SKP-SC-EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用制造技术

本申请公开了皮肤前体细胞诱导的施万细胞来源的囊泡（SKP

【技术实现步骤摘要】
SKP
‑
SC
‑
EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用


[0001]本申请属于生物医学领域，具体涉及SKP
‑
SC
‑
EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用。

技术介绍

[0002]帕金森病（Parkinson
’
s disease, PD）是常见的神经退行性疾病之一，其病理学的关键特征是黑质纹状体
‑
多巴胺能通路的变性，主要临床表现包括运动症状和非运动症状，运动症状包括运动迟缓、静止性震颤、僵硬和姿势不稳等，非运动症状包括感觉障碍、睡眠障碍、自主神经功能障碍、神经精神障碍等。目前PD发病机制仍然不明确，最主要的治疗手段是药物治疗，左旋多巴制剂是最有效的药物，但目前的治疗手段主要是改善症状，不能阻止多巴胺能神经元死亡和病情的进展。
[0003]随着干细胞技术的发展，使用干细胞疗法治疗帕金森病的研究取得了重大的突破，有望为PD的治疗带来彻底的变革。干细胞在体内可以通过替代神经元、分泌神经营养因子、调节神经微环境等作用等机制发挥神经修复和神经保护作用。目前研究采用的干细胞主要有：诱导性多能干细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、神经干细胞等。
[0004]皮肤前体细胞（skin
‑
derived precursors, SKPs）来自胚胎期神经嵴干细胞，并且存在于成体期，可从成人皮肤中获得，来源丰富，取材方便，在体外易于培养和扩增。啮齿动物和人的皮肤来源前体细胞均可分化为皮肤来源前体诱导的施万细胞（SKP
‑
SCs），可在体外进行大量扩增，并被证明可以促进周围神经的再生。研究发现在6
‑
OHDA诱导的SH
‑
SY5Y细胞PD模型中，SKP
‑
SCs可以通过PI3K/AKT/Bcl
‑
2通路降低6
‑
OHDA诱导的细胞毒性，调节自噬，发挥神经保护作用。在6
‑
OHDA诱导的小鼠PD模型中，通过脑立体定位注射SKP
‑
SCs可以缓解6
‑
OHDA诱导的行为学损伤，减少多巴胺能神经元丢失。但是细胞移植进入体内后其归属、生物学效应和安全性等问题目前并不完全清楚，并且移植细胞多为同种异体来源，移植后会导致免疫原性不利于临床推广。
[0005]近年来使用细胞来源的囊泡（EVs）来代替细胞的疗法的正在兴起。囊泡包含多种生物活性物质（蛋白质、mRNA、microRNA、lncRNA和DNA等），从细胞释放后被目标细胞摄取从而引发相应的生物学效应。近年来研究表明多种细胞来源的囊泡是神经系统细胞间相互作用的重要方式，通过调节再生微环境在周围神经发育和再生过程中起着重要作用。干细胞分泌的囊泡可穿越血脑屏障，对PD模型动物具有一定的保护能力。囊泡可在体外大量获得，更易于进行质量控制，在安全性和监管方面更具有优势。与细胞相比，其又具有免疫学惰性，不需要自体来源。囊泡还可结合体外培养修饰以调节释放成分的组成，更利于后期的量化使用。

技术实现思路

[0006]本申请提供SKP
‑
SC
‑
EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用，以解决尚无针对帕金森病的专门临床药物的技术问题的技术问题。
[0007]为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：SKP
‑
SC
‑
EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用。
[0008]本申请采用的另一个技术方案是：一种治疗帕金森病的产品，包含SKP
‑
SC
‑
EVs。
[0009]优选的，SKP
‑
SCs
‑
EVs浓度达到4.9
×
10
10 Particles/ml。
[0010]优选的，SKP
‑
SCs
‑
EVs的粒径大于等于80nm且小于等于220nm。
[0011]优选的，产品包括滴液、口服液、保健品。
[0012]一种SKP
‑
SC
‑
EVs对Rot/MPP
+
减少损伤SH
‑
SY5Y细胞的验证方法，包含以下步骤：S11.培养SH
‑
SY5Y细胞；S12.在包含SH
‑
SY5Y细胞的细胞悬液中先后加入SKP
‑
SC
‑
EVs溶液以及Rot或MPP
+
溶液；S13.基于CCK8试剂，检测SH
‑
SY5Y细胞的活性。
[0013]一种SKP
‑
SC
‑
EVs对MPTP诱导的PD模型的验证方法，包含以下步骤：S21.基于MPTP诱导溶液，构建小鼠PD模型；S22.基于SKP
‑
SC
‑
EVs溶液，对小鼠PD模型进行鼻饲；S23.对小鼠PD模型进行尼氏染色或TH免疫荧光染色。
[0014]本申请的有益效果是：本申请提供了皮肤前体细胞诱导的施万细胞来源的囊泡（SKP
‑
SC
‑
EVs），在鱼藤酮或1
‑
甲基
‑4‑
苯基吡啶离子（MPP
+
）诱导的细胞损伤中SKP
‑
SC
‑
EVs可以增加细胞活力，在1
‑
甲基
‑4‑
苯基
‑
1,2,3,6
‑
四氢吡啶（MPTP）诱导的小鼠帕金森病模型中，采用鼻腔滴注的方法给予SKP
‑
SC
‑
EVs，通过行为学等检测小鼠运动能力、嗅觉功能恢复情况，该方法可用于研究和治疗帕金森病。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：图1为本申请中的SKP和诱导分化的SKP
‑
SC培养光镜和免疫细胞化学染色鉴定图；（A）SKP培养至第三代，细胞呈球形集落生长；（b）SKP免疫细胞化学染色鉴定图；（C）SKP
‑
SC培养光镜图；（D）SKP
‑
SC免疫细胞化学染色鉴定图；图2为本申请中的SKP
‑
SC来源EVs鉴定图；（A）NTA检测EVs粒径；（B）Western Blot 检测EVs标记物CD9、CD81和TSG101。
[0016]图3为本申请中的SKP
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SC
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EVs对损伤SH
‑
SY5Y细胞活力的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SKP
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SC
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EVs在制备治疗帕金森病的产品中的应用。2.一种治疗帕金森病的产品，其特征在于，包含SKP
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SC
‑
EVs。3.根据权利要求2所述的一种治疗帕金森病的产品，其特征在于，所述SKP
‑
SCs
‑
EVs浓度达到4.9
×
10
10 Particles/ml。4.根据权利要求3所述的一种治疗帕金森病的产品，其特征在于，所述SKP
‑
SCs
‑
EVs的粒径大于等于80nm且小于等于220nm。5.根据权利要求2所述的一种治疗帕金森病的产品，其特征在于，所述产品包括滴液、口服液、保健品。6.一种SKP
‑
SC
‑
EVs对Rot/MPP
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琦，丁斐，贺倩茹，沈宓，从猛，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：