


5.一种标记复合物，其特征在于，所述标记复合物的组成包括如权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王云龙，王继创，程蕾，张怡青，李玉林，王敏，郎艺洁，
申请(专利权)人：河南省生物工程技术研究中心，郑州倍赛泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41