用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物及其应用，属于生物技术和医药领域。所述组合物包括氧化反应酶组合和还原反应酶组合；所述氧化反应酶组合包括NAD氧化酶、7

【技术实现步骤摘要】
用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术和医药领域，涉及一种用于制备熊去氧胆酸的组合物及其应用。

技术介绍

[0002]熊胆粉通常作为熊胆药物使用，具有清热解毒、平肝明目、杀虫止血等功效，在临床上通常作为治疗肝胆和眼科疾病。胆汁酸是熊胆中含量最高且研究最多的物质，其主要有效成分为牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)，牛磺熊去氧胆酸是熊胆汁的有效成分，治疗胆结石及肝病具有明显的疗效。以人工提取熊胆汁为主要途径得到牛磺熊去氧胆酸，纯度不高，不利于大规模生产。
[0003]禽胆与熊胆在化学组分上的差异为，家禽胆汁中TCDCA为主要成分，且不含TUDCA。化学结构上TUDCA是TCDCA在C
‑
7位羟基的差向异构体。研究表明TCDCA依次经过7
‑
α羟基类固醇脱氢酶(7
‑
αHSDH)氧化，7
‑
β羟基类固醇脱氢酶(7
‑
βHSDH)还原得到TUDCA。CN201510996540提供一种化学氧化还原的方法，其氧化剂使用过氧化钠，还原剂使用金属钠，众所周知金属钠在水中反应极不安全，无法适应工业化生产。CN201210473483.8公开了通过两步酶法制备结合态熊去氧胆酸的方法，通过7α
‑
HSDH和7β
‑
HSDH将鹅去氧胆酸转化为熊去氧胆酸，该方法熊去氧胆酸转化率为50％；但该方法需要使用较大量的辅酶(辅酶价格昂贵)，且转化率还不够高。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物及其应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物，包括氧化反应酶组合和还原反应酶组合；
[0006]所述氧化反应酶组合包括NAD氧化酶、7
‑
α羟基类固醇脱氢酶及辅酶；
[0007]所述还原反应酶组合包括醇脱氢酶与7
‑
β羟基类固醇脱氢酶及辅酶，所述氧化反应酶组合的辅酶为NAD
+
或NADP
+
。
[0008]作为本专利技术的优选实施方式，所述氧化反应酶组合中，所述NAD氧化酶、7
‑
α羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为NAD氧化酶：7
‑
α羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克；
[0009]所述还原反应酶组合中，所述醇脱氢酶与7
‑
β羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为醇脱氢酶：7
‑
β羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克。
[0010]相应地，本专利技术还要求保护所述组合物在制备熊去氧胆酸及其衍生物的用途，所述组合物用于将鹅去氧胆酸及其衍生物及转化为熊去氧胆酸及其衍生物；所述鹅去氧胆酸衍生物包括牛磺鹅去氧胆酸，所述熊去氧胆酸衍生物包括牛磺熊去氧胆酸。
[0011]进一步地，本专利技术还提供了所述组合物制备熊去氧胆酸及其衍生物的方法，包括如下步骤：
[0012](1)、将原料加入所述的氧化反应酶组合中，通入空气，进行氧化反应；
[0013](2)、升温使步骤(1)中的氧化反应酶组合失去活性，降温；
[0014](3)、加入所述的还原反应酶组合和异丙醇，进行还原反应；
[0015]所述步骤(1)的原料包括鹅去氧胆酸、鹅去氧胆酸衍生物、含有鹅去氧胆酸的复合物、含有鹅去氧胆酸衍生物的复合物的至少一种
[0016]作为本专利技术的优选实施方式，所述方法还包括步骤(4)：升温使反应体系中的酶变性，降温过滤，除去固形物。
[0017]更优选地，所述步骤(2)和步骤(4)中所述的酶变性温度为50～100℃；优选地，为70～90℃。
[0018]作为本专利技术的优选实施方式，所述方法还包括还包括步骤(5)：通过减压蒸馏，真空干燥得到块状固体，再经过机械粉粹得到粉末状的产物。
[0019]更优选地，所述步骤(5)中的减压蒸馏条件为：－0.09～－0.095MPa，温度为40～60℃；真空干燥条件为：－0.09～－0.095MPa，温度为60～80℃。
