干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途制造技术

本发明专利技术公开了干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，将神经干细胞体外定向分化为少突胶质前体细胞，以水凝胶微球为载体负载少突胶质前体细胞，得到细胞微载体，细胞微载体与药学上可接受的辅料制备成可注射的制剂，其中所述水凝胶微球由明胶衍生物和羧甲基壳聚糖制备而成。本发明专利技术提供的细胞微载体能够为细胞提供支撑保护作用，保证细胞的完整性，提高细胞有效注入率，同时还能促进少突胶质前体细胞发育成熟，提高其分化效率和髓鞘生成；将细胞微载体与药学上可接受的辅料制备成可注射的制剂，用于治疗脑白质病时表现出优异的髓鞘修复效果。修复效果。修复效果。

【技术实现步骤摘要】
干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途。

技术介绍

[0002]脑白质病是一组具体病因尚不明确的中枢神经系统脱髓鞘性疾病。细胞疗法是一种利用活性细胞对组织、器官进行修复的方法，用于细胞疗法的细胞主要有干细胞、成熟的功能细胞、本体细胞、异种细胞和转分化细胞，将干细胞体外定向分化为少突胶质前体细胞，并用于脑白质病的治疗，是相关领域技术人员的重点研究方向。少突胶质前体细胞(OPCs)为中枢神经系统中少突胶质细胞的前体细胞，可在脑发育过程中增殖分化形成少突胶质细胞，后者在中枢神经系统中形成髓鞘，移植体外扩增培养的OPCs给髓鞘再生带来了希望。
[0003]申请号为201310455895.3的专利提供了一种诱导神经干/祖细胞分化为少突胶质前体细胞的诱导培养基及其诱导方法和用途，该专利将人神经干／祖细胞经过预处理培养后，在诱导培养基的作用下分化为少突胶质前体细胞，其中诱导培养基的关键成分为bFGF、PDGF
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AA及NT
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3，按该专利所述方法制备得到的少突胶质前体细胞可应用于制备治疗神经系统损伤疾病的药物。细胞疗法一般都需要经过体内提取、体外活化培养、输入体内的过程，而细胞注射是将细胞输入患者体内的一种常用的方法，但在细胞注射的过程中存在一些缺陷，如细胞流失严重、细胞保留率低、有效细胞不足、细胞成活率不高，不仅浪费细胞源，而且影响注入体内的细胞的作用效果。申请号为202011505673.4的专利提供了一种细胞微载体基质及其应用，该专利以甲基丙烯酰化明胶为有效成分制备细胞微载体基质，并将细胞包裹其中，为细胞提供一个三维的支撑作用，避免细胞在注射和移植过程中受到损伤，还可以附带更多的生长因子，对细胞表达和释放有较好的促进作用，但动物试验证实尽管移植的OPCs能够迁移至损伤区域并长期存活，但绝大多数细胞并不能分化为成熟少突胶质细胞，而是保持在前体细胞阶段，OPCs移植到WMD模型大鼠脑内后分化与髓鞘再生困难严重限制了其应用。
[0004]因此，为了提高细胞注射的有效注入率，保证细胞完整性、成活率，促进OPCs体内分化及髓鞘再生，寻找一种合适的细胞微载体或支架材料极具现实意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途。
[0006]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，将神经干细胞体外定向分化为少突胶质前体细胞，以水凝胶微球为载体负载少突胶质前体细胞，得到细胞微载体，细胞微载体与药学上可接受的辅料制备成可注射的制剂；其中所述水凝胶微球由明胶衍生物和羧甲基
壳聚糖制备而成，所述明胶衍生物的结构式为：，其中
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为明胶分子的主链。
[0007]所述明胶衍生物的制备方法为：S1、将明胶分散于去离子水中，于50
‑
65℃搅拌溶解，冷却至35
‑
45℃，加入高碘酸钾（KIO4），避光反应5
‑
8h，再加入乙二醇，继续搅拌0.5
‑
1h，经透析、冷冻干燥，得到醛基化明胶；S2、咪康唑溶于N，N
‑
二甲基甲酰胺，得到溶液1，反
‑3‑
氯丙烯酸溶于去离子水，得到溶液2，在氮气氛围下，向溶液1中滴加溶液2并进行搅拌，于0.5
‑
1h滴加完毕，升温至30
‑
35℃，继续搅拌7
‑
9h，得到反应混合物，经旋蒸、萃取、浓缩、干燥，得到咪康唑衍生物；S3、将步骤S1所得醛基化明胶分散于去离子水中，升温至60
‑
75℃，搅拌20
‑
30min，再依次加入氢氧化钠、步骤S2所得咪康唑衍生物、苄基三乙基氯化铵，继续搅拌3
‑
4h，用盐酸调节pH为6
‑
7，经透析、冷冻干燥，得到明胶衍生物。
[0008]本专利技术所述明胶是胶原部分水解而得到的一类蛋白质，具有良好的生物降解性、生物相容性、组织相容性，具有可以连接其它配体的活性基团，可以用单凝聚、复凝聚等方法制备微囊或微球，还具有较大的包封率和载药量，有的载药微球可以长期贮存（25年以上）无明显变化。明胶具有许多优异的性质与性能，但也不可避免地具有一些不足之处，因而需要通过一定的手段来予以弥补和使之消除，或者使之具有新的性质与性能。对明胶进行化学改性，在明胶结构中引入醛基和咪康唑，为动态亚胺键的形成提供醛基反应位点。本专利技术以明胶为反应原料，以高碘酸钾为氧化剂，将明胶结构中的羟基氧化为醛基，得到醛基化明胶，咪康唑与反
