A1CF抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种A1CF抑制剂，其在HBV感染，特别是慢性HBV感染的治疗中使用。本发明专利技术特别地涉及A1CF抑制剂用于使cccDNA，诸如HBV cccDNA去稳定的用途。本发明专利技术还涉及与A1CF互补并且能够降低A1CF mRNA的水平的核酸分子。本发明专利技术还包括一种药物组合物及其在HBV感染的治疗中的用途。疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】A1CF抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途


[0001]本专利技术涉及A1CF抑制剂，其在乙型肝炎病毒(HBV)感染，特别是慢性HBV感染的治疗中使用。本专利技术特别地涉及A1CF抑制剂用于使cccDNA，诸如HBV cccDNA去稳定的用途。本专利技术还涉及核酸分子，诸如包括siRNA、shRNA和反义寡核苷酸的寡核苷酸，该寡核苷酸与A1CF互补并且能够降低A1CF的表达。本专利技术还包括一种药物组合物及其在HBV感染的治疗中的用途。

技术介绍

[0002]乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(HBV)引起的传染病，乙型肝炎病毒是一种小型的嗜肝病毒，其可通过反转录复制。慢性HBV感染是导致严重肝病(诸如肝硬化和肝细胞癌)的关键因素。目前对慢性HBV感染的治疗是基于施用聚乙二醇化的1型干扰素或核苷(核苷酸)类似物的，诸如拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺，它们可靶向病毒聚合酶(一种多功能反转录酶)。治疗是否成功通常以乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的损失量来衡量。然而，由于感染后乙型肝炎病毒DNA仍然存在于体内，因此很难完全清除HBsAg。HBV持续性是由附加体形式的HBV基因组介导的，该基因组稳定地存在于细胞核中。这种附加体形式被称为“共价闭合环状DNA”(cccDNA)。cccDNA可作为所有HBV转录本的模板，包括前基因组RNA(pgRNA，一种病毒复制中间体)。少量cccDNA拷贝的存在可能足以再次引发全面的HBV感染。目前对HBV的治疗并不针对cccDNA。然而，慢性HBV感染的治愈需要消除cccDNA(由Nassal,Gut.2015年12月；64(12):1972
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84.doi:10.1136/Gutjnl
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2015
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309809综述)。
[0003]A1CF(APOBEC1complementation factor(互补因子))是载脂蛋白B mRNA编辑酶复合物(负责将Gln的CAA密码子转录后编辑为UAA密码子以终止载脂蛋白B mRNA)的组分。将终止密码子引入载脂蛋白B mRNA会改变胃肠道中的脂质代谢。编辑酶复合物包含由胞苷脱氨酶APOBEC
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1(载脂蛋白B mRNA编辑酶1)组成的最小核心和由A1CF基因编码的互补因子。A1CF蛋白具有三个不相同的RNA识别基序并且属于RNA结合蛋白的hnRNP R家族。它与载脂蛋白B mRNA结合并且可能负责将催化亚基APOBEC1与mRNA对接，以使其脱氨其靶标胞嘧啶(参见Chester等人,EMBO J.2003Aug1；22(15):3971
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82)。
[0004]关于载脂蛋白B mRNA编辑酶复合物的许多报道都集中在胞苷脱氨酶APOBEC1上，而不是在APOBEC1互补因子上。已经表明，APOBEC1不仅编辑载脂蛋白B mRNA，还编辑包括HBV的病毒基因组。
[0005]在HBV复制的小鼠模型中，Renard等人表明小鼠APOBEC1在体内编辑HBV(Renard等人,J Mol Biol.2010Jul 16；400(3):323
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34.doi:10.1016/j.jmb.2010.05.029)。相反，大鼠APOBEC1不抑制HBV DNA产生(等人,Hepatology.2005Aug；42(2):301
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9)。
[0006]Gonzalez等人表明人APOBEC1编辑HBV DNA。在用HBV和人APOBEC1共转染的细胞中，在HBV基因组中识别到几个G到A超突变。此外，人APOBEC1的存在影响了HBV DNA的复制。具体而言，已表明APOBEC1的表达增加导致HBV DNA量减少(Gonzalez等人,
Retrovirology.2009Oct 21；6:96.doi:10.1186/1742
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4690
‑6‑
96)。
[0007]据我们所知，在cccDNA的稳定性和维持性方面，从未将A1CF识别为cccDNA依赖性因子，也没有有人提出将抑制A1CF的分子用作cccDNA去稳定剂用于治疗HBV感染。
[0008]此外，据我们所知，WO 2016/142948中提出了可能与A1CF表达的调节相关的寡核苷酸的唯一公开。然而，WO 2016/142948涉及改变包括A1CF的许多列出的目标的剪接，以产生可变剪接变体。然而，寡核苷酸是编码剪接因子结合位点的诱饵寡核苷酸，并且因此不与这样的目标结合。WO 2016/142948还提到了一系列治疗，其包括：癌症、炎症、免疫紊乱、神经退行性变、阿尔茨海默病、帕金森病、病毒感染(HIV、HSV、HBV)。然而，没有靶向A1CF的寡核苷酸及其在HBV中的用途的具体实例。
[0009]专利技术目的
[0010]本专利技术表明，在HBV感染细胞中A1CF的抑制与cccDNA的量的减少之间存在关联，其与HBV感染者的治疗有关。本专利技术的目的是识别减少HBV感染细胞中cccDNA的量的A1CF抑制剂。此类A1CF抑制剂可用于治疗HBV感染。
[0011]本专利技术进一步识别了新型核酸分子，其能够在体外和体内抑制A1CF的表达。

