溶瘤病毒与CART细胞联合治疗血液肿瘤的方法技术

本发明专利技术涉及溶瘤病毒与CAR T细胞联合治疗血液肿瘤的方法。本发明专利技术提供了使用互补的转基因溶瘤病毒和遗传工程化的CAR T细胞来治疗肿瘤的方法。在一个实施方式中，所述溶瘤病毒包含编码CD19的核苷酸序列，或编码IL

【技术实现步骤摘要】
溶瘤病毒与CAR T细胞联合治疗血液肿瘤的方法


[0001]本专利技术总体涉及抗肿瘤疗法领域。更具体地，本专利技术提供了使用互补的转基因溶瘤病毒和遗传工程化的CAR T细胞来治疗血液肿瘤和癌症的方法。

技术介绍

[0002]免疫治疗在多种肿瘤类型中取得了良好的治疗效果，比如黑色素瘤、肺癌、肾癌等。其中，嵌合抗原受体T细胞(CAR T)细胞疗法治疗急性B淋巴细胞白血病(B
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ALL) 的效果尤为卓越。急性淋巴细胞白血病(ALL)是造血干细胞的恶性克隆性疾病。目前，B细胞恶性肿瘤(包括急性B淋巴细胞白血病(B
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ALL)、慢性非淋巴细胞白血病 (B
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CLL)、非霍奇金淋巴瘤等)是目前适用嵌合抗原受体(CAR)T细胞技术的最佳疾病类型。近年来，靶向CD19或CD22的嵌合抗原受体修饰的T细胞(抗CD19或抗CD22 CAR
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T细胞)在治疗急性B淋巴细胞恶性肿瘤中显示出良好的功效。已表明，接受 CD19 CAR
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T细胞治疗的急性B
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ALL患者的3个月完全缓解率超过80％至90％。虽然对B细胞淋巴瘤的治疗效果不如B
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ALL，但完全缓解率可以达到约54％。鉴于抗 CD19 CAR
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T在治疗B细胞恶性肿瘤方面的优异表现，美国迄今已批准5个靶向CD19 的CAR
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T产品。针对其他抗原(例如CD33或CD123)的CAR T疗法也在密集开发中。
[0003]虽然CAR
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T疗法在治疗B细胞恶性肿瘤方面取得了较高的完全缓解率，但临床数据显示，在CAR
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T细胞疗法后实现完全缓解的患者中，有较大比例在9
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12个月内复发。例如，对于接受抗CD19 CAR
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T治疗的B
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ALL患者，12个月复发率高达43％至55％，其中20％至30％的复发病例的CD19抗原丢失。由于靶抗原丢失，患者无法再选择用抗CD19 CAR
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T进行治疗。目前对这些复发的患者没有有效的治疗方法，死亡率非常高。这是目前临床实践中一个重要的未解决需求。
[0004]此外，髓系白血病急性髓系白血病(AML)是成人最常见的急性白血病。AML的中位确诊时间在68岁，发病较晚，并且预后差，整体五年生存率小于30％，且对于大于65岁的患者，5年生存率小于10％。标准治疗方案在过去的40年中没有明显改变，主要是多疗程的强化化疗方案。高强度放化疗后造血干细胞移植能够明显提高高危很复发难治AML患者的预后，但它也会伴随后续的治疗相关并发症甚至死亡。
[0005]虽然CAR T治疗在B细胞肿瘤治疗中取得了很好的临床效果，但针对AML尚未有疗效明确、安全耐受的CAR T细胞产品。造成这种情况的原因主要在于AML 缺乏合适的靶点。目前针对AML的CAR T靶点主要有Lewis
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Y、CLL1、CD33、 CD123、CD44
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V6与FLT
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3等。CD33与CD123皆因在造血干细胞中也有表达使得 CD33 CAR T细胞与CD123细胞在回输后造成严重的造血系统毒性。因此，针对髓系白血病的CAR T细胞也有巨大的临床需求。
[0006]溶瘤病毒(oncolytic virus)是能够感染肿瘤细胞、在肿瘤细胞中复制并最终杀死肿瘤细胞但不伤害健康细胞的天然存在的或遗传修饰的病毒。已经提出水疱性口炎病毒 (Vesicular stomatitis virus,VSV)可以用作溶瘤病毒来治疗肿瘤。这种病毒不会与正常细胞中的内源IFN
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β相互作用，只能在肿瘤细胞中选择性地扩增和生长。
[0007]VSV能够表达多种细胞表面分子，包括低密度脂蛋白受体、磷脂酰丝氨酸、唾液脂
(sialolipid)和硫酸类肝素，并且能够通过这些分子附着于细胞表面。与目前正在开发的其他溶瘤细胞病毒平台相比，VSV具有以下优势：(i)基因组小，复制时间短，跨突触速度快；(ii)外源基因表达极高，因此其可以具有高滴度，允许大规模生产；(iii) 有独立的细胞周期，且在宿主细胞的细胞质中没有转化的风险。这种溶瘤病毒不会整合到DNA中，经过减毒后，可以避免野生型病毒所引起的神经系统炎症。鉴于上述特点，VSV在肿瘤免疫疗法中具有很好的潜力。
[0008]虽然VSV具有上述优点，但是当VSV单独用于肿瘤免疫疗法时，存在一定的技术瓶颈。因此，需要开发新的策略将重组VSV溶瘤病毒的应用与其他治疗相结合，本专利技术利用溶瘤病毒将特异性靶点，比如CD19人为带到血液肿瘤中，与相关CAR T 细胞联合应用，解决血液肿瘤缺乏特异靶抗原的缺陷以及CAR T细胞治疗血液瘤，抗原丢失复发的问题，两者协同，以期发挥最佳的抗肿瘤效果。

