一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。该杂交瘤细胞株AFB1SC，保藏号为CCTCC NO:2022238，是AFB1在DMF溶液中与CMO反应得到半抗原AFB1O，半抗原进一步与载体蛋白KLH偶联后得到的免疫原AFB1‑

【技术实现步骤摘要】
一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素B1(AFB1)主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢物，广泛污染谷物、坚果等植物性食品，以及豆粕、麦麸和酒糟等饲料产品，可发生在植物生长到收获以及加工各阶段，且当前的农业、食品加工技术不能完全去除已产生的AFB1。
[0003]动物和人摄入被污染的食品，会出现腹泻和发热等急性或慢性中毒反应。AFB1可通过改变多种酶活性及血浆中部分成分的浓度，诱发肝癌发生，还会降低机体免疫力以及影响机体正常氧化程序；动物长期摄入被污染的饲料，产奶量及产蛋量下降，公畜精力活力和DNA完整性受到破坏，影响胚胎正常植入母畜子宫或者出现流产，严重影响动物生产繁殖性能，更会通过食用组织和奶制品对人类健康形成双重威胁。
[0004]目前，检测AFB1的方法主要有仪器分析法、酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法。仪器分析法需要昂贵的仪器以及专业的操作人员，不适用于现场检测和大量样品的快速筛检；酶联免疫吸附法具备实现高通量性能，但操作步骤繁琐、耗时较长，结果受到人员操作方法的影响较大；胶体金免疫层析试纸操作简单、生产成本低、结果直观，但检测灵敏度有限，仅能提供“有”或“无”的定性结果，半定量分析则易受胶体金溶液批次、温度等因素影响，结果准确度不高。
[0005]时间分辨荧光免疫层析定量技术，是利用包裹稀土离子的荧光微球作为荧光信号源标记单克隆抗体，与抗原在试纸条上固定区域发生特异性反应，借助荧光检测仪读取荧光信号进行定量分析的一种新型免疫分析技术。该方法检测灵敏度、准确性更高，对于现场快速检测、准确筛选大量样本具有重要意义。因此，开发一种能够对黄曲霉毒素B1进行准确定量检测且灵敏度更好的时间分辨荧光免疫层析定量方法具有重要意义。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的之一在于提供一种杂交瘤细胞株AFB1SC，其保藏号为CCTCC NO:2022238。
[0007]该细胞株是AFB1在DMF溶液中与CMO反应得到半抗原AFB1O，半抗原进一步与载体蛋白KLH偶联后得到的免疫原AFB1‑
DCC
‑
KLH免疫小鼠后筛选得到，其能够稳定分泌高特异性识别黄曲霉毒素B1的单克隆抗体。
[0008]本专利技术的目的之二在于保护一种单克隆抗体，该单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞株分泌。
[0009]本专利技术的目的之三在于保护上述杂交瘤细胞株、单克隆抗体在制备黄曲霉毒素B1检测试剂或试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术的目的之四在于保护一种检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光层析定量分
析试剂盒，该试剂盒至少包括检测卡，所述检测卡包括PVC背板、PVC背板宽度方向从下往上依次设置的样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫，且相邻组分相互衔接；所述结合垫上固定有上述单克隆抗体制备得到的免疫探针，所述层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T检测线和质控线C，所述T检测线上包被有AFB1抗原，质控线C上包被有羊抗鼠IgG抗体。
[0011]优选的，结合垫上免疫探针的制备方法如下：将荧光微球经过活化试剂活化后，加入单克隆抗体，充分混匀反应后，加入封闭剂封闭处理，离心重悬沉淀，即得。
[0012]优选的，荧光微球的粒径为200～300nm。
[0013]优选的，活化试剂为N
‑
羟基丁二酰亚胺和1
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺。
[0014]优选的，重悬沉淀时所用的复溶液为：重悬沉淀时所用的复溶液包括pH8.5 0.01～0.03mol/L Tris、0.5～1.5％m/v BSA、3～7％m/v蔗糖、0.01～0.03％m/v PEG
‑
20000、0.10～0.30％v/v Tween
‑
20、0.03～0.07％m/v NaN3的水溶液。