‑3‑
氯丙烯酸反应得到咪康唑衍生物，醛基化明胶与咪康唑衍生物在氢氧化钠及苄基三乙基氯化铵催化作用下，进行N
‑
烷基化反应，即得明胶衍生物。
[0009]为了得到醛基化明胶，步骤S1中所述明胶、去离子水、高碘酸钾、乙二醇的质量比为1:15
‑
25:1.1
‑
1.3:0.8
‑
1.2；为了在明胶结构中引入咪康唑，并保证产物一致性，步骤S2中所述溶液1中咪康唑的质量浓度为0.16
‑
0.20g/mL，溶液2中反
‑3‑
氯丙烯酸的质量浓度为
0.1
‑
0.15g/mL，咪康唑与反
‑3‑
氯丙烯酸的摩尔比为1:0.6
‑
0.9，旋蒸前向反应混合物中加入去离子水，使反应混合物中N，N
‑
二甲基甲酰胺与去离子水的体积比为1:10
‑
12；步骤S3中所述醛基化明胶、氢氧化钠、咪康唑衍生物、苄基三乙基氯化铵的质量比为20
‑
25:1:8
‑
10:0.9
‑
1.0，所述去离子水中醛基化明胶的加入量为0.13
‑
0.15g/mL。
[0010]所述细胞微载体的制备方法为：（1）将明胶衍生物、羧甲基壳聚糖分散于去离子水中，经高速均质处理、真空过滤灭菌后，加入含有少突胶质前体细胞的细胞悬液，吹打均匀，得到预制溶液，其中预制溶液中明胶衍生物的加入量为0.03
‑
0.06g/mL，所述预制溶液中羧甲基壳聚糖的加入量为0.02
‑
0.04g/mL，所述高速均质处理是于1000
‑
1200r/min处理10
‑
15s；（2）将步骤（1）所得预制溶液滴入无菌矿物油中，升温至36
‑
38℃，保温10
‑
12h，得到负载细胞的水凝胶微球，过滤收集，用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）清洗，即得可注射的细胞微载体。
[0011]本专利技术所述羧甲基壳聚糖具有优良的水溶性、抗菌性、保湿性和抗氧化性，作为药物载体具有亲水性、胶凝性、促渗透本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，其特征在于，将神经干细胞体外定向分化为少突胶质前体细胞，以水凝胶微球为载体负载少突胶质前体细胞，得到细胞微载体，细胞微载体与药学上可接受的辅料制备成可注射的制剂；其中所述水凝胶微球由明胶衍生物和羧甲基壳聚糖制备而成，所述明胶衍生物的结构式为：，其中 为明胶分子的主链。2.根据权利要求1所述的干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，其特征在于，所述明胶衍生物的制备方法为：S1、将明胶分散于去离子水中，于50
‑
65℃搅拌溶解，冷却至35
‑
45℃，加入高碘酸钾，避光反应5
‑
8h，再加入乙二醇，继续搅拌0.5
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1h，经透析、冷冻干燥，得到醛基化明胶；S2、咪康唑溶于N，N
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二甲基甲酰胺，得到溶液1，反
‑3‑
氯丙烯酸溶于去离子水，得到溶液2，在氮气氛围下，向溶液1中滴加溶液2并进行搅拌，于0.5
‑
1h滴加完毕，升温至30
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35℃，继续搅拌7
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9h，得到反应混合物，经旋蒸、萃取、浓缩、干燥，得到咪康唑衍生物；S3、将步骤S1所得醛基化明胶分散于去离子水中，升温至60
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75℃，搅拌20
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30min，再依次加入氢氧化钠、步骤S2所得咪康唑衍生物、苄基三乙基氯化铵，继续搅拌3
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4h，用盐酸调节pH为6
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7，经透析、冷冻干燥，得到明胶衍生物。3.根据权利要求2所述的干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，其特征在于，步骤S1中所述明胶、去离子水、高碘酸钾、乙二醇的质量比为1:15
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25:1.1
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1.3:0.8
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1.2。4.根据权利要求2所述的干细胞在制备治疗脑白质病的制剂中的用途，其特征在于，步骤S2中所述溶液1中咪...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜浩为，李慧娟，
申请(专利权)人：深圳汉盛汇融再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：