实现高着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用，属于辅助生殖技术领域，所述标志物包括基因PET100或其表达产物和基因RAB25或其表达产物。本发明专利技术基于已构建的高着床潜能模型，在重新选择的独立样本中，通过对高着床潜能胚胎的成功筛选，证明本研究构建的着床潜能预测标志物在临床应用中真实有效。能预测标志物在临床应用中真实有效。

【技术实现步骤摘要】
实现高着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用


[0001]本专利技术属于辅助生殖
，具体涉及一种实现高着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用。

技术介绍

[0002]辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology，ART)作为治疗不孕症的有效方法，已帮助众多不孕夫妇成功获得后代。促排卵方案、体外受精技术以及胚胎培养系统等关键技术持续优化更新，但是ART总体成功率仍仅为30
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40％左右。挑选发育潜能好的胚胎移植将缩短ART周期、提高临床妊娠率。
[0003]在辅助生殖的临床过程中，还没有单一的标准可以确保筛选到具着床潜能的胚胎。胚胎形态学检查和胚胎植入前遗传学检测(Preimplantation Genetic Testing，PGT)是目前评估胚胎着床及发育潜能的常用手段。胚胎着床前非整倍体检测(Preimplantation Genetic Testing for Aneuploidy，PGT
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A)主要通过基因组测序或基因组杂交芯片检测胚胎染色体数目，通过PGT
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A挑选染色体数目正常的整倍体胚胎；胚胎着床前染色体结构变异检测(Preimplantation Genetic Testing for Chromosomal Structural Rearrangements，PGT
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SR)能够区分染色体数目和结构是否正常；同时可通过胚胎着床前单基因病检测(Preimplantation Genetic Testing for Monogenic Diseases，PGT
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M)帮助选择优质胚胎，避免遗传病患儿出生。经过形态学和PGT筛选的胚胎，移植后着床失败率仍然高达30％
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50％。因此，高着床潜能胚胎的筛选仍旧是临床面临的重要问题。
[0004]中国专利申请CN105861658A(对应文章Li G,Yu Y,Fan Y,et al.Genome wide abnormal DNA methylome of human blastocyst in assisted reproductive technology[J].Journal of Genetics and Genomics,2017,44(10):475
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481.)公开了一种通过囊胚甲基化水平和加纳德形态囊胚分级筛选发育优良囊胚的方法。基于加德纳形态囊胚分级系统对不同等级囊胚进行甲基化测序，建立高形态等级(AA)、中形态等级(AB、BA或BB)和低形态等级(CC、BC或CB)囊胚DNA甲基化模型；对应滋养层的甲基化状态与囊胚的形态分级相关。该方法利用少量囊胚活检滋养层细胞的甲基化数据来预测整个囊胚甲基化水平、检测囊胚的非整倍性，通过滋养层的甲基化水平与形态学评级为AA的优良囊胚甲基化水平的接近程度预测胚胎发育潜能。该专利申请根据加德纳形态囊胚分级系统，将AA级胚胎的甲基化水平作为标准参考，但是部分AB、BA、BB级胚胎仍具发育潜能，临床上部分夫妇往往得不到AA级胚胎，此方法浪费和丢弃了部分仍具发育潜能的胚胎。
[0005]中国专利申请CN114480629A公开了一种同时实现囊胚非整倍体检测和高着床潜能筛选的方法。该方法通过囊胚活检得到的滋养层细胞的甲基化数据检测全基因组的拷贝数变异、预测囊胚移植后着床潜能。该方法纳入了12例临床中真实的囊胚移植后妊娠结局，使预测模型更准确。该专利申请通过甲基化水平实现囊胚非整倍体检测和高着床潜能胚胎筛选，但是临床上染色体倍性正常的胚胎仍然会出现发育异常或移植后妊娠失败的情况。针对由于转录异常而非基因结构异常导致的发育失败的情况，该筛选方法不适用。
[0006]Groff A F,Resetkova N,DiDomenico F,et al.RNA
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seq as a tool for evaluating human embryo competence[J].Genome research,2019,29(10):1705
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1718.)构建了一种可以同时评估胚胎染色体核型和发育潜能的方法。该文章将囊胚转录组信息与染色体核型、胚胎形态关联，以整倍体胚胎和形态优良胚胎为高发育潜能胚胎，构建预测模型。通过囊胚滋养层细胞的转录组数据推导胚胎染色体核型和发育潜能。然而，临床上只能获得4
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8个滋养层细胞，由于不同滋养层细胞间转录水平变异大，通过滋养层转录组数据推导胚胎染色体核型，准确率较低。该方法缺乏临床中胚胎移植、移植后着床和妊娠等信息，预测结局准确性未知。
[0007]随着单细胞组学技术的发展，转录组测序能产生高通量数据，可以在当前筛选标准的基础上，额外补充有价值的筛选信息，促成优化和开发全新植入前优质胚胎筛查方法。但是在临床中，通过转录组筛选优质胚胎的体系尚不完善，同时目前研究缺乏胚胎移植及后续妊娠结局等相关信息，使用已有方法无法评估发育潜能预测的准确率。
[0008]人早期胚胎发育受多层次精准调控，转录组是连接基因组遗传信息与具有生物功能蛋白质的关键，并且基因表达具有时空特异性。部分囊胚是由于转录异常而非基因结构异常导致的发育和着床失败，因此，转录组在指示囊胚着床中具有主要作用。然而，目前缺乏一种通过单细胞转录组实现高着床潜能囊胚筛选的方法。

