本发明专利技术公开了lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的应用。本发明专利技术通过预测lncRNA IFA序列中与ACTG1的mRNA互补的序列，通过Pull down及实验检测了lncRNA IFA与ACTG1mRNA的结合；通过qPCR检测了lncRNA IFA与ACTG1在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞中的表达量，在过表达和干扰lncRNA IFA后检测了ACTG1的表达水平，发现lncRNA IFA可以促进ACTG1的表达；在过表达和干扰ACTG1后通过CCK8、EdU、流式细胞术检测到ACTG1可以促进卵巢颗粒细胞的增殖、抑制凋亡，同时增强卵巢颗粒细胞的细胞活性，加快卵巢颗粒细胞的细胞周期进程，为ACTG1的表达调控机制研究积累了材料。料。料。
【技术实现步骤摘要】
LncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的应用
[0001]本专利技术属于细胞工程和基因工程
，具体涉及lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的应用。
技术介绍
[0002]LncRNA通常指长度超过200个核苷酸连接的内源性细胞RNA分子，具有与mRNA类似的结构，但不具备蛋白编码的能力。LncRNA IFA(Inhibitor of Follicular Atresia，暂命名)为针对猪卵巢颗粒细胞进行RNA
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seq所获得的lncRNA。LncRNA IFA可以抑制卵巢颗粒细胞的凋亡、促进卵巢颗粒细胞的增殖与细胞周期进程，并增强卵巢颗粒细胞的细胞活性。
[0003]在真核细胞中，肌动蛋白具有多种重要的生物功能，除了提供结构框架来维系细胞的形状和极性外，还参与调控细胞的迁移、增殖及凋亡。ACTG1(肌动蛋白γ1)是肌动蛋白的一种，在细胞内表达量一般较高，起到维持细胞骨架，保持细胞形态与运动能力的作用。ASAP3的缺失会破坏ACTG1的稳定性，从而抑制癌细胞迁移；ACTG1在体外通过下调细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶调控细胞周期，促进细胞增殖，并通过调控线粒体功能抑制细胞凋亡；过表达ACTG1可增加6
‑
OHDA诱导的帕金森病细胞模型的凋亡；RRAD通过下调ACTG1抑制肝细胞癌(HCC)细胞的增殖。
[0004]大量的研究普遍认为，卵泡的发育、排卵过程和颗粒细胞的增殖分化有着密切联系，而颗粒细胞的过度凋亡会引起卵泡闭锁。
[0005]另外，目前已经有研究表明，lncRNA可以和mRNA直接结合，进而影响RNA分子的稳态，调控靶基因的表达，从而发挥自身的生物学作用。例如lncRNA
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PXN
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AS1可以通过靶向PXN的mRNA来提高PXN的RNA分子稳态，从而增加PXN的表达，从而促进肝癌的发生。
技术实现思路
[0006]为解决相关问题，本专利技术的首要目的在于提供一种lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]一种lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法，体外环境下，lncRNA IFA正调控ACTG1的表达；通过调节lncRNA IFA的表达水平，可实现猪卵巢颗粒细胞中ACTG1表达的调控；所述的lncRNA IFA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0010]进一步地，lncRNA IFA的表达水平上升，ACTG1表达量升高；lncRNA IFA的表达水平下降，ACTG1表达量降低。
[0011]进一步地，lncRNA IFA的表达水平上升通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：
[0012](1)提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；
[0013](2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamH I和Xba I酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。
[0014]步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下所示：
[0015]lncRNA IFA F：5
’‑
GGCGATGCCTGGGTACATGG
‑3’
；
[0016]lncRNA IFA R：5
’‑
GAGACCGCGTCCACTCCGCC
‑3’
。
[0017]进一步地，lncRNA IFA的表达水平下降通过RNA干扰技术实现。
[0018]采用的siRNA的靶向序列为：5
’‑
TGACCTGGGCGACGTAGCA
‑3’
(SEQ ID NO.6)。
[0019]ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，体外环境下，所述ACTG1正调控猪卵巢颗粒细胞增殖、细胞凋亡、细胞活性、细胞周期进程中的任意一种或多种功能表型。
