一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株及其应用，属于噬菌体技术领域。本发明专利技术从鸡白痢沙门氏菌中分离得到一株沙门氏菌烈性噬菌体，生物保藏编号为CCTCCNO：M20221380，对高温和pH值具有双重稳定性，同时对多种沙门氏菌具有裂解活性具有宿主范围广的特点，同时裂解活性高，能够用于沙门氏菌污染的防控和清除，为动物养殖中饲料或饮用水等安全提供保障。障。障。

【技术实现步骤摘要】
一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株及其应用


[0001]本专利技术属于噬菌体
，具体涉及一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株及其应用。

技术介绍

[0002]沙门氏菌(Salmonella)是一种革兰氏阴性细菌，是人类和动物的重要病原体，可引起多种疾病，从自限性胃肠炎到伤寒样疾病，再到全身感染。在畜牧养殖业中，鸡白痢沙门氏菌是危害养鸡业的最严重疾病之一，可引起雏鸡腹泻，成年鸡可持续存在而没有明显的临床症状，并导致垂直和水平传播。目前，由于抗生素的大量使用，预防性给予抗生素导致超级细菌的不断出现，世界上越来越多的国家加入了限抗禁抗的行列，这对沙门氏菌的防控造成了极大的威胁，因而我们探索针对细菌感染的新型或者替代疗法的行动迫在眉睫。
[0003]噬菌体是一种可以裂解细菌的病毒，具有特异性，能够专一裂解某一类或某一种特定细菌。噬菌体已被公认为食品中、环境中的潜在抗菌剂。与抗生素相比，噬菌体可特异性感染目标病原菌而不影响正常微生物群，具有自我复制性，对动物和人类无害，并且在没有合适的目标细菌的情况下迅速从宿主中清除。2013年，美国Intralytix公司研制的沙门氏菌噬菌体制剂SalmoFresh得到了美国(FDA)批准并允许上市，这开启了噬菌体制剂的时代。到目前为止，商业认可的噬菌体产品，如Armment，Salmonelex和SalmoFresh已被用于灭活和控制食品中的沙门氏菌。但目前沙门氏菌噬菌体毒株存在高温下裂解失活的问题，大大限制了沙门氏菌噬菌体毒株的应用。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株，对80℃下作用80min仍有活性。
[0005]本专利技术提供了一株耐热沙门氏菌(Salmonella)烈性噬菌体毒株，保藏编号为CCTCC NO：M 20221380。
[0006]本专利技术提供了一种沙门氏菌烈性噬菌体制剂，包括所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株和辅料。
[0007]本专利技术提供了一种抑制沙门氏菌污染的饲料，包括动物饲料和所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株或所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂。
[0008]优选的，所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株的MOI为1～100。
[0009]本专利技术提供了所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株或所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂在制备预防或清除沙门氏菌的产品中的应用。
[0010]优选的，所述沙门氏菌包括鸡白痢沙门氏菌或/和鼠伤寒沙门氏菌。
[0011]本专利技术提供了所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株或所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂在动物养殖中的应用。
[0012]优选的，所述动物养殖包括预防或清除饲料或饮用水中沙门氏菌污染。
[0013]优选的，所述沙门氏菌包括鸡白痢沙门氏菌或/和鼠伤寒沙门氏菌。
[0014]本专利技术提供了一株耐热沙门氏菌(Salmonella)烈性噬菌体毒株，保藏编号为CCTCC NO：M 20221380。本专利技术分离且筛选出了一株耐高温的沙门氏菌噬菌体，在温度50℃以内噬菌体滴度基本保持不变，温度对其没有影响；在70℃和80℃时噬菌体滴度稍微有所下降，但是在80℃下处理80min时，仍有较高的活性。同时本专利技术提供的烈性噬菌体毒株在pH值为3～11的环境中处理1小时活性稳定。因此，本专利技术提供的噬菌体毒株对高温和广泛的pH值变化均表现出较强的稳定性。
[0015]此外，烈性噬菌体毒株具有较强的裂解活性，在感染复数(MOI)范围分别为10～0.00000001范围内均可以有效抑制沙门氏菌的生长，表明该噬菌体对宿主菌有较强的生长抑制作用。同时，所述烈性噬菌体毒株还具有广谱沙门氏菌裂解活性，例如对鸡白痢沙门氏菌(S.Pullorum)、鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)、德比沙门氏菌(S.Derby)、巴拿马沙门氏菌(S.Panama)、阿贡纳沙门氏菌(S.Agona)、印第安纳沙门氏菌(S.India)、甲型副伤寒沙门氏菌(S.Para
