一种孤儿受体GPR151的新用途制造技术

本发明专利技术公开了一种孤儿受体GPR151的新用途，具体涉及孤儿受体GPR151在筛选或制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用。本发明专利技术通过TNBS诱导小鼠结肠炎模型，提取结肠的mRNA进行qPCR检测，发现GPR151mRNA水平在TNBS诱导的结肠炎模型维持阶段升高2倍左右，提示GPR151可能在结肠炎炎症维持阶段发挥作用。通过抑制GPR151表达或抑制其功能都能够有效缓解结肠炎，说明GPR151参与结肠炎的发生发展。综上，本发明专利技术通过实验发现可将GPR151作为靶点，可以将抑制其表达和功能的抑制剂作为结肠炎的有效治疗药物。炎的有效治疗药物。炎的有效治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
一种孤儿受体GPR151的新用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种孤儿受体GPR151的新用途，具体涉及孤儿受体GPR151在筛选或制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一种消化道内的慢性炎症性疾病，包括克罗恩病(Crohn's disease，CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)，典型症状为：腹泻、直肠出血、腹痛、疲劳和体重减轻。目前造成IBD的因素主要包括遗传因素、免疫系统的异常反应及外界环境刺激。通常针对IBD的治疗主要包括内科治疗和外科手术治疗两种方式。内科治疗一般采用糖皮质激素和TNF抑制剂等药物治疗，但会出现治疗无效或耐药或严重的副作用等情况。因此，从新的角度深入研究炎症性肠病的治疗以寻找有效的药物作用靶点具有重要的理论和实际意义。
[0003]孤儿受体GPR151为A类视紫红质家族的成员之一，GPR151最初被鉴定为与GPCR10、GPCR
‑
2037、GalRL类甘丙肽受体具有同源性。视紫红质样家族的序列结构系统发育分析将GPR151与GalR1(甘丙肽受体1)、GalR2、GalR3和Kisspeptin受体(Kiss1R/Gpr54)一起归为“第14类”中。另外，可比性序列分析将Gpr151归为更广泛的包括生长抑素、阿片类药物、甘丙肽和Kisspeptin受体“SOG”亚家族中。GPR151表达分布广泛，在许多组织，如胃肠道黏膜、小肠、结肠、脾脏、肺等中均有表达。目前有研究报道GPR151在脊髓中表达显著升高，从而介导神经病理性疼痛。然而，尚未有报道GPR151直接参与结肠炎等炎症的发生发展。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种孤儿受体GPR151的新用途，通过实验发现可将GPR151作为靶点，可以将抑制其表达和功能的抑制剂作为结肠炎的有效治疗药物。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种孤儿受体GPR151在筛选或制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用，将孤儿受体GPR151作为靶点。
[0007]一种孤儿受体GPR151的抑制剂在制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用。
[0008]优选地，所述抑制剂为抑制GPR151 mRNA的核酸分子，所述核酸分子为siRNA或shRNA；
[0009]所述siRNA或shRNA具有如SEQ ID NO.5所示的序列。
[0010]优选地，所述siRNA采用甲氧基或胆固醇进行修饰。
[0011]优选地，所述抑制剂为抑制GPR151 mRNA的重组载体，包括能转录出抑制GPR151 mRNA的核酸分子siRNA或shRNA的序列以及载体，所述序列嵌入载体中；
[0012]所述siRNA或shRNA具有如SEQ ID NO.5所示的序列。
[0013]优选地，所述载体为慢病毒载体或腺相关病毒载体。
[0014]一种预防、诊断或治疗结肠炎的药物组合物，包括孤儿受体GPR151的抑制剂。
[0015]优选地，还包括药学上可接受的载体。
[0016]本专利技术的有益效果如下：
