本公开内容涉及药用高度有效抗TFPI抗体组合物，其包含用于治疗血友病的抗TFPI抗体，其中药物物质中HCP的含量小于10.0ng/mg，并且药物物质或药物产品中LPA的含量小于1.0ng/mg。根据本公开内容，具有非常低的HCP和LPA的含量的高度有效抗TFPI抗体组合物可通过提供能够使抗TFPI抗体聚合物之产生最小化的分离/纯化过程来提供，并且可有效地用于治疗抗体诱导的血友病患者和用于预防凝血疾病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高度有效抗TFPI抗体组合物
本公开内容涉及用于治疗血友病的高度有效抗TFPI抗体组合物(highlyefficientanti-TFPIantibodycomposition)。
技术介绍
抗TFPI抗体是抗组织因子途径抑制剂(anti-tissuefactorpathwayinhibitor)(下文中称为抗TFPI)重组抗体，其是对组织因子途径抑制剂(下文中称为TFPI)具有高亲和力的人IgG4单克隆抗体。抗TFPI抗体被用作血友病治疗剂，其通过抑制TFPI与激活因子X(activatedfactorX，FXa)之间的结合并在外源性凝血途径中诱导下游凝血因子FX的激活来使血液凝固。抗TFPI抗体是IgG4型抗体，并且当将其应用于通常的抗体产生过程时，出现的问题是在该过程期间聚合物的产生提高，从而导致产品的治疗作用降低，并且该过程的再现性由于在低pH值下抗体的高不稳定性而很低。特别地，当聚合物以适当水平或更高水平存在于最终抗TFPI抗体浓缩物中时，该聚合物具有不良影响，因为它降低了抗TFPI抗体对抗原TFPI的结合亲和力，导致抗体的效力的降低。因此，过程条件进行适当地保持，以便防止在抗TFPI抗体产生过程中聚合物的产生，并且在抗体纯化过程中不可避免地产生的聚合物应被选择性地去除。因此，开发高度有效抗TFPI抗体治疗剂必须需要开发用于纯化高纯度抗TFPI抗体的过程。因此，为了产生高度有效抗TFPI抗体组合物，本专利技术人对针对以下过程的条件进行了研究，并且已经发现可产生高度有效的抗TFPI抗体，从而完成了本公开内容：用于吸附蛋白质杂质的亲和色谱过程中的中和过程，用于在混合模式色谱纯化过程中使抗TFPI抗体聚合物之产生最小化以及选择性去除所产生聚合物的过程，以及用于在第一超滤和渗滤过程、第二超滤和渗滤过程以及最终浓缩过程中使抗TFPI抗体纯化产率最大化的过程。[现有技术文献][专利文献](专利文献1)韩国专利No.10-1744899(专利文献2)韩国专利No.10-1804988[非专利文献](非专利文献1)1：Definingyourproductprofileandmaintainingcontroloverit，part2：challengesofmonitoringhostcellproteinimpurities.BioProcessInt2005；3：52-4，6，8(非专利文献2)2：CHOPPI：AWebToolfortheAnalysisofImmunogenicityRiskfromHostCellProteinsinCHO-BasedProteinProduction.BiotechnolBioeng.2014Nov；111(11)：2170-2182.(非专利文献3)3：Reducingrisk，improvingoutcomes：bioengineeringlessimmunogenicproteintherapeutics.ClinImmunol.2009May；131(2)：189-201(非专利文献4)4：AsystematicassessmentofMHCclassIIpeptidebindingpredictionsandevaluationofaconsensusapproach.PLoSComputBiol.2008Apr4；4(4)：e1000048.