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typhi)、霍乱沙门氏菌(S.Choleraesuis)等均表现出不同程度的裂解活性，其中对鸡白痢沙门氏菌的裂解活性最强。
[0016]生物材料保藏信息
[0017]本专利技术提供的沙门氏菌噬菌体(Salmonella phage)GSP003，保藏于中国典型培养物保藏中心，单位简称为CCTCC，地址为中国武汉，武汉大学，保藏时间为2022年9月5日。保藏编号为CCTCC NO：M 20221380。
附图说明
[0018]图1为沙门氏菌噬菌体GSP003的噬菌斑形态图；
[0019]图2为沙门氏菌噬菌体GSP003的透射电镜形态图；
[0020]图3为沙门氏菌噬菌体GSP003的基因组注释圈图；
[0021]图4为沙门氏菌噬菌体GSP003的最佳MOI实验结果图；
[0022]图5为沙门氏菌噬菌体GSP003的一步生长曲线结果图；
[0023]图6为沙门氏菌噬菌体GSP003的pH值稳定性结果图；
[0024]图7为沙门氏菌噬菌体GSP003的热稳定性结果图；
[0025]图8为沙门氏菌噬菌体GSP003在不同的MOI下裂解宿主菌的能力检测结果图；
[0026]图9为沙门氏菌噬菌体GSP003清除饲料(A)和饮用水(B)中沙门氏菌的能力结果图。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供了一株耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株，保藏编号为CCTCC NO：M 20221380。
[0028]在本专利技术中，所述烈性噬菌体毒株是从鸡白痢沙门氏菌SP005中筛选分离得到的，电镜观察该噬菌体具有多面体的头部和不可伸缩的尾巴。在双层平板上可形成透亮空斑，周围有一圈晕环，边缘整齐。在pH值3～11中作用1小时活性稳定。在80℃下处理80min仍有较高的活性。所述烈性噬菌体毒株的基因组序列提交至GenBank中，登录号为OP394142。
[0029]在本专利技术中，所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株的增殖方法，优选包括以下步骤：
[0030]将鸡白痢沙门氏菌培养至OD
600 0.4时，挑取噬菌体单斑放入鸡白痢沙门氏菌液中，在37℃振荡培养6h，观察菌液是否变澄清，离心过滤收集上清液，10倍梯度稀释后进行噬菌体效价的测定，储存到4℃冰箱。
[0031]本专利技术提供了一种沙门氏菌烈性噬菌体制剂，包括所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株和辅料。
[0032]本专利技术对所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂的剂型没有特殊限制，采用本领域所熟知的噬菌体制剂类型即可。所述辅料根据制剂剂型进行常规选择。本专利技术对所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂的制备方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的制剂种类即可。
[0033]本专利技术提供了一种抑制沙门氏菌污染的饲料，包括动物饲料和所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株或所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂。
[0034]在本专利技术中，所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株的MOI优选为1～100，更优选为10。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株耐热沙门氏菌(Salmonella)烈性噬菌体毒株，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：M 20221380。2.一种沙门氏菌烈性噬菌体制剂，其特征在于，包括权利要求1所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株和辅料。3.一种抑制沙门氏菌污染的饲料，其特征在于，包括动物饲料和权利要求1所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株或权利要求2所述沙门氏菌烈性噬菌体制剂。4.根据权利要求3所述饲料，其特征在于，所述耐热沙门氏菌烈性噬菌体毒株的MOI为1～100。5.权利要求1所述耐热沙门氏菌烈性噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱平，高东阳，柯喜泉，李祥敏，纪鸿越，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：