一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重制造技术

本发明专利技术及一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重

【技术实现步骤摘要】
一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重qRT
‑
PCR检测组合物、方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种禽类病毒检测
，尤其涉及一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物
、
方法及试剂盒
。

技术介绍

[0002]鸭的病毒性肝炎是一种急性
、
高传染性疾病，死亡率高达
50
％，临床表现以精神沉郁
、
神经症状为主，
1965
年在英国首次报道，最初将其称为鸭肝炎病毒，分为血清1型
、
血清2型
、
血清3型
。Gough
等在英国用电镜检查了
DHV
病例的肝脏样品，观察到星状病毒样颗粒，免疫保护试验证实该星状病毒毒株与
DHV
‑2抗原性相同，由此将
DHV
‑2鉴定为星状病毒
DAstV
，临床表现为病鸭精神不佳，喜卧，减料甚至不进料，死亡较急，发病当天死亡，往往不出现临床症状就倒地死亡，神经症状，死亡时仰卧死亡，呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏质脆
、
肿大，剖检病鸭无明显病变，部分病鸭肝脏出血，其他脏器均表现正常，眼观无炎性症状，鸭星状病毒主要感染1－2周龄的雏鸭
。
在我国，
1984
年从鸭中首次发现与星状病毒有关的病例
。
由于发病急，且无特效药，给养鸭业带来了巨大的损失
。
[0003]鸭圆环病毒特征是引起宿主的免疫抑制而导致继发感染或二重及多重感染，鸭圆环病毒感染
DuCV
的鸭子所表现的临床症状则主要表现为发育状况差，并且明显表现羽毛营养失调，在背部脊柱
(
的羽毛
)
尤其明显，许多羽毛羽轴出血，背部皮肤组织病理学检查主要表现为囊泡和围绕囊泡的组织异嗜性炎性渗出，内脏器官总的病理表现为鸭传染性浆膜炎协同感染的症状，近年来给世界养殖业造成了巨大的经济损失
。
[0004]目前普通
PCR
则因为具有简便适用
、
成本低廉的优点，更加适合在生产中推广应用，但是上述两种病原易发生混合感染，在鸭群中扩散较快，因此需要建立一种快速
、
准确
、
灵敏的检测方法迅速检测出上述两种病原，以及时采取预防确保鸭群的健康状况
。
目前常规的诊断方法，如动物实验
、
免疫学和病毒分离培养，在检测时时间长
、
敏感性低以及操作繁琐等缺点，不易于快速检测，
PCR
是实验室常用检测方法之一，其具有快速
、
灵敏
、
成本低
、
操作简单等优点；该方法不仅能进行快速确定病毒种类，还能检测病毒的早期感染和潜伏感染
。
但是检测时需要准备多份样品扩增多次才能确定感染的病毒类型，使得检测次数增多，无形之中延长检测时间，引起交叉感染
。
双重
PCR
是在单一
PCR
基础上建立起来，其优点在于通过一次
PCR
的反应，可以同时检测并鉴别两种病原，快速
、
高效且操作简单
。
目前国内外尚未报道可同时检测鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测方法
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物
、
方法及试剂盒
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物，包括
DAstV
基因的上游引物
DAstV
‑
BF、DAstV
‑
TF
下游引物
DAstV
‑
BR、DAstV
‑
TR
和探针
DAstV
‑
P
；
DUCV
基因的上游引物
DUCV
‑
3BF、DUCV
‑
3TF、
下游引物
DUCV
‑
3BR、DUCV
‑
3TR
和探针
DUCV
‑
P
，引物和探针的序列如下的两种：
[0007]上游引物
DAstV
‑
BF
：
CCTGAGAGATGAGGATAAAAC
；
[0008]下游引物
DAstV
‑
BR
：
GGTTTCTAACTAAGGTCATTCC
；
[0009]上游引物
DAstV
‑
TF
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；
[0010]下游引物
DAstV
‑
TR
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；
[0011]探针
DAstV
‑
P
：
ROX
‑
GGTGATGATAGACTCCTTTCTGTCTCTGAGG
‑
BHQ2
；
[0012]上游引物
DUCV
‑
3BF
：
CCCACGACTTATGTTATCT
