用于产生水痘-带状疱疹病毒表面蛋白抗原的方法技术

本发明专利技术涉及用于产生水痘

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原的方法


[0001]本专利技术涉及用于产生水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原的方法。

技术介绍

[0002]水痘
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带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus，VZV)是主要在儿童和青少年中引起水痘的病毒。一旦发生感染，VZV会在感觉根和颅神经的神经节细胞中保持休眠数年，并在成年期当免疫力下降时被重新活化并引起带状疱疹。水痘具有高度传染性；并且一旦感染发生，其会引起全身的水疱样皮疹，伴有发热和不适。在大多数正常儿童中，水痘很少发展为严重的病症，并最终发展为自限性疾病。然而，已知水痘进展为严重症状的许多情况发生在已经接受了器官移植或化学治疗的患者中(Adriana Weinberg等,J Infectious Diseases,200(7):1068,2009；Judith Breuer等,Expert Review of Vaccines,2017,DOI:10.1080/14760584.2017.1394843)。
[0003]带状疱疹的最初症状是全身疼痛如身体疼痛，或严重瘙痒、刺痛和烧灼感，并伴有像被刀刺伤一样的剧烈疼痛。带状疱疹是这样的疾病，其中在数天之后出现水疱，疼痛随着皮肤病变的提高而提高，并且较年长的患者往往会抱怨更严重的疼痛。即使在带状疱疹被治愈的情况下，其也可能留下神经痛作为后遗症。已知在60岁或年龄更高的人中，神经痛可导致他们断断续续地睡觉，导致他们抱怨慢性疲劳，导致他们即使在轻微接触或摩擦的情况下也会感到剧烈疼痛，或者甚至导致抑郁，但是这种神经痛在40岁或年龄更小的成年人中相对罕见。
[0004]ZOSTAVAX(Merck&Co,Inc.)，一种使用Oka菌株产生的减毒活疫苗，被开发作为针对带状疱疹的预防性疫苗。由于该疫苗中含有大量病毒的事实，在该疫苗应当用于50岁或年龄更高的成年人而不是儿童或青少年的条件下，该疫苗在美国和韩国已被批准并出售。最近，由GlaxoSmithKline Biologicals SA开发了由病毒表面蛋白(gE)和佐剂构成的旨在用于50岁或年龄更高的成年人的疫苗，并且该疫苗已在临床试验中证明具有预防效力(美国专利No.7,939,084)。

