一种纯化蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种纯化蛋白的方法，所述方法包括可操作的连接编码信号肽、标签、蛋白酶裂解位点的核酸至编码目的蛋白的核酸序列上，从而生成编码融合蛋白的表达载体；将所述的表达载体导入宿主细胞。本发明专利技术还提供了由上述方法构建而成的蛋白、编码蛋白的核酸以及一种表达载体及宿主细胞。经实验证明，使用本发明专利技术的方法纯化的蛋白具有较高的表达量和纯度。方法纯化的蛋白具有较高的表达量和纯度。方法纯化的蛋白具有较高的表达量和纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种纯化蛋白的方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种纯化蛋白的方法。

技术介绍

[0002]目前，无论是实验室规模还是工业生产领域，蛋白纯化都是基因工程和蛋白质工程中的关键环节。据统计，基因工程产品的分离纯化成本约占到其全部成本的60％
‑
80％。已经开发出高效的原核、真菌和真核细胞类蛋白表达体系，然而，不论通过何种体系表达，目的蛋白都可能与组织和细胞中的其它蛋白相互作用形成复杂的混合物，造成分离纯化十分困难。
[0003]因此，提供一种操作简便，纯度高的纯化蛋白的方法是本领域亟需解决的问题。

技术实现思路

[0004]为弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种纯化蛋白的方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面提供了一种纯化蛋白的方法，所述方法包括：
[0007](1)可操作的连接编码信号肽、标签、蛋白酶裂解位点的核酸至编码目的蛋白的核酸序列上，从而生成编码融合蛋白的表达载体；
[0008](2)将所述的表达载体导入宿主细胞。
[0009]进一步，步骤(1)所述的信号肽、标签、蛋白酶裂解位点与目的蛋白依次连接。
[0010]进一步，所述信号肽包括CD33信号肽、人生长激素信号肽、hIG1 Kappa轻链信号肽、β2微球蛋白信号肽或IL2信号肽。
[0011]进一步，所述信号肽选自CD33信号肽。
[0012]进一步，所述CD33信号肽序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]进一步，所述标签包括HA标签、His标签、Flag标签、c
‑
Myc标签、V5标签或C9标签。
[0014]进一步，所述标签选自His标签。
[0015]进一步，所述His标签包括1
‑
20个组氨酸残基。
[0016]进一步，所述His标签包括6
‑
10个组氨酸残基。
[0017]进一步，所述His标签选自10个组氨酸残基。
[0018]进一步，所述His
‑
标签还包括(His
x
‑
R
y
)
z
，其中R是非His残基，且x、y、和z是正整数。
[0019]进一步，所述R为丙氨酸残基。
[0020]进一步，所述His标签序列如SEQ ID NO.4所示。
[0021]进一步，所述蛋白酶裂解位点如SEQ ID NO.5所示。
[0022]进一步，所述目的蛋白选自KLKB1蛋白。
[0023]进一步，所述KLKB1蛋白包括全长、部分截短的或截短的KLKB1蛋白。
[0024]进一步，所述KLKB1蛋白选自截短的KLKB1蛋白。
[0025]进一步，所述截短的KLKB1蛋白序列如SEQ ID NO.6所示。
[0026]进一步，步骤(2)所述宿主细胞包括原核宿主细胞、真核宿主细胞。
[0027]进一步，所述宿主细胞选自真核宿主细胞。
[0028]进一步，所述真核宿主细胞包括哺乳动物细胞、昆虫、酵母。
[0029]进一步，所述真核宿主细胞选自哺乳动物细胞。
[0030]进一步，所述哺乳动物细胞包括啮齿动物细胞、人细胞。
[0031]进一步，所述哺乳动物细胞选自人细胞。
[0032]进一步，所述人细胞包括Hela、HEK293、H9、Per.C6、Jurkat细胞。
[0033]进一步，所述人细胞选自HEK293细胞。
[0034]本专利技术的第二方面提供了一种蛋白，所述蛋白由本专利技术第一方面所述的方法制备而成。
[0035]本专利技术的第三方面提供了一种核酸，所述核酸包括编码本专利技术第二方面所述的蛋白的核苷酸序列。
[0036]本专利技术的第四方面提供了一种表达载体，所述表达载体包括本专利技术第三方面所述的核酸。
[0037]本专利技术的第五方面提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括本专利技术第四方面所述的表达载体。