；
[0013]下游引物
DUCV
‑
3BR
：
ACTGAGTCATACCGCCTTTA
；
[0014]上游引物
DUCV
‑
3TF
：
CGTGATTGGAAGACCGAAGT
[0015]下游引物
DUCV
‑
3TR
：
TTCCCGCGTGGTTTGTAATA
[0016]探针
DUCV
‑
P
：
FAM
‑
CACCGGAAAGAGCCGTTATGCATTTG
‑
TAMRA。
[0017]鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物，其特征在于：由
DAstV
基因的上游引物
DAstV
‑
TF、
下游引物
DAstV
‑
TR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物，其特征在于：由
DAstV
基因的上游引物
DAstV
‑
BF、DAstV
‑
TF
下游引物
DAstV
‑
BR、DAstV
‑
TR
和探针
DAstV
‑
P
；
DUCV
基因的上游引物
DUCV
‑
3BF、DUCV
‑
3TF、
下游引物
DUCV
‑
3BR、DUCV
‑
3TR
和探针
DUCV
‑
P
组成；所述引物和探针的序列如下的两种：上游引物
DAstV
‑
BF
：
CCTGAGAGATGAGGATAAAAC
；下游引物
DAstV
‑
BR
：
GGTTTCTAACTAAGGTCATTCC
；上游引物
DAstV
‑
TF
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；下游引物
DAstV
‑
TR
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；探针
DAstV
‑
P
：
ROX
‑
GGTGATGATAGACTCCTTTCTGTCTCTGAGG
‑
BHQ2
；上游引物
DUCV
‑
3BF
：
CCCACGACTTATGTTATCT
；下游引物
DUCV
‑
3BR
：
ACTGAGTCATACCGCCTTTA
；上游引物
DUCV
‑
3TF
：
CGTGATTGGAAGACCGAAGT
；下游引物
DUCV
‑
3TR
：
TTCCCGCGTGGTTTGTAATA
；探针
DUCV
‑
P
：
FAM
‑
CACCGGAAAGAGCCGTTATGCATTTG
‑
TAMRA。2.
根据权利要求1所述的鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测组合物，其特征在于：由
DAstV
基因的上游引物
DAstV
‑
TF
下游引物
DAstV
‑
TR
和探针
DAstV
‑
P
；
DUCV
基因的上游引物
DUCV
‑
3TF、
下游引物
DUCV
‑
3TR
和探针
DUCV
‑
P
组成；所述引物和探针的序列如下：上游引物
DAstV
‑
TF
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；下游引物
DAstV
‑
TR
：
AATGTCCGGCTCATACTTAACA
；探针
DAstV
‑
P
：
ROX
‑
GGTGATGATAGACTCCTTTCTGTCTCTGAGG
‑
BHQ2
；上游引物
DUCV
‑
3TF
：
CGTGATTGGAAGACCGAAGT
；下游引物
DUCV
‑
3TR
：
TTCCCGCGTGGTTTGTAATA
；探针
DUCV
‑
P
：
FAM
‑
CACCGGAAAGAGCCGTTATGCATTTG
‑
TAMRA。3.
一种包含权利要求2所述的检测组合物的双重
qRT
‑
PCR
检测试剂盒
。4.
根据权利要求3所述的双重
qRT
‑
PCR
检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1中的组合物；阳性对照：标准质粒
pUC57
‑
DAstV
和
pUC57
‑
DUCV
；阴性对照：灭菌
DEPC
水；所述荧光定量检测试剂为
RT
‑
PCR
反应预混试剂
Premix
酶，所述标准质粒
pUC57
‑
DAstV
和标准质粒
pUC57
‑
DUCV
的基因拷贝数均为
l
×
102拷贝
/
微升
。5.
一种鸭星状病毒和鸭圆环病毒双重
qRT
‑
PCR
检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
分别以
DAstV
和
DUCV
的
cDNA
和
DNA
为模板，利用权利要求1中所述的引物进行
PCR
扩增，取含
DAstV
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，杨佳美，哈卓，段铭，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：