一种双壳贝类生长调控基因的功能验证方法技术

本发明专利技术提供了一种双壳贝类生长调控基因的功能验证方法，该方法基于RNA干扰方法，选用侏儒蛤作为验证贝类。该方法具体验证以L4440质粒为载体，利用大肠杆菌HT115表达侏儒蛤胰岛素样肽基因的双链RNA（dsRNA），通过对体型小、繁殖周期短、可在实验室条件下快速生长的模式贝类侏儒蛤饲喂饵料和细菌表达的dsRNA，检测基因表达抑制后个体的生长性状变化。结果表明，dsRNA有效降低了靶基因的表达水平，导致侏儒蛤出现显著的生长迟缓。本发明专利技术明确了适用于生长相关基因功能研究的合适侏儒蛤月龄阶段，并建立了可快速制备大量dsRNA的方法，具有低成本、高效率的优点。高效率的优点。高效率的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种双壳贝类生长调控基因的功能验证方法


[0001]本专利技术属于双壳贝类RNA干扰
，特别是一种双壳贝类生长调控基因的功能验证方法。

技术介绍

[0002]我国是世界第一水产养殖大国，水产养殖产量占世界水产养殖总产量的70％，其中，贝类增养殖是我国水产养殖的支柱产业之一，具有十分重要的产业地位。培育生长快、产量高的优良品种一直是贝类遗传育种的中心目标，也是贝类养殖产业发展的迫切需求。贝类生长调控相关基因的筛查及功能解析可为贝类高产良种培育提供有效的分子工具，从而加快育种进程。目前，双壳贝类生长性状相关基因或者分子标记主要是通过全基因关联分析、数量性状基因位点以及转录组学分析等方法进行筛查获得的。虽然生长相关候选基因的鉴定极大的增强了我们对贝类生长变异遗传基础的理解，但由于绝大多数贝类繁殖周期较长，而且在实验室条件下进行长期养殖和繁育存在困难性，这些生长相关基因的功能验证在双壳贝类中十分受限。
[0003]侏儒蛤(Mulinia lateralis)属于软体动物双壳纲、帘蛤目、蛤蜊科的一种小型埋栖贝类，它具有体型小、生长速度快、世本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双壳贝类生长调控基因的功能验证方法，其特征在于，该方法基于RNA干扰方法，选用侏儒蛤作为验证贝类。2.如权利要求1所述的功能验证方法，其特征在于，该方法具体为：（1）首先筛选双壳贝类生长调控基因，所述双壳贝类选用侏儒蛤；（2）基于所述生长调控基因，即目的基因，构建RNA干扰质粒；（3）通过投喂方法进行RNA干扰质粒干扰；（4）所述目的基因的表达量检测；（5）侏儒蛤表型变化的统计分析，用以进行功能验证。3.如权利要求2所述的功能验证方法，其特征在于，所述步骤（2）中，生长调控基因选为胰岛素样肽ILP基因。4.如权利要求2所述的功能验证方法，其特征在于，所述步骤（2）中，构建RNA干扰质粒具体为：1）设计引物：首先选择目标干扰片段，再根据选定的干扰片段序列设计正反引物：正向引物是MulILP
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RNAi
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F
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XhoI：CCGCTCGAGGTTCAACTTCCGCCGAAAAC，反向引物是MulILP
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RNAi
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R
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SacII：TCCCCGCGGAATGCCCACAAGCTTATCAA；2）扩增目标干扰片段：从侏儒蛤组织中提取目标干扰片段的RNA，随后反转录成cDNA，进行PCR反应，PCR产...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓丽，孔令玲，连姗姗，王慧贞，张翔超，孔祥福，包振民，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：