【技术实现步骤摘要】
一种用于生产GDP
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岩藻糖的基因工程菌及其应用
[0001]本专利技术涉及基因工程领域,特别是涉及一种用于生产GDP
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岩藻糖的基因工程菌。
技术介绍
[0002]母乳含有大量由乳糖、D
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葡萄糖、D
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半乳糖、乙酰葡萄糖胺、L
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岩藻糖和唾液酸组成的母乳低聚糖,是母乳中第三丰富的固体组分。母乳低聚糖的功能涉及广泛的生物学过程,比如可以预防病原体感染、改善免疫系统反应、减少炎症进程等,在婴幼儿的成长发育中起着重要的作用。在母乳低聚糖中,岩藻糖基化低聚糖的含量是最高的。尽管岩藻糖基化低聚糖的化学合成早已实现,但该方法非常昂贵和费力,伴随着多重保护和脱保护步骤,这种复杂性使其无法适用于工业生产。相比而言,生物合成通过糖基转移酶的特异性提供了更高的效率。岩藻糖基化低聚糖的生产需要GDP
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岩藻糖作为供体,因此GDP
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岩藻糖的体内积累是岩藻糖基化低聚糖大规模生产的限制因素。
[0003]GDP
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岩藻糖在胞质内有两种合成途径,分别为从头合成途径以及补救途径。从头合成途径存在于原核生物和真核生物中,利用甘油、葡萄糖、蔗糖等通过体内代谢途径形成果糖
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磷酸,果糖
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磷酸通过甘露糖
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磷酸异构酶 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于生产GDP
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岩藻糖的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌在本底菌株上表达了来源于柠檬酸杆菌(Citrobacter)的甘露糖
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磷酸异构酶(manA)、磷酸甘露糖变位酶(manB)、甘露糖
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磷酸鸟嘌呤基转移酶(manC)、GDP
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甘露糖
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4,6
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脱氢酶(gmd)和GDP
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岩藻糖合成酶(fcl)。2.根据权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述本底菌株为大肠杆菌JM109、大肠杆菌BL21(DE3)、大肠杆菌Nissle、大肠杆菌K
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12、枯草芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌或柠檬酸杆菌中的一种;优选地,所述本底菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的基因工程菌,其特征在于,所述柠檬酸杆菌为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)、或克氏柠檬酸杆菌(Citrobacter koseri)中的一种;优选地,所述柠檬酸杆菌为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)ATCC 29935。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的基因工程菌,其特征在于,所述来源于柠檬酸杆菌的甘露糖
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磷酸异构酶(manA)的核苷酸序列与SEQ ID NO.1相比,具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性,优选为SEQ ID NO.1;优选地,所述来源于柠檬酸杆菌的磷酸甘露糖变位酶基因(manB)的核苷酸序列与SEQ ID NO.2相比,具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性,优选为SEQ ID NO.2;优选地,所述来源于柠檬酸杆菌的甘露糖
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磷酸鸟嘌呤基转移酶基因(manC)的核苷酸序列与SEQ ID NO.3相比,具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性,优选为SEQ ID NO.3;优选地,所述来源于柠檬酸杆菌的GDP
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【专利技术属性】
技术研发人员:刘振云,程丰伟,郭涛,
申请(专利权)人:苏州一兮生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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