一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用。本发明专利技术序列是针对2019

【技术实现步骤摘要】
一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用


[0001]本专利技术涉及一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA及其应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]新型冠状病毒SARS
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CoV
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2，由该病毒引起的疾病被称为COVID
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19。SARS
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CoV
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2主要通过接触途径和气溶胶途径传播。病毒进入人体后，其表面的刺突糖蛋白(S蛋白)与宿主细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合然后进入细胞。进入细胞的SARS
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CoV
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2病毒内化后释放出遗传物质RNA，宿主细胞利用胞内原料对其基因序列进行复制和翻译，进而组装形成大量的子代病毒，子代病毒随后通过胞吞途径释出细胞，开始对其他的宿主细胞进行新一轮感染。ACE2主要表达在于我们肺、喉咙和肠道的细胞表面，因此这些器官也最容易受到SARS
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CoV
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2病毒的攻击。
[0003]在新冠治疗药物方面，主要分为两种，分别是以瑞德西韦(Remdesivir)和莫诺拉韦(Molnupiravir)为代表的核苷类似物，以及以维德到帕克斯(Paxlovid)和格雷斯(Xocova)为代表的病毒蛋白酶抑制剂。其中辉瑞公司的Paxlovid由于临床疗效显著，副作用也相对较轻而成为主流新冠治疗药物。然而，Paxlovid常常与一些常用药物产生交叉反应，引起严重的副作用，这大大限制了新冠治疗药物对高危人群的覆盖范围。此外，病毒蛋白酶抑制剂药物在过去治疗HIV/AIDS和丙型肝炎中，最后由于病毒产生耐药性而快速失效，国外也发现了耐蛋白酶抑制剂的新病毒变异体。所有这些说明在新冠病毒感染迅速蔓延的情况下，仍需继续推进新药研发，提前为下一代药物做好准备。在预防医学方面，临床资料显示，疫苗并不能有效阻断病毒的感染和传播。在缺乏有效药物的情况下，目前的防疫策略被迫退守，重点放在降低重症和死亡率，无法主动出击，阻止病毒传播。
[0004]SARS
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CoV
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2基因组复制由Nsps蛋白主导的多亚基复制/转录复合物介导，其核心成分为RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，RdRp的核心位点为催化亚基nsp12。NSP12属于非结构蛋白(nsp)，它有两个辅因子NSP7和NSP8。nsp12以一种引物依赖的方式催化三磷酸核苷(NTPs)，然后形成磷酸二酯键，与nsp7和nsp8形成复合物后，获得了连续合成大RNAs的能力。此外，nsp8还具有引物酶特性，可以催化RNA引物的合成，从而使新型冠状病毒能够从头合成RNA。冠状病毒家族的RdRp高度保守，SARS
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CoV
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2与SARS
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CoV RdRp的氨基酸序列相同96％。虽然已经获得了大量关于SARS
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CoV
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2RdRp蛋白的结构信息，但针对该靶点的药物开发相对缺乏。目前，RdRp抑制剂包括瑞德西韦(Remdesivir)、法匹拉韦(Favipiravir)、加里斯韦(Galidesivir)等广谱抗病毒药物。瑞德西韦(Remdesivir)，又译伦地西韦，商品名Veklury，是由美国吉利德科学公司开发的一种新型实验性广谱抗病毒药物，用来针对埃博拉病毒及被认为可以有效抑制呼吸道上皮细胞中SARS病毒和MERS病毒的复制。瑞德西韦本身是前药，经生物转化作用变为核糖核苷酸类似物之抑制剂，能够抑制病毒的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)。FDA批准瑞德西韦成为第一个治疗2019冠状病毒病的药物。但是世卫组织支持的研究结果发现该药物对该病毒疗效甚微。
[0005]病毒进入宿主细胞后，通过合成两种复制酶蛋白pp1a和pp1ab迅速开始其病毒复制周期，然后被类木瓜蛋白酶(PL pro)和3C样蛋白酶(3CL pro)切割成16个非结构蛋白(Nonstructural protein，NSP)。其中包括nsp12，也被称为RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase，RdRp)，这是一种在病毒复制过程中发挥重要作用的蛋白酶。RdRp结构包括RdRp结构域和具有核苷转移酶活性的N
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端结构域。NiRAN结构域是一种假激酶，参与RNA分子帽的合成，这种分子帽可以保护病毒RNA不被宿主细胞的免疫系统检测和识别，并保护它不受核酸酶的影响。病毒缺失这种RNA分子帽，病毒就会停止复制，也就不能继续感染其它宿主细胞。NiRAN结构域将病毒RNA转移到病毒的另一种非结构蛋白NSP9上，两者形成一种RNA
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蛋白中间体，这种RNA
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蛋白中间体对冠状病毒帽的形成至关重要。病毒NSP12还被发现通过抑制干扰素
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β启动子、IFN启动子和IRF 3的核转运来抑制宿主抗病毒反应。另有中国浙江大学的研究团队发现，40℃的热激疗法能够降解SARS
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CoV
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2NSP12蛋白酶，减少COVID
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19患者体内病毒RNA的复制，防止更多的病毒传播。
[0006]siRNA新型冠状病毒药物方面，中国自主研发的a类抗冠状病毒新药、全球首个全修饰吸入小核酸新药SNS812已获美国FDA批准进入临床，并完成首次人体给药。它有机会对抗新型冠状病毒的快速进化和流感化影响，成为对抗新型冠状病毒基因突变的最佳治疗方法之一。这表明siRNA治疗新冠有着广阔的市场和潜在的巨大能力。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供了干扰新冠病毒的siRNA。
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA，所述的siRNA的正义链的序列为5
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GGAGUAUGCUGAUGUCUUUCAUU
‑3’
(SS)，反义链的序列为5
’‑
UGAAAGACAUCAGCAUACUCCUG
‑3’
(AS)。
[0009]本专利技术中的SS链3
’
端含有rUrU结构，为两个悬挂的碱基尾巴，不与AS链配对。
[0010]本专利技术中，所述的siRNA特异性靶向2019
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nCOV
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Nsp12基因。所述2019
‑
nCOV
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Nsp12，特异性指奥秘克戎BA.1毒株和奥秘克戎BA.2毒株，其余同源性高的毒株不一一列举。
[0011]进一步地，所述的siRNA还包括对其正义链和/或反义链进行化学修饰。
[0012]进一步地，所述的化学修饰包括甲氧基修饰、氟代修饰中的一种或两种。
[0013]进一步地，所述的化学修饰是将其正义链从5
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端起第1、3、5、7、9、10、11、13、15、17、19本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA，其特征在于，所述的siRNA的正义链的序列为5
’‑
GGAGUAUGCUGAUGUCUUUCAUU
‑3’
，反义链的序列为5
’‑
UGAAAGACAUC AGCAUACUCCUG
‑3’
。2.根据权利要求1所述的抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA，其特征在于，所述的siRNA还包括对其正义链和/或反义链进行化学修饰。3.根据权利要求2所述的抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA，其特征在于，所述的化学修饰包括甲氧基修饰、氟代修饰中的至少一种。4.根据权利要求2所述的抑制奥秘克戎Nsp12基因的siRNA，其特征在于，所述的化学修饰是将其正义链从5
’
端起第1、3、5、7、9、10、11、13、15、17、19、21、23位碱基中核糖C
‑2’<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李萍，徐维勇，蒙羽涵，
申请(专利权)人：硅羿科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：