溶瘤病毒及其应用制造技术

本申请涉及生物医药的技术领域，具体公开了一种溶瘤病毒及其应用。该溶瘤病毒包括M蛋白，所述M蛋白与SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列相比，包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第32位、第33位、第49位、第54位、第133位、第225位。以及该溶瘤病毒的表达载体、生产该溶瘤病毒的病毒生产细胞、包括该溶瘤病毒的药物组合物；以及上述溶瘤病毒、溶瘤病毒表达载体、病毒生产细胞和/或药物组合物的制备方法和用途。本申请能够有效提高溶瘤病毒的安全性和治愈率。率。

【技术实现步骤摘要】
溶瘤病毒及其应用


[0001]本申请涉及生物医药的
，更具体地说，它涉及一种溶瘤病毒及其应用。

技术介绍

[0002]溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤性病毒，目前已被大众接受作为肿瘤免疫治疗的重要分支。溶瘤病毒能够特异性地靶向感染肿瘤细胞，例如利用肿瘤细胞中抑癌基因的失活或缺陷，从而选择性地感染肿瘤细胞；溶瘤病毒感染肿瘤细胞后，会在肿瘤细胞内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞，从而杀死肿瘤细胞。同时，溶瘤病毒还可以提供提高宿主自身抗癌反应所必需的免疫刺激信号，从而吸引更多的免疫细胞来继续杀死残余的肿瘤细胞。
[0003]虽然溶瘤病毒在肿瘤免疫治疗方面具有较好的应用前景，但野生型溶瘤病毒往往会引起机体神经系统炎症等问题，在利用野生型病毒感染肿瘤细胞的过程中，还存在较大的致病风险。因此，为进一步推进溶瘤病毒的临床应用，需要对野生型溶瘤病毒进行改造，以获得减毒后的溶瘤病毒。将减毒后的溶瘤病毒用于临床应用，从而降低溶瘤病毒的致病风险，提高溶瘤病毒的安全性。
[0004]然而，在对溶瘤病毒改造的过程中，若仅是对野生型溶瘤病毒随机进行基因修饰，虽然能够降低其毒性，但改造后的溶瘤病毒可能治愈率效果不佳，甚至改造后的溶瘤病毒无法进行包装，不利于推进溶瘤病毒的临床应用。因此，提供一种安全性能良好，同时治愈率高的改造后的溶瘤病毒,对肿瘤免疫治疗领域具有重要的科研价值和应用意义。

