视网膜色素上皮和感光器双细胞聚集物及其使用方法技术

本文提供了视网膜上皮细胞和感光器的双细胞聚集物培养物以及用于治疗眼部疾病的治疗药物，所述双细胞聚集物培养物用作研究工具，诸如化合物的筛选或用于研究视网膜疾病的模型。模型。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】视网膜色素上皮和感光器双细胞聚集物及其使用方法
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求于2020年5月29日提交的美国临时申请系列号63/032,368的优先权权益，该申请的全部内容通过引用并入本文。
[0003]背景
1.

[0004]本公开总体上涉及干细胞生物学领域。更具体地，它涉及包含视网膜上皮细胞(RPE)与感光器细胞(PR)和/或感光器前体细胞(PRP)(在本文中称作PR/PRP)的双细胞聚集物组合物的组合物。
[0005]2.相关现有技术的描述
[0006]年龄相关黄斑变性(AMD)是一种令人虚弱的病况，在2016年累及美国1100万人以及全世界17000万人，并且在2020年全球患病率预期达到19600万人(Pennington和DeAngelis，2016；Wong等人，2014)。其病因据推测是视网膜色素上皮(RPE)的功能障碍，RPE功能障碍导致感光器死亡和功能障碍(Bhutto和Lutty，2012)。使用RPE的细胞疗法可以有效地治疗AMD、近视性黄斑变性或罕见形式的遗传性黄斑变性，并且目前有几个正在进行的和计划的基于干细胞的恢复视觉功能的临床试验(Oner，2018)。尽管AMD是失明的最常见病因之一，但其他功能障碍，诸如视网膜色素变性、视锥
‑
视杆细胞营养不良和Leber先天性黑矇也主要由感光器功能障碍引起，并且可以通过感光器(PR)移植来解决(Barnea
‑
Cramer等人，2016；Zhou等人，2015；Zhao等人，2017)。
[0007]感光器延伸出外节段，该外节段负责光感测。RPE细胞支持脱落的外节段和其他感光器碎片的再循环，并且支持整体感光器健康(Strauss，2005)。因此，递送RPE与PR和/或PRP(在本文中称作PR/PRP)两者作为双层培养疗法是治疗RPE或感光器功能障碍的病况的潜在机会，比递送单独任一个细胞类型具有更广泛的相关应用。此外，RPE与PR/PRP之间的共生关系可以使得此类治疗更有效。因此，对于用于治疗这些疾病的包含PR/PRP和RPE细胞的双细胞疗法存在着尚未满足的需求。

