一种重组大肠杆菌及其在连续分泌产人表皮生长因子中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组大肠杆菌及其在连续分泌产人表皮生长因子中的应用，以分泌生产hEGF的大肠杆菌BL21

【技术实现步骤摘要】
一种重组大肠杆菌及其在连续分泌产人表皮生长因子中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程技术和发酵工程领域，具体涉及一种重组大肠杆菌及其在连续分泌产人表皮生长因子中的应用。

技术介绍

[0002]随着医药蛋白需求的不断增加，医药蛋白的生物合成受到人们更多的关注，开发高效的蛋白质生物生产工艺可为蛋白生产提供强大助力。在诸多蛋白生产宿主中，大肠杆菌具有发酵周期短，容易控制等优势被广泛使用。然而，由于大肠杆菌分泌蛋白质的能力很差，大肠杆菌商业化生产重组蛋白仍然是一个挑战。为了提高大肠杆菌的蛋白质分泌效率，人们尝试了很多方法，如选择高效的信号肽(如OmpA和PelB的信号序列)引导蛋白质向分泌通路的转移；对参与跨膜运输的关键转运蛋白或辅助蛋白进行修饰也被应用于提高蛋白质的分泌效率；此外，融合蛋白和分子伴侣的共表达也被证明可以增加蛋白质的表达和胞外分泌。
[0003]重组人表皮生长因子(rhEGF)可以促进细胞增殖，广泛应用于临床及美容行业。据文献报道，基于PelB信号肽已成功实现hEGF在大肠杆菌BL21(DE3)中的细胞外表达(中国专利号C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，以分泌生产hEGF大肠杆菌为BL21
‑
hEGF为宿主，对大肠杆菌BL21
‑
hEGF采用以下方式继续进行改造：强化dgcC基因、csgD基因、bcsA基因、bcsB基因中的任意一个基因的表达。2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的dgcC基因、csgD基因、bcsA基因、bcsB基因，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1
‑
SEQ ID No.4所示。3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的大肠杆菌BL21
‑
hEGF宿主是大肠杆菌BL21(DE3)的改造菌株，即在出发菌株大肠杆菌BL21(DE3)的基因组上整合表达了人表皮生长因子基因。4.权利要求1所述的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在大肠杆菌BL21(DE3)基因组中插入人表皮生长因子基因构建得到产人表皮生长因子的大肠杆菌BL21
‑
hEGF；(2)将dgcC基因、csgD基因、bcsA基因和bcsB基因中的任意一个基因导入质粒中，获得重组质粒；(3)将步骤(2)获得的重组质粒热转至步骤(1)构建的大肠杆菌BL21
‑
hEGF感受态中，在含有50μg/mL硫酸卡那霉素抗性的LB平板上筛选阳性转化子，得到重组菌株BL21
‑
dgcC
+
，BL21
‑
csgD
+
，BL21
‑
bcsA
+
或BL21
‑
bcsB
...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳东，张冲，王振宇，陈勇，孙秀娟，朱晨杰，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：