[0038]本专利技术的优点和有益效果：
[0039]本专利技术将CD33信号肽、His标签、蛋白酶裂解位点与KLKB1蛋白依次连接，对融合后的蛋白进行纯化，结果表明，本专利技术提供的蛋白纯化方法纯化的蛋白具有较高的表达量和纯度，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0040]图1是序列1蛋白表达、纯化后电泳检测结果图；
[0041]图2是序列2蛋白表达、纯化后电泳检测结果图；
[0042]图3是序列3蛋白表达、纯化后电泳检测结果图；
[0043]图4是序列4蛋白表达、纯化后电泳检测结果图；
[0044]图5是序列5蛋白表达、纯化后电泳检测结果图。
具体实施方式
[0045]下文提供了本说明书中使用的一些术语的定义。除非另有说明，本文中使用的所有技术和科学用语通常具有和本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的意思相同的意思。
[0046]本专利技术提供了一种纯化蛋白的方法，所述方法包括：
[0047](1)可操作的连接编码信号肽、标签、蛋白酶裂解位点的核酸至编码目的蛋白的核酸序列上，从而生成编码融合蛋白的表达载体；
[0048](2)将所述的表达载体导入宿主细胞。
[0049]进一步，步骤(1)所述的信号肽、标签、蛋白酶裂解位点与目的蛋白依次连接。
[0050]在本专利技术中，信号肽(也称为信号序列、前导序列或前导肽)在结构上通过疏水性
氨基酸链段来表征，其具有形成单个α
‑
螺旋的趋势。这个疏水性链段通常紧接在富含正电荷氨基酸(尤其是赖氨酸)的较短链段后。从成熟多肽切下的信号肽通常终止于被信号肽酶识别和切割的一段氨基酸。指导多肽基因产物插入膜中的信号肽，有时称为信号锚定序列，可以缺少被信号肽酶切割的氨基酸序列，并且在这种情况下保留在多肽基因产物中。信号肽通常可以通过在翻译的同时或翻译后将多肽指引转运到胞质外，并且例如通过原核生物的质膜(或革兰氏阴性细菌如大肠杆菌的内膜)，或转运至真核细胞的内质网中的能力来功能表征。
[0051]本专利技术的信号肽包括但不限于人生长激素信号肽、hIG1Kappa轻链信号肽、β2微球蛋白信号肽、CD33信号肽或IL2信号肽，信号肽的长度可以在3
‑
33，3
‑
10，10
‑
30，10
‑
20，15
‑
30或20
‑
30个氨基酸之间。
[0052]在本专利技术的具体实施方案中，信号肽选自CD33信号肽，在本专利技术中CD33信号肽可以与SP1互换使用。
[0053]在本专利技术中，标签指可用作标志物的任何化学结构，本专利技术的标签包括但不限于组氨酸(His)标签(特别是聚组氨酸标签)、精氨酸标签(特别是聚精氨酸标签)、抗体的肽底物、几丁质结合结构域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)可操作的连接编码信号肽、标签、蛋白酶裂解位点的核酸至编码目的蛋白的核酸序列上，从而生成编码融合蛋白的表达载体；(2)将所述的表达载体导入宿主细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的信号肽、标签、蛋白酶裂解位点与目的蛋白依次连接。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述信号肽包括CD33信号肽、人生长激素信号肽、hIG1 Kappa轻链信号肽、β2微球蛋白信号肽或IL2信号肽；优选的，所述信号肽选自CD33信号肽；优选的，所述CD33信号肽序列如SEQ ID NO.3所示。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述标签包括HA标签、His标签、Flag标签、c
‑
Myc标签、V5标签或C9标签；优选的，所述标签选自His标签；优选的，所述His标签包括1
‑
20个组氨酸残基；优选的，所述His标签包括6
‑
10个组氨酸残基；优选的，所述His标签选自10个组氨酸残基；优选的，所述His
‑
标签还包括(His
x
‑
R
y
)
z
，其中R是非His残基，且x、y、和z是正整数；优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兰，武刚，于传飞，王文波，杜加亮，付志浩，徐刚领，李萌，刘春雨，俞小娟，段茂芹，杨雅岚，崔春博，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：