技术实现思路

[0008]在某些实施方案中，本公开提供了双细胞聚集物组合物，所述双细胞聚集物组合物包含视网膜色素上皮细胞(RPE)与感光器和/或感光器前体细胞(PR/PRP)。在特定的方面，所述组合物无外源物质、无饲养层且成分限定。
[0009]在一些方面，RPE是表达斑萎蛋白(Bestrophin
‑
1，BEST1)和/或ZO
‑
1的成熟RPE。在某些方面，RPE是基本上不表达BEST1和/或ZO
‑
1的未成熟RPE。在某些方面，RPE是极化的。在其他方面，RPE是未极化的。
[0010]在某些方面，所述组合物基本上不含生物可吸收的支架和/或细胞外基质(ECM)蛋白。在一些方面，在所述双细胞聚集物组合物组装时，PR/PRP与RPE的比率为约2:1至约500:1，诸如约2:1至约10:1，约10:1至50:1，约50:1至约100:1，或约100:1至约500:1。在某些方
面，在所述双细胞聚集物组合物组装时，PR/PRP与RPE的比率为约1:1至约100:1。
[0011]在一些方面，所述RPE和/或所述PR/PRP衍生自多能干细胞(PSC)。在特定的方面，PSC是诱导性多能干细胞(iPSC)或胚胎干细胞(ESC)。例如，iPSC是人iPSC(hiPSC)。在某些方面，PR/PRP不衍生自类器官。在一些方面，所述RPE和/或所述PR/PRP事先被冷冻保存。在具体的方面，冷冻保存的RPE和/或PR/PRP已进行复苏并培养至少一周。
[0012]在特定的方面，所述RPE和PR/PRP以约100万个细胞/mL至约1000万个细胞/mL的密度形成，诸如约1百万、2百万、3百万、4百万、5百万、6百万、7百万、8百万、9百万或1000万个细胞/mL。在具体的方面，所述RPE和PR/PRP以约500万个细胞/mL的密度形成。
[0013]在一些方面，所述RPE和/或所述PR/PRP来自相同的供体。在特定的方面，所述PR/PRP是视杆细胞倾向的(rod
‑
predisposed)。在一些方面，所述PR/PRP是视锥细胞倾向的(cone
‑
predisposed)。
[0014]进一步的实施方案提供了包含本专利技术实施方案或其各个方面的双细胞聚集物组合物(例如，包含RPE与PR/PRP的双细胞聚集物组合物)的药物组合物。在一些方面，所述双细胞聚集物组合物包含200,000
‑
3,000,000个细胞，诸如300,000
‑
2,000,000个细胞、400,000
‑
1,500,000个细胞、500,000
‑
1,000,000个细胞、600,000
‑
750,000个细胞或675,000
‑
725,000个细胞。在特定的方面，所述双细胞聚集物组合物包含约700,000个细胞。在具体的方面，所述双细胞聚集物组合物包含700,000个细胞。
[0015]在另外的方面，所述组合物进一步包含透明质酸盐。在一些方面，透明质酸盐以小于约0.5％，诸如约0.4％、0.3％、0.2％或约0.1％的浓度加入。
[0016]在进一步的方面，所述组合物进一步包含碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠和/或磷酸氢二钠。在一些方面，所述双细胞聚集物组合物被冷冻保存。
[0017]另一个实施方案提供了产生本专利技术实施方案或其各个方面的双细胞聚集物组合物(例如，包含RPE与PR/PRP的双细胞聚集物组合物)的方法，包括将RPE和PR/PRP接种在包含ROCK抑制剂的培养基中，并培养足以产生所述双细胞聚集物组合物的时间段。
[0018]在一些方面，所述RPE和PR/PRP作为基本上单细胞的悬液接种。在其他方面，所述RPE作为基本上单细胞的悬液接种，并且所述PR/PRP作为聚集物接种。
[0019]在特定的方面，ROCK抑制剂是Y
‑
27632。在具体的方面，Y
‑
27632以10μM的浓度加入。
[0020]在一些方面，在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE的比率为约2:1至约500:1，诸如约2:1至约10:1、约10:1至50:1、约50:1至约100:1或约100:1至约500:1。在具体的方面，在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE比率为约100:1。
[0021]在进一步的方面，培养基进一步包含前列腺素E2(PGE
‑
2)。在一些方面，所述RPE事先在PGE
‑
2的存在下培养。
[0022]在一些方面，所述PR/PRP表达PRPH2。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双细胞聚集物组合物，包含视网膜色素上皮细胞(RPE)与感光器和/或感光器前体细胞(PR/PRP)。2.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物无外源物质，无饲养层，且成分限定。3.权利要求1或2所述的组合物，其中所述RPE是表达斑萎蛋白
‑
1(BEST1)和/或ZO
‑
1的成熟RPE。4.权利要求1或2所述的组合物，其中所述RPE是基本上不表达BEST1和/或ZO
‑
1的未成熟RPE。5.权利要求1
‑
4中任一项所述的组合物，其中所述RPE是极化的。6.权利要求1
‑
4中任一项所述的组合物，其中所述RPE是未极化的。7.权利要求1
‑
5中任一项所述的组合物，其中所述组合物基本上不含生物可吸收的支架和/或细胞外基质(ECM)蛋白。8.权利要求1
‑
7中任一项所述的组合物，其中在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE的比率为约2:1至约500:1。9.权利要求1
‑
7中任一项所述的组合物，其中在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE的比率为约1:1至约100:1。10.权利要求1
‑
9中任一项所述的组合物，其中所述RPE和/或所述PR/PRP衍生自多能干细胞(PSC)。11.权利要求10所述的组合物，其中PSC是诱导性多能干细胞(iPSC)或胚胎干细胞(ESC)。12.权利要求11所述的组合物，其中所述iPSC是人iPSC(hiPSC)。13.权利要求1
‑
12中任一项所述的组合物，其中PR/PRP不衍生自类器官。14.权利要求1
‑
13中任一项所述的组合物，其中所述RPE和/或所述PR/PRP事先被冷冻保存。15.权利要求14所述的组合物，其中所述冷冻保存的RPE和/或PR/PRP已进行复苏并培养至少一周。16.权利要求1
‑
15中任一项所述的组合物，其中所述RPE和PR/PRP以约100万个细胞/mL至约1000万个细胞/mL的密度形成。17.权利要求1
‑
16中任一项所述的组合物，其中所述RPE和PR/PRP以约500万个细胞/mL的密度形成。18.权利要求1
‑
18中任一项所述的组合物，其中所述RPE和/或所述PR/PRP来自相同的供体。19.权利要求1
‑
18中任一项所述的组合物，其中所述PR/PRP是视杆细胞倾向的。20.权利要求1
‑
18中任一项所述的组合物，其中所述PR/PRP是视锥细胞倾向的。21.一种药物组合物，包含权利要求1
‑
20中任一项所述的双细胞聚集物组合物。22.权利要求21所述的药物组合物，进一步包括透明质酸盐。23.权利要求22所述的药物组合物，其中所述透明质酸盐以小于约0.5％的浓度加入。24.权利要求21
‑
23中任一项所述的药物组合物，进一步包括碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化镁、硫酸镁、氯化钠和/或磷酸氢二钠。25.权利要求21
‑
24中任一项所述的药物组合物，其中所述双细胞聚集物组合物被冷冻
保存。26.权利要求21
‑
25中任一项所述的药物组合物，其中所述双细胞聚集物组合物包含200,000
‑
3,000,000个细胞。27.权利要求21
‑
25中任一项所述的药物组合物，其中所述双细胞聚集物组合物包含约700,000个细胞。28.一种产生权利要求1
‑
24中任一项所述的双细胞聚集物组合物的方法，包括将RPE和PR/PRP接种在包含ROCK抑制剂的培养基中，并培养足以产生所述双细胞聚集物组合物的时间段。29.权利要求28所述的方法，其中所述RPE和PR/PRP作为基本上单细胞的悬液接种。30.权利要求28所述的方法，其中所述RPE作为基本上单细胞的悬液接种，并且所述PR/PRP作为聚集物接种。31.权利要求28
‑
30中任一项所述的方法，其中所述ROCK抑制剂是Y
‑
27632。32.权利要求31所述的方法，其中所述Y
‑
27632以10μM的浓度加入。33.权利要求28
‑
32中任一项所述的方法，其中在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE的比率为约2:1至约500:1。34.权利要求28
‑
32中任一项所述的方法，其中在所述双细胞聚集物组合物组装时PR/PRP与RPE的比率为约100:1。35.权利要求28
‑
34中任一项所述的方法，其中所述培养基进一步包含前列腺素E2(PGE
‑
2)。36.权利要求28
‑
34中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：富士胶片细胞动力公司，
类型：发明
国别省市：