一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于分子诊断技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术属于分子诊断
，具体涉及一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒
。

技术介绍

[0002]CRISPR
‑
Cas 系统是在原核生物中发现的一套适应性免疫系统，由成簇的
、
有规则间隔的短回文重复序列（
clusteredregularly interspaced short palindromic repeats
，
CRISPR
）及
CRISPR 相关蛋白（
CRISPR
‑
associated protein
，
Cas
）组成
。CRISPR
‑
Cas
系统的发现不仅在基因编辑方面的取得了革命性进展，而且在基于核酸的疾病和病原体诊断试剂开发等方面取得了突破性进展
。2017
年，根据
Cas13
反式切割活性的特征，张锋团队开发了
SHERLOCK (Specific High Sensitivity Enzymatic Reporter UnLOCKing)
检测寨卡病毒和登革病毒的特定菌株
。CRISPR
‑
Cas13a 的核酸检测技术主要依赖
Cas 蛋白的反式切割活性，而
Cas13 靶向
ssRNA。
当
Cas
蛋白与
crRNA
和靶核酸序列形成效应复合物时，
Cas
蛋白的切割活性和反式切割活性被激活，反式切割活性被激活后，非特异性的切割报告探针，进而释放出报告信号从而达到检测的效果
。
[0003]新型冠状病毒作为一种
RNA
病毒，极快的变异速度给目前诊断带来了一定的挑战
。
目前，新型冠状病毒变异株已成为新冠世界流行的主流
。
病毒基因组中的突变已经独立发生多次，并且几乎
80%
的反复突变产生非同义变化，从而使病毒进化和适应
。
变异株具有传染性强，潜伏期和隔代间期短，疾病严重程度增加等特点
。
基于此，迫切需要开发一种新冠变异病毒快速鉴别检测技术，为患者诊治策略的制定和调整提供更为精准的依据
。
例如专利
CN112522441A
公开了一种基于
CRISPR
‑
Cas
的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，该试剂盒将检测探针负载在检测试纸，设计
CRISPR
‑
Cas
系统的介导
RNA
，存在新型冠状病毒核酸时，激活
CRISPR
‑
Cas
系统切割检测试纸的检测探针，检测探针报告基团产生判断信号，专利中显示该试剂盒检测反应时间仅需
30
分钟，但是根据该反应过程分析，检测探针报告基团的释放仅仅依靠新型冠状病毒核酸激活
CRISPR
‑
Cas
蛋白的切割活性，存在检测灵敏度低，释放的检测探针报告基团信号不易判断的缺陷
。
[0004]那么，为了提高基于
CRISPR
‑
Cas
系统核酸检测的灵敏度和准确性，通常会与
RPA、PCR
等核酸你扩增技术相结合，这些扩增过程通常需要较长的反应时间，因此，如何在实现放大信号，提高检测灵敏度和准确性的同时，缩短反应时间成为了新型冠状病毒核酸检测试剂盒急需解决的技术问题
。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，
CRISPR
‑
Cas13a
系统与引物交换反应级联 (PER
，
primer exchange reaction)
相结合，以新型冠状病毒激活
CRISPR
‑
Cas13a
系统特异切割的探针作为引物进行
PER
反应，反应产物具有重复串联结构，重复串联结构结合信号指示剂，实现信号放大，实现新型冠状病毒核酸层析检测，缩短检测时间
。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，包括
Cas 13a、
介导
RNA、
荧光信号报告分子
、
发夹结构分子体系
、
探针引物
、
核苷酸原料；其中介导
RNA
与新型冠状病毒核酸的靶基因端互补，当所述的介导
RNA
与新型冠状病毒的核酸保守靶基因段互补时
Cas 13a
被激活，切断探针引物，切断的探针引物与发夹结构分子体系结合触发级联引物交换反应，生成产物，所述产物与荧光信号报告分子特异性结合，指示检测信号
。
[0007]可选的，所述介导
RNA
的5’
端重复子序列为5’‑
UAAUACGACUCACUAUAGGGGAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAAC
‑3’
，3’
端靶向序列为靶向新型冠状病毒
、
并与病毒互补的
28
个寡核苷酸特异序列
。
[0008]可选的，所述介导
RNA
的核酸序列如
SEQ NO.1~31
所示
。
[0009]可选的，所述探针引物序列结构为5’‑
M
‑
UUUUU
‑
N
‑3’
；所述发夹结构分子的序列结构包括5’
K
‑
L
‑
K
’‑
P
‑
Q
‑3’
，其中
M、N、K、L、K
’
、P、Q
分别代表寡核苷酸序列；其中
L
为发夹结构的单链区域，
K
与
K
’
为互补序列，
K
’
靠近3’
端的序列与
Q
互补，
Q
与
M
互补；序列
M
由三种核苷酸组成；核苷酸原料为组成序列
M
的三种核苷酸的互补核苷酸的混合物；切断的探针引物与发夹结构分子体系结合触发级联引物交换反应所生成的产物包括由序列
M
形成串联重复序列；荧光信号报告分子与串联重复序列特异性结合
。
[0010]可选的，所述探针引物序列结构为5’‑ꢀ
CATCATCATUUUUUTACTACTAC
‑3’
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，包括
Cas 13a、
介导
RNA、
荧光信号报告分子
、
发夹结构分子体系
、
探针引物
、
核苷酸原料；其中介导
RNA
与新型冠状病毒核酸的靶基因端互补，当所述的介导
RNA
与新型冠状病毒的核酸保守靶基因段互补时
Cas 13a
被激活，切断探针引物，切断的探针引物与发夹结构分子体系结合触发级联引物交换反应，生成产物，所述产物与荧光信号报告分子特异性结合，指示检测信号
。2.
如权利要求1所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述介导
RNA
的5’
端重复子序列为5’‑
UAAUACGACUCACUAUAGGGGAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAAC
‑3’
，3’
端靶向序列为靶向新型冠状病毒
、
并与病毒互补的
28
个寡核苷酸特异序列
。3.
如权利要求2所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述介导
RNA
的核酸序列如
SEQ NO.1~31
所示
。4.
如权利要求
1~3
任一项所述的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，其特征在于，所述探针引物序列结构为5’‑
M
‑
UUUUU
‑
N
‑3’
；所述发夹结构分子的序列结构包括5’
K
‑
L
‑
K
’‑
P
‑
Q
‑3’
，其中
M、N、K、L、K
’
、P、Q
分别代表寡核苷酸序列；其中
L
为发夹结构的单链区域，
K
与
K
’
为互补序列，
K
’
靠近...

【专利技术属性】
技术研发人员：王云龙，谭娅，王继创，李玉林，程蕾，王敏，王运从，
申请(专利权)人：河南省生物工程技术研究中心，
类型：发明
国别省市：