[0020]进一步地，增加外源性ACTG1，促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高细胞活性和/或加快细胞周期进程；抑制ACTG1表达，抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞活性和/或阻滞细胞周期进程。
[0021]进一步地，增加外源性ACTG1通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：
[0022](1)提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；
[0023](2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamH I和Xba I酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体。
[0024]步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下所示：
[0025]ACTG1 F：5
’‑
GCTCCGCTTAAATAGGGGCG
‑3’
；
[0026]ACTG1 R：5
’‑
GTACGCATCTGCTCGCAGTC
‑3’
[0027]进一步地，抑制ACTG1表达通过RNA干扰技术实现。
[0028]采用的siRNA的靶向序列为：5
’‑
CCGACTACCTCATGAAGAT
‑3’
(SEQ ID NO.7)。
[0029]ACTG1和/或其相关生物材料在制备药物中的应用，所述的药物为下述药物中的任意一种或多种组合：
[0030]Ⅰ.促进猪卵巢颗粒细胞增殖的药物；
[0031]Ⅱ.抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的药物；
[0032]Ⅲ.提高猪卵巢颗粒细胞活性的药物；
[0033]Ⅳ.加快猪卵巢颗粒细胞的细胞周期进程的药物；
[0034]Ⅴ
.促进卵泡发育的药物。
[0035]进一步地，所述的ACTG1相关生物材料，为下述生物材料中的任意一种或多种组合：
[0036]1)编码ACTG1的DNA分子；
[0037]2)含有1)中所述DNA分子的表达盒；
[0038]3)含有1)中所述DNA分子的重组载体，或含有2)中所述表达盒的重组载体；
[0039]4)含有1)中所述DNA分子的重组细胞，或含有2)中所述表达盒的重组细胞，或含有3)所述重组载体的重组细胞。
[0040]LncRNA IFA(Inhibitor of Follicular Atresia，暂命名)为针对猪卵巢颗粒细胞进行RNA
‑
seq所获得的lncRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0041]本专利技术前期通过基因工程和细胞工程技术，研究了lncRNA IFA对卵巢颗粒细胞增殖、细胞凋亡、细胞活性、细胞周期的影响，证实了lncRNA IFA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法，其特征在于：体外环境下，lncRNA IFA正调控ACTG1的表达；通过调节lncRNA IFA的表达水平，可实现猪卵巢颗粒细胞中ACTG1表达的调控；所述的lncRNA IFA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法，其特征在于：lncRNA IFA的表达水平上升，ACTG1表达量升高；lncRNA IFA的表达水平下降，ACTG1表达量降低。3.根据权利要求2所述的lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法，其特征在于：lncRNA IFA的表达水平上升通过基因过表达技术实现，采用的基因过表达载体通过如下方式制备得到：(1)提取猪卵巢颗粒细胞的RNA，将其逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到目的片段；(2)将目的片段连接到用限制性内切酶BamH I和Xba I酶切后的pcDNA3.1载体上，得到重组载体；步骤(1)中进行PCR扩增所用引物如下所示：lncRNA IFA F：5
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GGCGATGCCTGGGTACATGG
‑3’
；lncRNA IFA R：5
’‑
GAGACCGCGTCCACTCCGCC
‑3’
。4.根据权利要求2所述的lncRNA IFA调控ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中表达的方法，其特征在于：lncRNA IFA的表达水平下降通过RNA干扰技术实现；采用的siRNA的靶向序列为：5
’‑
TGACCTGGGCGACGTAGCA
‑3’
。5.ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：体外环境下，所述ACTG1正调控猪卵巢颗粒细胞增殖、细胞凋亡、细胞活性、细胞周期进程中的任意一种或多种功能表型。6.根据权利要求5所述的ACTG1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：增加外...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁晓龙，李加琪，李念，张哲，张豪，郭懿萱，李硕，胡梦婷，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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