一种重组新型冠状病毒COVID-19 S-RBD蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组新型冠状病毒COVID‑19 S‑RBD蛋白及其制备方法和应用。所述的制备方法通过将人工合成的S‑RBD融合蛋白基因构建进大肠杆菌表达系统，再通过特殊的包涵体复性技术，获得了表达量高、具有抗原性的可溶性纯化重组COVID‑19 S‑RBD蛋白；该重组蛋白制备方法操作简便、生产成本低廉、效率高，并且制得的重组蛋白可以用于制备检测新冠病毒的试剂条；该试剂条的使用效果经过本发明专利技术的验证，检测结果准确、效率高、结果通俗易懂，特别适用于大量人群的新冠病毒快速筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
冠状病毒是一个大型病毒家族，是许多家畜、宠物包括人类疾病的重要病原，可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。冠状病毒在系统分类类别属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。新型冠状病毒(COVID-19)属于β冠状病毒的Sarbecovirus亚属，是一类具有包膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，其颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60～140nm。新型冠状病毒感染后的临床症状与SARS病毒相似，从基因序列同源性上来说，COVID-19病毒基因组与SARS病毒具有80％的相似性，SARS-Cov-2与MERS-CoV的基因序列有40％的相似性。新型冠状病毒的传播途径主要是呼吸道飞沫传播和接触传播等，不同年龄段的人均可被感染，其中老年人、抵抗力较差以及守护在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组新型冠状病毒COVID-19 S-RBD蛋白的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：/n(1)将合成的DNA序列如SEQ ID No.1所示的S-RBD融合蛋白基因构建进大肠杆菌质粒中，得到S-RBD蛋白表达质粒；/n(2)将所述S-RBD蛋白表达质粒转化进大肠杆菌感受态细胞中培养，并挑选单菌落诱导表达后，离心收集菌体；/n(3)将得到的菌体在缓冲液中超声破碎，离心后再在缓冲液中漂洗2次，离心得到沉淀包涵体；/n(4)将沉淀包涵体溶解、超声破碎、离心后得到的上清液使用层析柱纯化洗脱纯化，收集洗脱液；/n(5)将洗脱液中加入还原剂后装入透析袋进行透析，得到的透析液经离心收集上清，则...

【技术特征摘要】
1.一种重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)将合成的DNA序列如SEQIDNo.1所示的S-RBD融合蛋白基因构建进大肠杆菌质粒中，得到S-RBD蛋白表达质粒；
(2)将所述S-RBD蛋白表达质粒转化进大肠杆菌感受态细胞中培养，并挑选单菌落诱导表达后，离心收集菌体；
(3)将得到的菌体在缓冲液中超声破碎，离心后再在缓冲液中漂洗2次，离心得到沉淀包涵体；
(4)将沉淀包涵体溶解、超声破碎、离心后得到的上清液使用层析柱纯化洗脱纯化，收集洗脱液；
(5)将洗脱液中加入还原剂后装入透析袋进行透析，得到的透析液经离心收集上清，则得到重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中诱导表达是在含20～50μg/ml卡那霉素的超级肉汤培养基中完成的。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中在透析过程中每4h更换一次缓冲液，在4℃搅拌透析；缓冲液的更换顺序为缓冲液1、缓冲液2、缓冲液3、PBS缓冲液更换2次；其中缓冲液1包括20mMTris-HCl，4M脲素、1mMEDTA、1mMβ-巯基乙醇、0.1％Tween-80、0.1M精氨酸；缓冲液2包括20mMTris-HCl、2M脲素、1mMEDTA、1mMβ-巯基乙醇、0.1％Tween-80、0.1M精氨酸；缓冲液3包括20mMTris-HCl、1M脲素、1mMEDTA、1mMβ-巯基乙醇、0.1％Tween-80、0.1M精氨酸。


4.由权利要求1所述的制备方法制备得到的重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白。


5.权利要求4所述的重组新型冠状病毒COVID-19S-RBD蛋白在用于制备筛查新型冠状病毒的检测器械中的应用。


6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：付理文，刘艳慧，娄珺，周伟，刘容，
申请(专利权)人：上海捷门生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31