促进ABCG2基因表达的saRNA及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及一种促进ABCG2基因表达的saRNA及其应用；首次设计了靶向ABCG2基因的saRNA，包括人类ABCG2saRNA为saRNA

【技术实现步骤摘要】
促进ABCG2基因表达的saRNA及其应用

：
[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种促进ABCG2基因表达的saRNA及其在制备治疗高尿酸血症或痛风药物中的应用。

技术介绍
：
[0002]血尿酸(Uric acid,UA)在体内的作用具有两面性。当UA进入细胞后，通过激活NADPH氧化酶，成为促氧化剂，引起氧化应激。而在细胞外环境，UA可以起到很强的抗氧化的作用，是血浆中主要的抗氧化分子之一，对血液的抗氧化能力的贡献可能大于50％。
[0003]但是，血清尿酸(Serum uric acid，SUA)浓度过高，会引起了高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)的发生，进而引起其他疾病。近年来，HUA的发病率呈现上升态势和年轻化的特点。在美国，无症状HUA患者占普通人群的比例达到了20％。HUA引起的氧化应激会导致DNA损伤、酶的氧化和失活、炎性细胞因子的产生和细胞凋亡，会影响包括肾脏和小肠在内的多个器官和系统。即使是轻度的HUA也会导致肾脏损伤，包括肾纤维化、肾小球硬化、肾间质纤维化、肾炎等多种方面。HUA还会引起ROS生成增加，引起肠道的通透性增加。HUA的发生还与代谢综合征密切相关，包括高血压、糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖等。HUA还被看作是肾脏疾病、心血管疾病和炎症的预后指标。
[0004]最典型的是，高的SUA会导致痛风。在全球范围内，痛风的发病率为0.1
‑
10％，并且在发达国家的发病率越来越高。当SUA浓度超过其饱和浓度时，会产生尿酸钠(MSU)晶体，沉积于关节等部位。尿酸盐结石和尿酸盐结晶会引起急性肾脏损伤。
[0005]自从小激活RNA(small activing RNA,saRNA)现象发现以来，已经有多项研究通过转染saRNA来实现提高目基因表达的目的。通过saRNA，通常可以提高2～5倍目的基因的表达，单次转染，可以维持提高蛋白表达10天以上。saRNA靶标明确，作用时间长，是一种较为理想的提高目的基因表达的方式。saRNA已经在多方面，特别是肿瘤研究中发挥了良好的作用。
[0006]ABCG2(ATP
‑
binding cassette superfamily G member 2,ABCG2，也称BCRP)是体内UA转运的关键蛋白，在肾脏和小肠等多种组织均有表达，能够使肾脏向尿中、小肠向肠道内容物中排泄UA。因此，理论上，促进ABCG2基因表达是增加UA排泄、降低SUA的策略之一。目前未见关于促进ABCG2基因表达的saRNA的报道。

技术实现思路
：
[0007]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点，提供一种促进ABCG2基因表达的saRNA及其在制备治疗高尿酸血症或痛风药物中的应用。通过设计靶向ABCG2基因启动子序列的saRNA，特异性促进ABCG2基因的转录，检测高表达ABCG2蛋白后对HUA模型小鼠血液UA浓度的影响，验证ABCG2基因作为治疗痛风病靶点的可行性，为开发新的痛风药物奠定基础。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术提供促进ABCG2基因表达的saRNA，人类的为：saRNA
‑
1
′
、saRNA
‑2′
，小鼠的为：saRNA
‑
1、saRNA
‑
2；saRNA
‑1′
序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；saRNA
‑2′
序列为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；saRNA
‑
1序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；saRNA
‑
2序列为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
[0009]saRNA
‑1′
序列为：
[0010]正义链：5
′‑
CAAGCAUCCACUUUCUCAGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:1)
[0011]反义链：5
′‑
CUGAGAAAGUGGAUGCUUGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:2)；
[0012]saRNA
‑2′
序列为：
[0013]正义链：5
′‑
AGACGAGGUACUGAUCAGCdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:3)
[0014]反义链：5
′‑
GCUGAUCAGUACCUCGUCUdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:4)；
[0015]saRNA
‑
1序列为：
[0016]正义链：5
′‑
UGUCUGUGUGUUCACAGCACdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:5)
[0017]反义链：5
′‑
GUGCUGUGAACACACAGACAdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:6)；
[0018]saRNA
‑
2序列为：
[0019]正义链：5
′‑
CCACAGAAACUUGGUUAAGGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:7)
[0020]反义链：5
′‑
CCUUAACCAAGUUUCUGUGGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:8)。
[0021]本专利技术还提供上述促进ABCG2基因表达的saRNA在制备治疗高尿酸血症或痛风药物中的应用。
[0022]本申请的专利技术构思：首先设计了靶向小鼠ABCG2基因的9条saRNA，通过RT
‑
qPCR实验和Western blotting实验，从中筛选出3条激活效率高的saRNA，最终挑选出2条显著促进ABCG2蛋白表达的saRNA
‑
1/2序列，进行了动物体内实验。在此基础上，设计了3条靶向人ABCG2基因的saRNA，通过RT
‑
qPCR和Western blotting实验，筛选出激活效率最高的2条saRNA
‑1′
/2
′
序列。
[0023]本专利技术与现有技术相比，本专利技术首次设计了靶向ABCG2的saRNA，通过将saRNA转染进入细胞，分别在人和小鼠肾小管上皮细胞中实现了ABCG2基因的高表达；并通过细胞水平的UA外排实验，证明提高ABCG2基因的表达可以促进细胞内UA的外排；HUA小鼠经过尾静脉注射saRNA后，成功降低了HUA模型小鼠的SUA，并提高了小鼠的肾脏和小肠的UA排泄能力；降低了血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的水平，保护了肾脏和小肠功能；与苯溴马隆(BEN)相比，saRNA促进UA排泄的能力更强，对肾脏和小肠的保护作用更强，同时避免了BEN的副作用。本专利技术为下一步深入开发以ABCG2为靶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.促进人类ABCG2基因表达的saRNA，其特征在于，saRNA为saRNA
‑1′
或saRNA
‑2′
，saRNA
‑1′
序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；saRNA
‑2′
序列为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；saRNA
‑1′
序列为：正义链：5
′‑
CAAGCAUCCACUUUCUCAGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:1)反义链：5
′‑
CUGAGAAAGUGGAUGCUUGdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:2)；saRNA
‑2′
序列为：正义链：5
′‑
AGACGAGGUACUGAUCAGCdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:3)反义链：5
′‑
GCUGAUCAGUACCUCGUCUdTdT
‑3′
(SEQ ID NO:4)。2.促进小鼠ABCG2基因表达的saRNA，其特征在于，saRNA为saRNA
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛科立，贾少平，葛银林，薛美兰，宋志刚，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：