技术实现思路

[0009]基于上述原因，本专利技术提出一种着床潜能囊胚筛选的标志物及其应用。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：
[0010]本专利技术一方面涉及一种着床潜能囊胚筛选的标志物，所述标志物包括基因PET100或其表达产物和基因RAB25或其表达产物。
[0011]PET100(PET100 cytochrome c oxidase chaperone)是指细胞色素氧化酶装配因子PET100，细胞色素c氧化酶(COX)即线粒体复合体IV，是线粒体呼吸链的末端酶复合物，催化从细胞色素c到分子氧的电子转移，从而有助于跨线粒体内膜的质子梯度，驱动ATP合成。PET100定位于线粒体内膜，是一种COX装配因子，参与COX成熟和组装。细胞色素c氧化酶缺乏是儿童和成人线粒体疾病的重要原因，PET100突变导致婴儿乳酸酸中毒和细胞色素c氧化酶缺乏症。
[0012]RAB25是小GTP酶RAS超家族的成员，Rab25控制细胞表面受体循环和细胞信号通路激活，使其能够控制多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞运动和细胞死亡。已发现该基因是肿瘤抑制基因和致癌基因，Rab25的异常表达与癌症发展有关，在癌症的病理生理学中起关键作用。大多数研究结果表明，Rab25是一种致癌基因。Rab25的表达升高与肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和其他癌症的不良预后和侵袭性相关。然而，Rab25的肿瘤抑制功能在几种癌症中也有报道，例如结直肠癌。
[0013]本专利技术另一方面涉及一种着床潜能囊胚筛选的试剂盒，所述试剂盒包括用于测定基因PET100和基因RA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种着床潜能囊胚筛选的标志物，所述标志物包括基因PET100或其表达产物和基因RAB25或其表达产物。2.一种着床潜能囊胚筛选的试剂盒，所述试剂盒包括用于测定基因PET100和基因RAB25表达量的试剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，所述用于测定基因PET100和基因RAB25表达量的试剂包括过单细胞转录组测序得到PET100和RAB25的表达量的试剂、用于QPCR的试剂、蛋白质组学试剂或western blot试剂。4.权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔杰，闫丽盈，王静，严智强，杨铭，朱小辉，
申请(专利权)人：北京大学第三医院北京大学第三临床医学院，
类型：发明
国别省市：