技术实现思路

[0005]为了提高溶瘤病毒的安全性和治愈率，本申请提供一种溶瘤病毒及其应用。
[0006]第一方面，本申请提供的一种溶瘤病毒，采用如下的技术方案：
[0007]一种溶瘤病毒，所述溶瘤病毒包括M蛋白，所述M蛋白与SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列相比，包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第32位、第33位、第49位、第54位、第133位、第225位。
[0008]在一些具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第32位的天冬酰胺突变为丝氨酸(N32S)；和/或，在第33位的甲硫氨酸突变为丙氨酸(M33A)；和/或，在第49位的天冬酰胺突变为天冬氨酸(N49D)；和/或，在第54位的组氨酸突变为酪氨酸(H54Y)；和/或，在第133位的丙氨酸突变为苏氨酸(A133T)；和/或，在第225位的缬氨酸突变为异亮氨酸(V225I)。
[0009]进一步地，所述M蛋白还包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第21位、第51位、第111位、第221位和第226位。
[0010]在一些具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代还包含在第21位的甘氨酸突变为谷氨酸(G21E)；和/或，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第51位的甲硫氨酸突变为精氨酸(M51R)；和/或，在第51位的甲硫氨酸突变为丙氨酸(M51A)；和/或，包含在第111位的亮氨
酸突变为丙氨酸(L111A)；和/或，在第221位的缬氨酸突变为苯丙氨酸(V221F)；和/或，在第226位的丝氨酸突变为精氨酸(S226R)。
[0011]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第21位的甘氨酸突变为谷氨酸(G21E)。
[0012]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第32位的天冬酰胺突变为丝氨酸(N32S)。
[0013]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第33位的甲硫氨酸突变为丙氨酸(M33A)。
[0014]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第49位的天冬酰胺突变为天冬氨酸(N49D)。
[0015]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第54位的组氨酸突变为酪氨酸(H54Y)。
[0016]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第111位的亮氨酸突变为丙氨酸(L111A)。
[0017]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第133位的丙氨酸突变为苏氨酸(A133T)。
[0018]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第225位的缬氨酸突变为异亮氨酸(V225I)。
[0019]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第51位的甲硫氨酸突变为精氨酸(M51R)。
[0020]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第51位的甲硫氨酸突变为丙氨酸(M51A)。
[0021]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第221位的缬氨酸突变为苯丙氨酸(V221F)。
[0022]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第226位的丝氨酸突变为精氨酸(S226R)。
[0023]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第226位的丝氨酸突变为甘氨酸(S226G)。
[0024]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E的氨基酸取代。
[0025]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S的氨基酸取代。
[0026]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A的氨基酸取代。
[0027]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D的氨基酸取代。
[0028]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y的氨基酸取代。
[0029]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A的氨基酸取代。
[0030]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A、A133T的氨基酸取代。
[0031]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A、
A133T、V225I的氨基酸取代。
[0032]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V225I氨基酸取代。
[0033]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I的氨基酸取代。
[0034]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R的氨基酸取代。
[0035]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R的氨基酸取代。
[0036]在一个具体的实施方案中，所述M蛋白具有M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R的氨基酸取代本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒包括M蛋白，所述M蛋白与SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列相比，包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第32位、第33位、第49位、第54位、第133位、第225位。2.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第32位的天冬酰胺突变为丝氨酸（N32S）；和/或，在第33位的甲硫氨酸突变为丙氨酸（M33A）；和/或，在第49位的天冬酰胺突变为天冬氨酸（N49D）；和/或，在第54位的组氨酸突变为酪氨酸（H54Y）；和/或，在第133位的丙氨酸突变为苏氨酸（A133T）；和/或，在第225位的缬氨酸突变为异亮氨酸（V225I）。3.根据权利要求2所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白还包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第21位、第51位、第111位、第221位和第226位。4.根据权利要求3所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白的氨基酸取代还包含在第21位的甘氨酸突变为谷氨酸（G21E）；和/或，所述M蛋白的氨基酸取代包含在第51位的甲硫氨酸突变为精氨酸（M51R）；和/或，在第51位的甲硫氨酸突变为丙氨酸（M51A）；和/或，包含在第111位的亮氨酸突变为丙氨酸（L111A）；和/或，在第221位的缬氨酸突变为苯丙氨酸（V221F）；和/或，在第226位的丝氨酸突变为精氨酸（S226R）。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白的氨基酸取代选自以下组中的任一项：1）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S；2）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A；3）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D；4）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y；5）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A；6）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A、A133T；7）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、H54Y、L111A、A133T、V225I；8）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V225I；9）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I；10）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；11）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；12）所述M蛋白的氨基酸取代包含M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；13）所述M蛋白的氨基酸取代包含N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；14）所述M蛋白的氨基酸取代包含M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；15）所述M蛋白的氨基酸取代包含H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；16）所述M蛋白的氨基酸取代包含L111A、A133T、V221F、V225I、S226R；17）所述M蛋白的氨基酸取代包含A133T、V221F、V225I、S226R；
18）所述M蛋白的氨基酸取代包含V221F、V225I、S226R；19）所述M蛋白的氨基酸取代包含V225I、S226R；20）所述M蛋白的氨基酸取代包含S226R；21）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、N49D、H54Y、V225I；22）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、N49D、H54Y、V225I、S226G；23）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、N49D、M51R、H54Y、V221F、V225I、S226R；24) 所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、V221F、V225I、S226R；25）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、N49D、M51R、H54Y、A133T、V221F、V225I、S226R；26）所述M蛋白的氨基酸取代包含N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、A133T、V221F、V225I、S226R；27）所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、N49D、M51A、H54Y、L111A、V225I、S226R。6.根据权利要求5所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白的氨基酸取代包含G21E、N32S、M33A、N49D、M51R、H54Y、L111A、A133T、V221F、V225I、S226R。7.根据权利要求5所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述M蛋白包含如SEQ ID NO 12所示的氨基酸序列。8.溶瘤病毒，其特征在于，包含权利要求1
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7中任一项所述的M蛋白；所述溶瘤病毒还包括G蛋白；所述G蛋白与SEQ ID NO 31所示的氨基酸序列相比，包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第438位、第453位、第471位和第487位。9.根据权利要求8所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述G蛋白还包含以下一个或多个位点的氨基酸取代：第53位、第141位、第172位、第217位、第232位、第331位、第371位、第436位。10.根据权利要求8或9所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述G蛋白的氨基酸取代包含在第53位的缬氨酸突变为异亮氨酸（V53I）；和/或，在第141位的丙氨酸突变为缬氨酸（A141V）；和/或，在第172位的天冬氨酸突变为酪氨酸（D172Y）；和/或，在第217位的赖氨酸突变为谷氨酸（K217E）；和/或，在第232位的天冬氨酸突变为甘氨酸（D232G）；和/或，在第331位的缬氨酸突变为丙氨酸（V331A）；和/或，在第371位的缬氨酸突变为谷氨酸（V371E）；和/或，在第436位的甘氨酸突变为天冬氨酸（G436D）；和/或，在第438位的苏氨酸突变为丝氨酸（T438S）；和/或，在第453位的苯丙氨酸突变为亮氨酸（F453L）；和/或，在第471位的苏氨酸突变为异亮氨酸（T471I）；和/或，在第487位的酪氨酸突变为组氨酸（Y487H）。11.根据权利要求10所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述G蛋白的氨基酸取代选自下组中的任一项：1）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I；2）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V；3）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y；4）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E；5）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G；6）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A；7）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E；8）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、
G436D；9）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S；10）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L；11）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I；12）所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；13）所述G蛋白的氨基酸取代包含A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；14）所述G蛋白的氨基酸取代包含D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；15）所述G蛋白的氨基酸取代包含K217E、D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；16）所述G蛋白的氨基酸取代包含D232G、V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；17）所述G蛋白的氨基酸取代包含V331A、V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；18）所述G蛋白的氨基酸取代包含V371E、G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；19）所述G蛋白的氨基酸取代包含G436D、T438S、F453L、T471I、Y487H；20）所述G蛋白的氨基酸取代包含T438S、F453L、T471I、Y487H；21）所述G蛋白的氨基酸取代包含F453L、T471I、Y487H；22）所述G蛋白的氨基酸取代包含T471I、Y487H；23）所述G蛋白的氨基酸取代包含Y487H。12.根据权利要求11所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述G蛋白的氨基酸取代包含V53I、A141V、D172Y、K217E、D232G、V331A、V371E、G43...

【专利技术属性】
技术研发人员：周国庆，张凡，
申请(专利权)人：上海荣瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：