技术实现思路

[0012]本专利技术涉及靶向核酸的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够调节A1CF的表达并治疗或预防与A1CF功能有关的疾病。
[0013]因此，一方面，本专利技术提供了一种A1CF抑制剂，其在治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗和/或预防中使用。特别地，一种能够减少HBV cccDNA和/或HBV前基因组RNA(pgRNA)的量的A1CF抑制剂是有用的。此类抑制剂有利为长度是12个至60个核苷酸的核酸分子，该核酸分子能够减少A1CF mRNA。
[0014]在另一方面，本专利技术涉及12个至60个核苷酸(诸如12个至30个核苷酸)的核酸分子，其包含与哺乳动物A1CF(例如人A1CF、小鼠A1CF或食蟹猴A1CF)至少90％互补(诸如完全互补)的至少10个核苷酸(特别是16个至20个核苷酸)的连续核苷酸序列。此类核酸分子能够在表达A1CF的细胞中抑制A1CF的表达。抑制A1CF允许细胞中存在的cccDNA的量减少。核酸分子可以选自单链反义寡核苷酸、双链siRNA分子或shRNA核酸分子(特别是过化学方法产生的shRNA分子)。
[0015]本专利技术的另一方面涉及抑制A1CF的表达和/或活性的单链反义寡核苷酸或siRNA
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s。特别地，包含一个或多个2'糖修饰的核苷和一个或多个硫代磷酸酯键合的经修饰的反义寡核苷酸或经修饰的siRNA(其减少A1CF mRNA)是有利的。
[0016]在另一方面，本专利技术提供药物组合物，该药物组合物包含本专利技术的A1CF抑制剂，诸如本专利技术的反义寡核苷酸或siRNA以及药用赋形剂。
[0017]在另一方面，本专利技术提供了用于调节表达A1CF的靶细胞中的A1CF表达的体内或体外方法，该方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种A1CF(APOBEC1互补因子)抑制剂，其在乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗中使用。2.根据权利要求1所述使用的A1CF抑制剂，其中所述HBV感染是慢性感染。3.根据权利要求1或2所述使用的A1CF抑制剂，其中所述A1CF抑制剂能够减少HBV感染细胞中的cccDNA(共价闭合环状DNA)的量。4.根据权利要求1至3中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中所述抑制剂为长度为12个至60个核苷酸的核酸分子，所述核酸分子包含与哺乳动物A1CF靶序列，特别是人A1CF靶序列至少95％互补，诸如完全互补的、长度为至少12个核苷酸的连续核苷酸序列，并且所述抑制剂能够减少A1CF mRNA在表达所述A1CF mRNA的细胞中的表达。5.根据权利要求1至4中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中所述抑制剂选自由单链反义寡核苷酸、siRNA和shRNA组成的组。6.根据权利要求1至5中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中哺乳动物A1CF靶序列选自由以下项组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11。7.根据权利要求4至6中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中所述连续核苷酸序列与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的靶序列至少98％互补，诸如完全互补。8.根据权利要求3至7中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中所述HBV感染细胞中的cccDNA的量减少至少60％。9.根据权利要求4至7中任一项所述使用的A1CF抑制剂，其中所述A1CF mRNA减少至少60％。10.一种长度为12个至30个核苷酸的核酸分子，其包含与哺乳动物A1CF靶序列，特别是人A1CF靶序列90％互补、诸如完全互补的、至少12个核苷酸的连续核苷酸序列，其中所述核酸分子能够抑制A1CF mRNA的表达。11.根据权利要求10所述的核酸分子，其中所述连续核苷酸序列与选自由以下项组成的组的序列完全互补：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11。12.根据权利要求10或11所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含长度为12个至25个，诸如16个至20个核苷酸的连续核苷酸序列。13.根据权利要求10至12中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子是RNAi分子，诸如双链siRNA或shRNA。14.根据权利要求10至12中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为单链反义寡核苷酸。15.根据权利要求14所述的核酸分子，其中所述单链反义寡核苷酸能够募集RNA酶H。16.根据权利要求10至15中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个2'糖修饰的核苷。17.根据权利要求16所述的核酸分子，其中所述一个或多个2'糖修饰的核苷独立地选自由以下项组成的组：2'
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O
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烷基
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RNA、2'
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O
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甲基
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RNA、2'
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烷氧基
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RNA、2'
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甲氧基乙基
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RNA、2'
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氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：