一种提高大肠杆菌鲁棒性的重组菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种提高大肠杆菌鲁棒性的重组菌及其构建方法；通过将甲基乙二醛合酶基因mgsA替换为来自酵母的截短的角鲨烯合酶基因tErg9；在此基础上将磷酸乙酰转移酶基因pta替换为来自酸热脂环酸芽孢杆菌的角鲨烯

【技术实现步骤摘要】
一种提高大肠杆菌鲁棒性的重组菌及其构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及微生物合成生物学领域，具体涉及一种提高大肠杆菌鲁棒性的重组菌及其构建方法，尤其涉及一种提高大肠杆菌耐受性和产物合成能力的重组菌及其构建方法。

技术介绍

[0002]生物质是一种可再生的清洁资源，通过生物制造技术，可以被转化为燃料、大宗化学品和天然产物，从而部分替代石油化工炼制和植物提取。目前，在工业生物技术中，一些重要的微生物，包括细菌和酵母，已经被广泛应用于发酵过程，作为细胞工厂以生产药品、保健品、酶、食品成分、燃料和生物化学品(Marta Tous Mohedano et al.,2022)。为了满足商业需求，微生物细胞通常需要被改造，用于有效地生物合成有价值的化学物质，最终实现特定的指标，如效度、产量和生产力。微生物发酵具有成本低、无化学残留物、产量高等明显优点，被认为是生物制造的核心，而其中的大肠杆菌由于具有遗传背景清晰、生理背景明确、易于培养、迭代时间短、遗传操作手法成熟等一系列优点，被作为最常用的底盘细胞广泛用于微生物细胞工厂的构建。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲁棒性提高的重组大肠杆菌，其特征在于，为引入了非天然膜组分hopanoids的重组大肠杆菌；非天然膜组分hopanoids的合成是通过大肠杆菌內源MEP途径结合引入的外源人工合成途径进行。2.根据权利要求1所述的鲁棒性提高的重组大肠杆菌，其特征在于，将大肠杆菌中的甲基乙二醛合酶基因mgsA替换为角鲨烯合酶基因tErg9，并运用人工启动子策略上调tErg9的表达；将磷酸乙酰转移酶基因pta替换为角鲨烯
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藿烯环化酶基因shc，并运用人工启动子策略上调shc的表达，得到重组工程菌。3.根据权利要求2所述的鲁棒性提高的重组大肠杆菌，其特征在于，还包括对所得重组工程菌內源MEP途径关键限速酶进行人工调控的步骤。4.根据权利要求3所述的鲁棒性提高的重组大肠杆菌，其特征在于，所述对內源MEP途径关键限速酶进行人工调控是将1
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脱氧
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D
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木酮糖
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磷酸合酶基因Dxs和异戊烯基焦磷酸异构酶基因idi的启动子分别替换为人工增强启动子M1
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37和M1
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46；所述M1
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37的核苷酸序列包括SEQ ID NO.6所示，M1
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46的核苷酸序列包括SEQ ID NO.7所示。5.一种根据权利要求2所述的鲁棒性提高的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)根据所要替换的基因mgsA，所需整合的M1
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tErg9人工调控元件，构建相应的pTargetF
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N20质粒及DonorDNA；根据所要替换的基因pta，所需整合的M1
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shc人工调控元件，构建相应的pTargetF
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N20质粒及DonorDNA；(2)将其中一种pTargetF
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N20质粒及DonorDNA采用电转化法转化至含有pCas质粒的大肠杆菌感受态中；诱导pCas质粒上sgRNA的转录，消除pTargetF
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N20质粒并筛选出基因改造成功的菌株；(3)将另一种未转化的pTargetF
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N20质粒及DonorDNA转化至步...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭在高，孙文杰，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：