技术实现思路

[0005]技术问题
[0006]因此，在对能够提高水痘
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带状疱疹病毒(VZV)表面蛋白(gE)抗原的生产力而不影响其免疫原性的方法进行研究时，本专利技术人已发现了能够提高VZV gE抗原生产力的培养和纯化方法，并且从而完成了本专利技术。
[0007]技术方案
[0008]在本专利技术的一个方面中，提供了用于产生水痘
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带状疱疹病毒(VZV)表面蛋白(gE)抗原的方法，其包括以下步骤：(a)培养产生VZV gE抗原的重组细胞系，以获得培养物溶液；以及(b)纯化培养物溶液。
[0009]获得培养物溶液的步骤(a)可包括以下步骤：(a
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1)对重组细胞系进行种子培养；
以及(a
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2)对已经进行了种子培养的细胞系进行生产培养。
[0010]纯化培养物溶液的步骤(b)可包括以下步骤：进行阴离子交换色谱；进行疏水相互作用色谱；将培养物溶液用病毒灭活剂进行处理以灭活病毒；进行混合模式色谱；以及进行浓缩和过滤。
[0011]有益效果
[0012]根据本专利技术的用于产生水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原的方法是能够以高产率和高纯度获得水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原的有效生产方法。因此，所述方法可用于产生用作用于预防或治疗水痘或带状疱疹的疫苗组合物的水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原。
附图说明
[0013]图1示出了显示根据本专利技术的一个实施方案进行培养和纯化以产生VZV gE抗原的过程的流程图。
[0014]图2示出了显示产生pMSID2
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MGgE载体的过程的示意图。
[0015]图3示出了由通过Western印迹确定根据VZV gE和细胞系的类型的VZV gE生产力而获得的结果。
[0016]图4示出了由通过ELISA确定根据VZV gE和细胞系的类型的VZV gE生产力而获得的结果。
[0017]图5a示出了通过确定根据在引入MGgE的细胞系的生产培养步骤中的培养温度变化的活细胞密度(viable cell density，VCD)而获得的结果。
[0018]图5b示出了通过确定根据在引入MGgE的细胞系的生产培养步骤中的培养温度变化的生产力而获得的结果。
[0019]图6a示出了通过确定根据在引入MGgE的细胞系的生产培养步骤中的培养温度的活细胞密度而获得的结果。
[0020]图6b示出了通过确定根据在引入MGgE的细胞系的生产培养步骤中的培养温度的生产力而获得的结果。
具体实施方式
[0021]下文中将详细描述本专利技术。
[0022]在本专利技术的一个方面，提供了用于产生水痘
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带状疱疹病毒(VZV)表面蛋白(gE)抗原的方法，其包括以下步骤：(a)培养产生VZV gE抗原的重组细胞系，以获得培养物溶液；以及(b)纯化培养物溶液。
[0023]在本专利技术中，水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原可优选为国际公开No.WO 2019/225962A1中所公开的水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原之一。具体地，水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原(MGgE)可以是由以SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的多肽，并且该多肽可以通过由以SEQ ID NO:2表示的核苷酸序列组成的基因编码。
[0024]由SEQ ID NO:1的氨基酸序列表示的水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原是源自由SEQ ID NO:3的氨基酸序列表示的水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原的水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原变体，其中该抗原变体包含水痘
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带状疱疹病毒表面蛋白抗原中第537位氨基
酸残基的羧基端被截短的变化。
[0025]第537位氨基酸残基的羧基端被截短的变化意指在从氨基端(N
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端)至羧基端(C
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端)的方向上，保留第1至537位氨基酸残基，并截短从第538位氨基酸残基至羧基端的连续的氨基酸残基。
[0026]产生VZV gE抗原的细胞系可以是用由SEQ ID NO:2所示核苷酸序列组成的VZV gE抗原编码基因转化的细胞系。该细胞系可具有包含VZV gE抗原编码基因的表达载体。在本专利技术的一个实施方案中，表达载体可以是包括韩国专利No.1591823中所公开的pMSID2载体的表达载体。然而，对于表达载体，可以无限制地使用任何载体，只要其适合于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于产生水痘
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带状疱疹病毒(VZV)表面蛋白(gE)抗原的方法，其包括以下步骤：(a)培养产生所述VZV gE抗原的重组细胞系，以获得培养物溶液；以及(b)纯化所述培养物溶液。2.权利要求1所述的方法，其中获得所述培养物溶液的步骤(a)包括以下步骤：(a
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1)对所述重组细胞系进行种子培养；以及(a
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2)对已经进行了所述种子培养的所述细胞系进行生产培养。3.权利要求1所述的方法，其中纯化所述培养物溶液的步骤(b)包括以下步骤：进行阴离子交换色谱；进行疏水相互作用色谱；将所述培养物溶液用病毒灭活剂进行处理，以灭活病毒；进行混合模式色谱；以及进行浓缩和过滤。4.权利要求3所述的方法，其中纯化所述培养物溶液的步骤(b)包括以下步骤：(b
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1)进行阴离子交换色谱；(b
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2)进行疏水相互作用色谱；(b
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3)将所述培养物溶液用病毒灭活剂进行处理以灭活病毒，并随后进行浓缩和渗滤；(b
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4)进行混合模式色谱，以获得洗脱液；以及(b
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5)对所述洗脱液进行浓缩和渗滤，并随后进行纳滤，这些步骤以一系列顺序进行。5.权利要求1所述的方法，其中所述VZV gE抗原是由以SEQ ID NO:1表示的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光倍，金美淑，林正爱，郑裕敏，韩升烈，金智渊，柳知成，
申请(专利权)人：株式会社绿十字，
类型：发明
国别省市：