一种检测分析狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测分析狂犬疫苗中非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒，含有抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体和抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体，其能够对狂犬疫苗样品中非游离核蛋白进行特异性检测，且能够获得相关性较强的标准曲线，有达到快速获得病毒颗粒完整性情况的目的。得病毒颗粒完整性情况的目的。得病毒颗粒完整性情况的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种检测分析狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒


[0001]本专利技术涉及疫苗检测
，具体地，涉及一种检测狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒。

技术介绍

[0002]狂犬病主要是由狂犬病毒(Rabies Virus，RV)感染而引发的疾病，通常发生在猫、狗等动物抓伤或者咬伤后，患者常表现出恐水、咽肌痉挛以及怕风等症状，当前临床中并没有可以有效治疗狂犬病的特效药物，所以一旦发病，患者死亡率几乎为100％。RV基因组由11928～11932个核苷酸组成，为单链、不分节段的负链RNA，含5个大的开放阅读框，编码5种结构蛋自。基因组从3
’
端至5
’
端的排列顺序为N、P、M、G和L基因，分别编码病毒核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、膜基质蛋白(matrix protein，M)、糖蛋白(glycoprotein，G)和转录大蛋白(polymerase，L)。近几年以来，在宠物数量不断增加下，健康动物仍然具有15％左右带毒率，而为了能够有效预防狂犬病，现阶段最好的办法则是进行狂犬疫苗注射。
[0003]在狂犬疫苗的研制和生产过程中，需要狂犬病毒颗粒完整性进行检测，病毒颗粒的完整性是评估和保障疫苗质量的关键指标。目前仍以电镜观察肉眼评估病毒颗粒完整性为主。但电镜样本制备过程比较复杂，对一起设备要求较高，且取样和处理方式对实验结果干扰较大，导致电镜检测方法的开展困难且重复性差。<br/>[0004]亟需开发一种可在疫苗质量控制相关检测实验室内开展的简便有效检测方法来评估狂犬疫苗的病毒颗粒完整性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种检测狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒。由于，糖蛋白是唯一暴露于狂犬病毒包膜表面的蛋白。如若将抗糖蛋白的单克隆抗体包被在固相表面，包被的抗糖蛋白单克隆抗体将特异性结合狂犬病毒表面糖蛋白进而捕获病毒颗粒。此时，病毒颗粒若在完整的情况下，核蛋白由于被包裹于病毒颗粒内部而无法被标记的核蛋白抗体识别并检测。而当被捕获的狂犬病毒颗粒不完整时病毒颗粒内的处于非游离状态的核蛋白则会暴露而被标记的核蛋白抗体识别而被检测。应用这种非游离状态核蛋白的检测模式，当疫苗样品中狂犬病毒颗粒越接近完整状态检测信号越低，在一定范围非游离状态核蛋白检测信号随着颗粒完整性的下降而上升，再随着狂犬病毒颗粒进一步被严重破坏核蛋白脱离颗粒成为游离状态无法被检测而导致信号下降。因此，应用此检测模式可以简便地开展病毒颗粒完整性的评估和监测工作。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种分泌抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种分泌抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供所述杂交瘤细胞的任意一种或两种，和/或所述单克隆抗体的任意一种或两种在制备检测狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白和/或狂犬病毒颗粒完整性的免疫检测试剂盒。
[0012]本专利技术的第七个目的是提供一种狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白和/或狂犬病毒颗粒完整性的检测方法。
[0013]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0014]本专利技术提供一种分泌抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株YB
‑
RV22，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉，武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO:C202220，保藏日期为：2022年1月19日。
[0015]以及，所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体YB
‑
RV22。
[0016]所述抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体YB
‑
RV22为IgG1型，轻链为κ链。
[0017]本专利技术还提供一种分泌抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株YB
‑
RV26，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2022283，保藏日期为：2022年9月21日。
[0018]以及，所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体YB
‑
RV26。
[0019]所述抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体YB
‑
RV26为IgG1型，轻链为κ链。
[0020]还要求保护所述杂交瘤细胞任意一种或两种，和/或所述单克隆抗体的任意一种或两种在制备检测狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒中的应用。
[0021]一种狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白和/或狂犬病毒颗粒完整性的免疫检测试剂盒，含有所述单克隆抗体中的一种或两种。
[0022]优选地，所述免疫检测试剂盒为时间分辨荧光免疫检测试剂盒，以所述的抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体为一抗；以镧系元素离子络合物标记的所述抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体作为二抗。
[0023]更优选地，镧系元素离子为Eu
3+
、Dy
3+
、Tb
3+
、Sm
3+
中的一种或多种。
[0024]进一步地再优选地，镧系元素离子为Eu
3+
。
[0025]优选地，所述镧系元素离子络合物为N1
‑
(p
‑
isothiocyanatobenzyl)
‑
diethylenetriamine
‑
N1,N2,N3,N3
‑
tetraacetic acid(SCN
‑
Ph
‑
DTTA)
‑
Eu
3+
(SCN
‑
Ph
‑
DTTA
‑
Eu
3+
)。
[0026]更优选地，还含有封闭液、增强液、洗涤液、标记液、样品稀释液和/或二抗稀释液中的一种或几种。
[0027]再优选地，所述封闭液为含BSA的Tris
‑
HCl缓冲液。
[0028]进一步再优选地，所述封闭液为质量浓度为1～1.5wt％BSA的30～70mmol/L的Tris
‑
HCl缓冲液。
[0029]最优选地，所述封闭液为质量浓度为1wt％BSA的50mmol/L的Tris...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分泌抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202220，保藏日期为：2022年1月19日。2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体。3.一种分泌抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2022283，保藏日期为：2022年9月21日。4.权利要求3所述的杂交瘤细胞株分泌的抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体。5.权利要求1和/或3所述杂交瘤细胞株，和/或权利要求2和/或4所述单克隆抗体在制备检测狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白含量和/或检测狂犬病毒颗粒完整性的试剂盒中的应用。6.一种狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白和/或狂犬病毒颗粒完整性的免疫检测试剂盒，其特征在于含有权利要求2和/或4所述单克隆抗体中的一种或两种。7.根据权利要求6所述的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述免疫检测试剂盒为时间分辨荧光免疫检测试剂盒，以权利要求2所述的单克隆抗体作为一抗；以镧系元素离子络合物标记的权利要求4所述单克隆抗体作为二抗。8.一种狂犬病毒和/或狂犬疫苗非游离核蛋白和/或狂犬病毒颗粒完整性的检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：林冠峰，雷腊梅，
申请(专利权)人：广州优伯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：