[0015]优选的，所述层析膜为醋酸纤维素膜，所述结合垫材质为聚酯纤维材料，所述样品垫为玻璃纤维材料。
[0016]本专利技术的目的之五在于保护上述试剂盒在谷物和饲料检测中的应用，其中所述谷物和饲料样品种类包括但不限于玉米、豆粕、膨化大豆、仔猪配合饲料、母猪浓缩饲料。
[0017]本专利技术采用rProtein A磁珠单克隆抗体纯化方法，操作简单、耗时短、成本低，获得的单克隆抗体纯度可达95％以上，能有效去除杂蛋白干扰，保证免疫层析结果准确性；
[0018]本专利技术采用时间分辨荧光微球标记AFB1单克隆抗体。时间分辨荧光微球作为一种特殊的功能微球，内部包裹有成千上万的高亮镧系元素荧光材料，大大提高了荧光标记效率和分析灵敏度；同时，时间分辨荧光微球表面修饰有合适密度的羧基基团，便于与抗体等蛋白的共价连接，提高了标记物的稳定性。相比于传统荧光材料，时间分辨荧光微球的Stokes位移更大，荧光寿命更长，通过适当延长测量时间，待样本中的荧光衰减后在测定标记物的荧光信号，能有效消除样品基质中各种荧光背景干扰，提高检测准确性，获得更高的灵敏度。时间分辨荧光免疫层析技术，既保留了免疫层析技术简单快速、现场检测的优势，时间分辨荧光微球又提供了高灵敏度特点，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好和准确度高等特点，能够实现定量分析；
[0019]本专利技术所提供的时间分辨荧光层析定量分析试剂盒，其使用的单克隆抗体为杂交瘤细胞株AFB1SC分泌，对AFB1有高度特异性，能够高灵敏、高特异性地检测出AFB1的含量，其线性范围为0.1～4μg/L，检测限为0.133μg/L，在玉米样品中的回收率为89.74～98.40％，仔猪配合饲料样品回收率为92.69～94.95％，检测灵敏度远低于市场上其他检测AFB1的试剂盒，且保存期能够达到1年以上。
附图说明
[0020]图1为本专利技术制备的试剂盒外观；
[0021]图2为本专利技术制备的试纸条结构示意图；
[0022]图3为本专利技术实施例2中AFB1检测标准曲线图；
[0023]图4为实施例3中本专利技术与ELISA试剂盒玉米样品检测对比图；
[0024]图5为实施例3中本专利技术与ELISA试剂盒仔猪配合饲料样品检测对比图。
[0025]图中：
[0026]1PVC背板、2样品垫、3结合垫、4层析膜、5吸水垫。
具体实施方式
[0027]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0028]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0029]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株AFB1SC，保藏号为CCTCC NO:2022238。2.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌。3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求2所述的单克隆抗体在制备黄曲霉毒素B1检测试剂或试剂盒中的应用。4.一种检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光层析定量分析试剂盒，其特征在于，至少包括检测卡，所述检测卡包括PVC背板、PVC背板宽度方向从下往上依次设置的样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫，且相邻组分相互衔接；所述结合垫上固定有权利要求2所述的单克隆抗体制备得到的免疫探针，所述层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T检测线和质控线C，所述T检测线上包被有AFB1抗原，质控线C上包被有羊抗鼠IgG抗体。5.根据权利要求4所述的检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光层析定量分析试剂盒，其特征在于，结合垫上免疫探针的制备方法如下：将荧光微球经过活化试剂活化后，加入单克隆抗体，充分混匀反应后，加入封闭剂封闭处理，离心重悬沉淀，即得。6.根据权利要求5所述的检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光层析定量分析试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建军，彭大鹏，范小慧，杨娅林，
申请(专利权)人：南通优尔测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：