检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术属于诊断试剂盒技术领域，具体涉及检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途。本发明专利技术通过自行设计的实验方法筛选出了一种新的高尿酸血症肾脏病致病因子ATF3，并通过动物实验对其功能进行了验证。通过上述实验可知，ATF3是高尿酸血症肾脏病的致病因子，通过对受试者ATF3的表达量进行检测，可对其是否患有高尿酸血症肾脏病进行筛查。本发明专利技术为高尿酸血症肾脏病的诊断提供了一种新的指标，有利于高尿酸血症肾脏病的准确诊断，具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途


[0001]本专利技术属于诊断试剂盒
，具体涉及检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途。

技术介绍

[0002]高尿酸血症肾脏病(Hyperuricemia Nephropathy，HN)人群发病率在5.46％
‑
19.30％，患病人数众多且发病人群趋于年轻化，成为继糖尿病之后的第二大代谢病。血液中升高的尿酸及沉积在肾脏中的尿酸结晶可破坏肾脏结构，影响肾脏功能，最终导致尿酸性肾脏病。肾间质纤维化是高尿酸血症肾脏病最为典型的病理改变，也是疾病进展至终末期最常见病理学途径之一，表观遗传调控机制在肾脏纤维化进程中发挥了重要作用。因此，利用多组学技术手段，挖掘高尿酸血症肾脏病关键致病因子，对高尿酸血症肾脏病的准确的诊断，寻找新的药物干预靶点，阻断肾间质纤维化发展，治疗高尿酸血症肾脏病，具有潜在的应用价值。
[0003]目前，高尿酸血症肾脏病诊断标准包括：为高尿酸血症，男性血尿酸水平＞420μmol/L，女性在360μmol/L以上；对于肾脏损伤需要检查尿常规、肾脏结构，以及肾功能，如肾脏肾小球滤过率、血肌酐、血尿素氮的异常。其诊断需要根据多个指标进行综合研判，而由于血尿酸水平和肾损伤的相关指标还受到其他疾病的影响，因此为了提高高尿酸血症肾脏病的诊断准确性，仍然有必要开发更多的诊断指标。
[0004]转录激活因子3(ATF3)是常见的应激反应基因，在机体遭受刺激损伤时表达快速升高，参与多种疾病细胞免疫、炎症反应、器官纤维化等病理过程。目前，ATF3与高尿酸血症肾脏病的关联尚未见到任何文献报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的问题，本专利技术提供检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途，为高尿酸血症肾脏病的诊断提供新的筛查指标。
[0006]检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途。
[0007]优选的，所述ATF3的gene ID为ENSG00000162772。
[0008]优选的，所述试剂包括：
[0009]EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂、
[0010]HiScript III RT superMix for qPCR、
[0011]ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix、
[0012]ATF3引物序列。
[0013]优选的，所述ATF3引物序列包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]优选的，所述高尿酸血症肾脏病具有肾小管损伤或肾间质纤维化中的至少一种症
状。
[0015]本专利技术的专利技术人团队在前期研究工作中发现，小鼠在高尿酸血症肾脏病疾病状态下差异变化的组蛋白修饰位点上存在大量转录因子的富集。因此本专利技术提出了充分利用致病因子基于TAD重塑的调控机制，并整合多组学数据，加入转录因子基序富集分析，从而提出了一种新的方法来识别新型的高尿酸血症肾脏病致病因子。基于该方法，本专利技术首次通过实验筛选出ATF3是高尿酸血症肾脏病的致病因子，因此通过对受试者ATF3的表达量进行检测，可对其是否患有高尿酸血症肾脏病进行初步筛查。本专利技术为高尿酸血症肾脏病的诊断提供了一种新的指标，有利于高尿酸血症肾脏病的准确诊断，具有较好的应用前景。
[0016]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0017]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0018]图1为本专利技术挖掘筛选新的高尿酸血症肾脏致病因子流程示意图，其中，TAD:拓扑相关结构域；PEI:增强子与启动子互作；P：启动子；B：边界；E：增强子。
[0019]图2为各种检测方法挖掘现有技术中已知致病因子的准确度。
[0020]图3为野生型小鼠正常对照组和野生型小鼠高尿酸血症肾脏病组小鼠肾脏多组学测序结果。
[0021]图4为在TCMK
‑
1细胞中分过表达或沉默ATF3后肾脏炎症标志物(a.胱天蛋白酶3；b.白细胞介素6；c.白细胞介素1β.)、肾损伤标志物(d.肿瘤坏死因子
‑
α)、肾纤维化指标(e.α
‑
肌动蛋白)基因表达量变化结果。
[0022]图5为致病因子ATF3在四组小鼠肾脏中的表达量。
[0023]图6为体内敲除ATF3前后小鼠肾脏内ATF3及肾纤维化标志物(Fn：纤维粘连蛋白；Col I：胶原蛋白I；GAPDH：甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶)WB检测结果。分组为WT C：野生型小鼠对照组；WT M：野生型小鼠高尿酸血症肾病模型组；ATF3 KO C：ATF3基因敲除小鼠对照组；ATF3 KO M：ATF3基因敲除小鼠高尿酸血症肾病模型组；
[0024]图7为体内敲除ATF3前后四组小鼠尿酸(UA)水平检测结果。
[0025]图8为体内敲除ATF3前后后四组小鼠肌酐(sCr)水平检测结果。
[0026]图9为四组小鼠肾脏病理(Masson染色及PAS染色)检测结果。
具体实施方式
[0027]需要特别说明的是，实施例中未具体说明的数据采集、传输、储存和处理等步骤的算法，以及未具体说明的硬件结构、电路连接等均可通过现有技术已公开的内容实现。
[0028]实施例1高尿酸血症肾脏病的筛查试剂盒
[0029]本实施例提供一种检测人的肾组织、动物肾组织及细胞样本中ATF3表达量的试剂盒，其组成为：
[0030]1.EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂；
[0031]2.HiScript III RT superMix for qPCR；
[0032]3.ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix；
[0033]4.ATF3引物序列。
[0034]其中，ATF3引物序列具体如下：
[0035]正向引物(SEQ ID NO.1)：5'
‑
CCTCTGCGCTGGAATCAGTC
‑
3'；
[0036]反向引物(SEQ ID NO.2)：5'
‑
TTCTTTCTCGTCGCCTCTTTTT
‑
3'。
[0037]上述试剂盒的使用方法为：
[0038]1.利用EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂，经过裂解细胞，灭活细胞RNA酶，清除DNA，漂洗离心去除蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测ATF3表达量的试剂在制备高尿酸血症肾脏病筛查试剂盒中的用途。2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述ATF3的gene ID为ENSG00000162772。3.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂包括：EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂、HiScript III RT superMix for qPCR、ChamQ SYBR ...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽娜，马良，陈一龙，于浩澎，杨乐天，应志野，孙雅婧，曾筱茜，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：