[0017]本专利技术通过挖掘公共GEO数据库，利用R语言分析，最终挑选出未被报道有抗炎功能且能通过实验验证的基因GPR151。随后，通过TNBS诱导小鼠结肠炎模型，提取结肠的mRNA进行qPCR检测，发现GPR151 mRNA水平在TNBS诱导的结肠炎模型维持阶段升高2倍左右，提示GPR151可能在结肠炎炎症维持阶段发挥作用。通过抑制GPR151表达或抑制其功能都能够有效缓解结肠炎，说明GPR151参与结肠炎的发生发展。综上，本专利技术通过实验发现可将GPR151作为靶点，可以将抑制其表达和功能的抑制剂作为结肠炎的有效治疗药物。
附图说明
[0018]图1为实施例1中TNBS诱导的小鼠结肠炎模型中各参数变化：A为TNBS诱导小鼠结肠炎后小鼠体重的变化，B为TNBS诱导小鼠结肠炎后小鼠结肠长度的变化，C为TNBS诱导小鼠结肠炎后小鼠结肠中GPR151基因表达的变化；图中数据代表means
±
SEM(n＝3或4)；与指定组相比，
*
P＜0.05，
***
P＜0.001；
[0019]图2为实施例2中GPR151shRNA抑制TNBS诱导的结肠炎的进展：A为GPR151
‑
shRNA对结肠炎小鼠结肠长度的影响，B为GPR151
‑
shRNA对结肠炎小鼠体重的影响；图中数据代表means
±
SEM(n＝3或4)；与指定组相比，
**
P＜0.01；
[0020]图3为实施例2中敲除GPR151基因后抑制TNBS诱导小鼠结肠炎的进展：A为各组小鼠的结肠组织标本，B为敲除GPR151基因对结肠炎小鼠结肠长度的影响，C为敲除GPR151基因对结肠炎小鼠体重的影响，D为HE染色结果；图中数据代表means
±
SEM(n＝3或4)；与指定组相比，
*
P＜0.05，
**
P＜0.01，
***
P＜0.001。
具体实施方式
[0021]下面结合附图与具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。
[0022]实施例1
[0023]TNBS(2,4,6
‑
三硝基苯磺酸)与乙醇灌肠一次致炎是目前最为常用的结肠炎模型建立方法。TNBS处理小鼠可建立模拟临床结肠炎的临床前模型，其产生的免疫反应是Th1介导的，特征在于CD4
+
T细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞的浸润，形成横向进展的炎症，导致透壁结肠炎。该模型持续时间较长，可充分体现急性炎症向慢性炎症迁延转化过程，并且其与临床上的结肠炎具有极高的相似度。因此本实施例通过TNBS诱导小鼠结肠炎模型，提取结肠的mRNA进行qPCR检测，以观察GPR151在TNBS诱导的结肠炎的发生发展阶段的表达，具体步骤如下：
[0024]1、TNBS诱导小鼠结肠炎模型的建立
[0025]将禁食24h、不禁饮的C57BL/6J小鼠随机分成50％酒精对照组、TNBS结肠炎模型组，每组4只。
[0026](1)50％酒精对照组：给予50％酒精100μL灌肠1次。
[0027](2)TNBS模型组：给予2.5％ TNBS/50％酒精100μL灌肠1次后，于第5天结束实验。
[0028]监测各组小鼠每天的体重变化，小鼠处死后收集结肠组织标本，记录结肠的长度，RT
‑
PCR法检测小鼠结肠组织中GPR151 mRNA表达水平。
[0029]2、RNA提取及实时荧光定量PCR
[0030]按照Trizol法抽提总RNA，测定浓度后取1μg总RNA，参考V本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种孤儿受体GPR151在筛选或制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用，其特征在于，将孤儿受体GPR151作为靶点。2.一种孤儿受体GPR151的抑制剂在制备预防、诊断或治疗结肠炎的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为抑制GPR151 mRNA的核酸分子，所述核酸分子为siRNA或shRNA；所述siRNA或shRNA具有如SEQ ID NO.5所示的序列。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述siRNA采用甲氧基或胆固醇进行修饰。5.根据权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺天珍，高永静，赵丽雯，叶思雨，景圣男，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：