抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株的单克隆抗体及其应用。所述的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株SDDV(ZH

【技术实现步骤摘要】
抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于免疫学和病毒学交叉
，具体涉及一种能特异识别病毒主要衣壳蛋白的抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]黄鳍鲷又名黄墙、黄脚立、赤翅等，属鲈形目鲷科鱼类，广泛分布于印度
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西太平洋和中国近海，不仅是华南沿海重要的经济鱼类之一，也是一种重要生态物种。黄鳍鲷营养丰富，肉质佳美，经济价值高，在海水及咸淡水养殖业中占有一定的地位。但随着养殖密度增加、养殖环境水体的污染及恶劣的天气，造成黄鳍鲷在养殖过程中暴发各种疾病，包括细菌性、病毒性和寄生虫性疾病等。近年来，广东省珠海市养殖的黄鳍鲷频繁出现严重的腹水性疾病(YFSBAD)，临床症状表现为鱼体腹部膨大，体腔充满黄色的腹水。2021年国内学者从患病鱼腹水中通过宏病毒组测序、体外细胞分离纯化、病毒粒子蛋白质组及回接感染致病性等方法，确定引起黄鳍鲷腹水病的病原为鳞片脱落综合征病毒(Scale drop syndrome virus,SDDV)的分离株。SDDV是一种胞质型双链DNA病毒，属于虹彩病毒科细胞肿大病毒属。SDDV感染鲈鱼引起的典型症状为：鳞片脱落、黑体、尾鳍糜烂、鳃丝苍白以及肝、脾和肾脏的多灶性坏死。SDDV可以感染亚洲鲈鱼幼鱼和成鱼，导致死亡率约40
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50％。近年来的研究结果显示，黄鳍鲷是SDDV虹彩病毒的第三种自然宿主鱼类。
[0003]目前对于黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株尚缺乏有效的治疗方法和防控措施，早期检测和诊断是预防该病疾病爆发的关键环节。利用特异性强的单克隆抗体开发针对黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株的检测技术，具有快速、灵敏的优点，也适合现场大规模检测应用。另外，制备的单克隆抗体还可应用于病毒感染致病的研究中，包括病毒基因在宿主体内或体外培养细胞中的表达、定位、及病毒感染致病机理等。主要衣壳蛋白(major capsid protein，MCP)作为虹彩病毒的主要结构蛋白，可作为病毒分类和检测技术的候选基因。尽管国内已经制备了多种鱼类病毒或病毒蛋白的单克隆抗体，但是尚未有SDDV MCP单克隆抗体制备及应用的相关文献与专利。因此，抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP单克隆抗体的制备将为该病毒检测技术的开发及感染致病机理等研究奠定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的是提供能产生抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体的杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1，其于2022年7月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼，邮编：510070，保藏编号为：GDMCC No：62648。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体，其是由杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1产生。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1在生产抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体中的应用。
[0007]本专利技术的第四个目的是提供抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体在制备检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)产品中的应用。
[0008]优选的，是提供抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体在制备检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP蛋白抗原产品中的应用。
[0009]优选的，所述的产品选自试剂、试纸条或试剂盒中的任意一种。
[0010]优选的，所述的试剂盒选自胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒中的任意一种。
[0011]本专利技术的第五个目的是提供一种检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的产品，其包含所述的抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体。
[0012]本专利技术的第六个目的是提供一种检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的方法，使用所述的抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体，或所述的检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的产品，对待测样本进行检测。
[0013]本专利技术的第七个目的是提供所述的抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的单克隆抗体、检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的产品或检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株(ZH
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04/2020)的方法在检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020中的应用。
[0014]本专利技术以纯化的SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP原核表达产物为抗原，免疫BALB/c小鼠，经细胞融合，产生融合的杂交瘤细胞，经间接酶联免疫反应(ELISA)筛选，获得稳定分泌抗SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP单克隆抗体3H4 1E1的杂交瘤细胞株。免疫印迹法结果显示，本专利技术的单抗具有很好的特异性，能特异性识别SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP原核表达产物和感染细胞中的病毒MCP。本专利技术中SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP的单抗的成功制备为SDDV免疫学检测方法的建立、抗病毒免疫制剂、病毒感染致病机理的研究奠定了基础。
[0015]杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1，其于2022年7月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼，邮编：510070，保藏编号为：GDMCC No：62648。
附图说明
[0016]图1为纯化的重组SDDV分离株(ZH
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04/2020)MCP蛋白的SDS
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PAGE电泳图。(a)表达的重组SDDV分离株(ZH
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04/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1，其保藏编号为：GDMCC No：62648。2.抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020的单克隆抗体，其特征在于，是由权利要求1所述的杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1产生。3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株SDDV(ZH
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04/2020)
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MCP
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3H4 1E1在生产抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020的单克隆抗体中的应用。4.权利要求2所述的抗黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020的单克隆抗体在制备检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，是在制备检测黄鳍鲷虹彩病毒SDDV分离株ZH
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04/2020MCP蛋白抗原产品中的应用。6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓红，黄友华，许伟华，秦启伟，王文基，杨家辉，
申请(专利权)人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室，
类型：发明
国别省市：