[0020]作为本专利技术的优选实施方式，所述步骤(1)的原料为禽胆汁；当使用禽胆汁作为原料时，还包括预处理过程，预处理步骤如下：鸡胆破皮后除去胆皮，取胆汁升温水解，降温过滤，除去固形物，得到澄清的鸡胆汁。
[0021]优选地，所述预处理过程的胆汁水解温度为70～100℃，水解试剂为氢氧化钠溶液，浓度为1～10M，水解时溶液PH控制在8～12。
[0022]更优选地，所述预处理过程的胆汁水解温度85～95℃，碱液浓度2～5M
[0023]作为本专利技术的优选实施方式，所述鹅去氧胆酸衍生物为牛磺鹅去氧胆酸；所述牛磺鹅去氧胆酸与所述步骤(1)中的辅酶的质量比为鹅去氧胆酸：辅酶＝1g：0.5～5mg。
[0024]作为本专利技术的优选实施方式，所述步骤(3)中，异丙醇用量为0.2～1.5毫升每克牛磺鹅去氧胆酸。
[0025]本专利技术的有益效果：
[0026](1)本专利技术通过优化的两步法制备熊去氧胆酸及其衍生物，优化的方法加入了NOX以及ADH两种酶，可生成所需的辅酶，减少了辅酶的用量，使用更便利；
[0027](2)本专利技术方法使用NOX和7
‑
αHSDH及辅酶组成氧化反应酶组合，使用氧气为氢的受体，产物为水；使用ADH和7
‑
βHSDH及辅酶组成还原反应酶组合，使用异丙醇为氢的受体，产物为丙酮，丙酮很容易挥发，很容易除去，不会影响产品质量，对环境友好；
[0028](3)本专利技术方法工艺简单，便于操作，能够有效提高熊去氧胆酸的得率；
[0029](4)本专利技术方法可以禽胆汁等复合物作为原料，原料更简单，制得的熊胆类似物中牛磺熊去氧胆酸含量更高，效果更好。
附图说明
[0030]图1为本专利技术方法将TCDCA转化为TUDCA的化学反应方程。
具体实施方式
[0031]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0032]实施例1
[0033]用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物，包括氧化反应酶组合和还原反应酶组合；所述氧化反应酶组合包括NAD氧化酶、7
‑
α羟基类固醇脱氢酶及辅酶；所述还原反应酶组合包括醇脱氢酶与7
‑
β羟基类固醇脱氢酶及辅酶；所述辅酶为NAD+或NADP+。
[0034]所述组合物用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的方法，包括如下步骤(反应原理如图1，以TCDCA转化为TUDCA为例)：
[0035](1)、将原料加入所述的氧化反应酶组合中，25～35℃，pH6.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物，其特征在于，包括氧化反应酶组合和还原反应酶组合；所述氧化反应酶组合包括NAD氧化酶、7
‑
α羟基类固醇脱氢酶及辅酶；所述还原反应酶组合包括醇脱氢酶与7
‑
β羟基类固醇脱氢酶及辅酶；所述辅酶为NAD
+
或NADP
+
。2.如权利要求1所述组合物，其特征在于，所述氧化反应酶组合中，所述NAD氧化酶、7
‑
α羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为NAD氧化酶：7
‑
α羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克；所述还原反应酶组合中，所述醇脱氢酶与7
‑
β羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为醇脱氢酶：7
‑
β羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克。3.如权利要求1所述组合物在制备熊去氧胆酸及其衍生物的用途，其特征在于，所述组合物用于将鹅去氧胆酸及其衍生物及转化为熊去氧胆酸及其衍生物；所述鹅去氧胆酸衍生物包括牛磺鹅去氧胆酸，所述熊去氧胆酸衍生物包括牛磺熊去氧胆酸。4.一种制备熊去氧胆酸及其衍生物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)、将原料加入如权利要求1所述的氧化反应酶组合中，通入空气，进行氧化反应；(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦和平，张和平，祝国祥，林志峰，崔亚鹏，
申请(专利权)人：中山百灵生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：