技术实现思路
技术问题本公开内容的目的是通过以下来提供具有非常低的HCP和LPA含量的高度有效抗TFPI抗体组合物：(i)通过在低pH亲和色谱洗脱过程之后引入中和过程来使聚合物的产生最小化，以便在亲和色谱过程中提高抗体稳定性；(ii)通过选择有效纯化树脂来确定聚合物分离条件，以便在混合模式色谱过程中选择性去除抗TFPI抗体中包含的聚合物，以及(iii)在最终浓缩过程中使抗TFPI抗体纯化产率最大化的同时使抗TFPI抗体聚合物的形成最小化，以便产生高度有效抗TFPI抗体组合物。本公开内容的技术问题不限于上述技术问题，并且本领域技术人员从以下描述中可清楚地理解未提及的其他技术问题。技术方案为了实现以上目的，本公开内容提供了药用高度有效抗TFPI抗体组合物，其包含用于治疗血友病的抗TFPI抗体，其中药物物质(drugsubstance)中HCP和LPA的总含量为10ng/mg或更低。HCP(hostcellprotein，宿主细胞蛋白)是在CHO细胞中发现的一众独特蛋白质，所述细胞在抗TFPI抗体产生中用作宿主，并且细胞培养物中HCP的含量极高，高达约500,000ng/mg。在另一方面，LPA(可浸出蛋白A(leachableproteinA))是在纯化过程中从树脂中解离的蛋白A杂质，并且其含量根据纯化条件在产品之间可能不同，但是通常为约10ng/mg。因此，HCP杂质的含量相对地高于LPA杂质的含量，并且为了使抗TFPI抗体组合物有效，降低HCP和LPA的含量是必要且非常重要的。如果将抗TFPI抗体组合物中的HCP含量维持在小于10.0ng/mg，以及组合物中LPA的含量维持在小于1.0ng/mg，则当将该组合物作为治疗药物施用于人体时，其具有降低免疫原性副作用的优异特性，并因此作为抗TFPI抗体组合物可表现出优异的作用。在本公开内容的一个实施方案中，HCP和LPA的总含量可以是5ng/mg或更低。如果将抗TFPI抗体组合物中HCP和LPA的总含量维持在5ng/mg或更低，则当将该组合物作为治疗药物施用于人体时，其具有降低免疫原性副作用的优异特性，并因此作为抗TFPI抗体组合物可表现出优异的作用。在本公开内容的另一个实施方案中，高度有效抗TFPI抗体组合物可通过以下过程来产生：将包含抗TFPI的培养物澄清的过程、亲和色谱过程、病毒灭活过程、第一超滤和渗滤过程、混合模式色谱过程、纳滤(nano-filtration)过程以及最终浓缩过程。在本公开内容的另一个实施方案中，在混合模式色谱过程之后，可还包括第二超滤和渗滤过程。在本公开内容的另一个实施方案中，通过使用不同类型的柱树脂进行两个或更多个多种混合模式色谱(pluralmixed-modechromatography)过程，混合模式色谱过程可去除98％或更多的抗TFPI抗体聚合物。如果98％或更多的聚合物被去除，则当将该组合物作为治疗药物施用于人体时，其具有降低免疫原性副作用和提高抗TFPI抗体与TFPI的结合亲和力的优点，并因此作为抗TFPI抗体组合物可表现出更好的活性。在本公开内容的另一个实施方案中，亲和色谱过程可包括以下步骤：在pH4.0至6.0下，使通过亲和色谱柱的洗出液(eluate)中和；以及使经中和洗出液在室温(15至25℃)下静置8至16小时。在本公开内容的另一个实施方案中，浓缩过程可包括冲洗溶液(rinsesolution)循环/回收过程。在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.药用高度有效抗TFPI抗体组合物，其包含用于治疗血友病的抗TFPI抗体，其中药物物质或药物产品中HCP的含量小于10.0ng/mg，并且所述药物物质或所述药物产品中LPA的含量小于1.0ng/mg。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180921 KR 10-2018-01139741.药用高度有效抗TFPI抗体组合物，其包含用于治疗血友病的抗TFPI抗体，其中药物物质或药物产品中HCP的含量小于10.0ng/mg，并且所述药物物质或所述药物产品中LPA的含量小于1.0ng/mg。
2.权利要求1所述的高度有效抗TFPI抗体组合物，其中HCP和LPA的总含量为5ng/mg或更低。
3.权利要求1或2所述的高度有效抗TFPI抗体组合物，其中所述高度有效抗TFPI抗体组合物通过以下产生：
将包含所述抗TFPI抗体的培养物澄清的过程；
亲和色谱过程；
病毒灭活过程；
超滤和渗滤过程；
混合模式色谱过程；
纳滤过程；以及
最终浓缩过程。
4.权利要求3所述的高度有效抗TFPI抗体组合物，其中所述混合模式色谱过程包含通过使用不同类型的柱树脂进行两个或更多个多种混合模式色谱过程来去除98％或更多的所述抗TFPI抗体的聚合物。
5....
【专利技术属性】
技术研发人员：金民静，吕槿惠，宋幸恩，朴芝允，金允阿，
申请(专利权)人：株式会社绿十字，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。