一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽及应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽及应用。该融合肽包括N端的穿膜肽和C段的前导肽，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术根据生物学中心法则，研究了转录因子NR5A2核定位信号关键序列，依此设计合成了靶向抑制NR5A2入核转运的前导肽，并进一步制得融合肽，实验证实该融合肽可以显著抑制胰腺癌细胞的生长。实该融合肽可以显著抑制胰腺癌细胞的生长。实该融合肽可以显著抑制胰腺癌细胞的生长。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽及应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，更具体地，涉及一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽及应用。

技术介绍

[0002]胰腺癌是消化道常见恶性肿瘤之一，在肿瘤领域素有“癌症之王”的称号。据柳叶刀杂志记载，胰腺癌确诊后的五年生存率约10%，是预后最差的恶性肿瘤之一。
[0003]胰腺癌临床症状隐匿且不典型，是诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。胰腺癌发病率男性高于女性，男女之比为1.5～2:1，男性患者远较绝经前的妇女多见，绝经后妇女的发病率与男性相仿。
[0004]胰腺癌由于恶性程度高，手术切除率低，预后不良。尽管手术仍然是首要的治疗方法，但由于胰腺癌常常发现较晚，而丧失根治的机会，因此需要对胰腺癌进行综合治疗。迄今同大多数肿瘤一样，还没有一种高效和可完全应用的综合治疗方案。现在的综合治疗仍然是以外科治疗为主，放疗、化疗为辅，并在探讨结合免疫和分子等生物治疗的新方法。
[0005]因此，现有治疗手段仍不能满足临床胰腺癌个体化治疗需求，开发新型治疗靶点和药物势在必行。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽，解决了现有的临床胰腺癌个体化治疗需求，开发新型治疗靶点和药物的问题。
[0007]本专利技术第一方面是整合数据分析。
[0008]具体地，本专利技术通过整合分析TCGA数据、CCLE数据、GTEx数据和肿瘤细胞生长依赖基因数据，NR5A2特异性表达于胰腺癌中，提示NR5A2是一个有潜力的胰腺癌靶向治疗的靶点。
[0009]本专利技术第二方面提供一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽。
[0010]具体地，该融合肽包括N端的穿膜肽和C段的前导肽，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：(RKKRRQRRRESLKHGLTPIGAGLPDRHGSPIPARGRLVM)。
[0011]具体地，本专利技术中的所述穿膜肽可以为本领域常规的各种穿膜肽，包括但不限于TAT、Penetratin、Polyarginines、DPV1047、MPG、Pep
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1、pVEC、ARF(1
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22)、BPrPr(1
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28)、MAP、Transportan、p28、VT5、Bac 7(Bac 1
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24)、C105Y、PFVYLI或Pep
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7，本专利技术所用穿膜肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。(RKKRRQRRR)。
[0012]具体地，本专利技术的融合肽可以通过本领域常规的方法合成。
[0013]本专利技术第三方面提供上述前导肽在制备胰腺癌细胞生长抑制剂中的应用。
[0014]具体地，所述前导肽氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
[0015](ESLKHGLTPIGAGLPDRHGSPIPARGRLVM)。
[0016]具体地，本专利技术根据生物学中心法则，研究了NR5A2核定位信号关键序列，依此设计合成了靶向抑制NR5A2入核转运的前导肽，并进一步制得融合肽，实验证实该融合肽可以显著抑制胰腺癌细胞CAPAN
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2和PATU 8988t的生长。
[0017]本专利技术的有益效果在于：提供了一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽，可以满足临床胰腺癌个体化治疗需求，解决了胰腺癌治疗开发新型治疗靶点和药物的问题。
[0018]本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0019]通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。
[0020]图1为敲除NR5A2靶向抑制NR5A2高表达胰腺癌细胞的生长。
[0021]图2为敲低NR5A2靶向抑制NR5A2高表达胰腺癌细胞的生长。
[0022]图3为在线工具预测显示NR5A2核定位信号氨基酸序列。
[0023]图4为p3xFLAG
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Myc
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CMV
™‑
25空载质粒图谱。
[0024]图5为免疫荧光实验证实核定位信号缺失抑制NR5A2入核转运。
[0025]图6为融合肽作用第三天和第四天，显著抑制胰腺癌细胞CAPAN
‑
2的生长。
[0026]图7为融合肽作用第三天和第四天，显著抑制胰腺癌细胞PATU 8988t的生长。
具体实施方式
[0027]下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。
[0028]实施例中未注明具体条件者，皆按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0029]实施例1：本实施例用于说明干预NR5A2特异性抑制NR5A2高表达胰腺癌细胞的生长。
[0030]1、癌症细胞生长依赖基因分析1.1 全基因组敲除文库筛选数据分析登录Depmap portal (https://depmap.org/portal/)门户网站，依次选择“Data Explorer”，然后输入基因名“NR5A2”，选择“CRISPR (DepMap 22Q2 Public+Score, Chronos)”，点击展开最下方链接“See pages for”，展示“NR5A2 Overview”后下载结果，如图1所示。
[0031]1.2 全基因组敲低文库筛选数据分析登录Depmap portal (https://depmap.org/portal/)门户网站，依次选择“Data Explorer”，然后输入基因名“NR5A2”，选择“RNAi (Achilles+DRIVE+Marcotte, DEMETER2)”，点击展开最下方链接“See pages for”，展示“NR5A2 Overview”后下载结果，如图2所示。
[0032]图1和图2中每一个圆圈代表一个胰腺癌细胞系，圆圈大、小表示NR5A2表达高、低；彩色表示突变；细胞生长依赖参数CERES或DEMETER2数值< 0表示NR5A2促进细胞生长，>0表示NR5A2抑制细胞生长。
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1处红线为阈值，红线左侧表示NR5A2显著影响细胞生长，右侧表示
NR5A2影响细胞生长不显著。由图1可以看出，敲除NR5A2靶向抑制NR5A2高表达胰腺癌细胞的生长，由图2可以看出，敲低NR5A2靶向抑制NR5A2高表达胰腺癌细胞的生长。
[0033]实施例2：本实施例用于说明NR5A2核定位信号肽影响NR5A2入核转运。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽，其特征在于，该融合肽包括N端的穿膜肽和C段的前导肽，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.如权利要求1所述的一种抑制NR5A2入核转运的靶向融合肽，其特征在于，所述穿膜肽为TAT、Penetratin、Polyarginines、DPV1047、MPG、Pep
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1、pVEC、ARF(1
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22)、BPrPr(1
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28)、MAP、Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：周敏，张小蒙，郭焱，裴冬，商干伟，张曼，孙菊，
申请(专利权)人：盐城市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：