技术实现思路

[0009]在一个实施方式中，本专利技术提供了一种组合物用于治疗个体肿瘤的用途，该组合物包含：(i)溶瘤病毒，其包含编码抗原或编码IL
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12和抗原的核苷酸序列；和(ii)遗传工程T细胞，其表达识别所述溶瘤病毒编码的抗原的嵌合抗原受体(CAR)。在一个实施方式中，抗原是CD19。在一个实施方式中，抗原是仅包含胞外结构域和跨膜结构域的截短的CD19。在一个实施方式中，CD19抗原包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6 或SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一个实施方式中，抗CD19 CAR包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列。在一个实施方式中，T细胞获自所述个体。溶瘤病毒的代表性实例包括但不限于牛痘病毒、呼肠孤病毒、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)、新城疫病毒(NDV)、单纯疱疹病毒(HSV)、麻疹病毒、腺病毒或痘病毒。在一个实施方式中，溶瘤病毒是水疱性口炎病毒。
[0010]在一个实施方式中，溶瘤病毒包含含有氨基酸突变的M蛋白，所述M蛋白与SEQID NO.1所示的氨基酸序列相比，M蛋白的氨基酸取代包含N32S、N49D、M51R、 H54Y、V221F、V225I、S226R。即所述M蛋白的氨基酸取代包含在第32位的天冬酰胺突变为丝氨酸(N32S)；和在第49位的天冬酰胺突变为天冬氨酸(N49D)；和在第51位的甲硫氨酸突变为精氨酸(M51R)；和在第54位的组氨酸突变为酪氨酸 (H54Y)；在第221位的缬氨酸突变为苯丙氨酸(V221F)；和在225位的缬氨酸突变为异亮氨酸(V225I)；和在第226位的丝氨酸突变为精氨酸(S226R)。
[0011]在一个实施方式中，M蛋白包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一个实施方式中，溶瘤病毒包含G蛋白，该G蛋白包含一个或多个氨基酸突变V53I、A141V、D172Y、 K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I和Y487I。在一个实施方式中，G蛋白包含SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.溶瘤病毒和遗传工程化T细胞在制备用于治疗患有肿瘤的个体的药物中的应用，其中，所述溶瘤病毒包含编码抗原或IL
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12和抗原的核苷酸序列，所述遗传工程化T细胞包含表达识别所述溶瘤病毒编码的抗原的嵌合抗原受体(CAR)。2.如权利要求1所述的应用，其中，所述抗原是CD19。3.如权利要求2所述的应用，其中，所述CD19抗原包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的应用，其中，所述CAR包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。5.如权利要求1所述的应用，其中，所述T细胞获自所述个体/或异体。6.如权利要求1所述的应用，其中，所述溶瘤病毒包含含有M蛋白氨基酸突变的M蛋白，并且与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列相比，所述M蛋白的氨基酸突变包括N32S、N49D、M51R、H54Y、V221F、V225I、S226R。7.如权利要求6所述的应用，其中，所述M蛋白包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。8.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：周国庆，张凡，田婷，马良，刘能银，陈波，李香群，
申请(专利权)人：上海荣瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：