VEGF结合分子及其用途制造技术

本公开提供了VEGF结合分子，其包含免疫球蛋白单可变结构域。本公开还提供了编码所述VEGF结合分子的核酸分子，用于表达所述VEGF结合分子的表达载体和宿主细胞。本公开进一步提供了产生所述VEGF结合分子的方法及其用于治疗或预防与病理性血管发生相关的病症的用途。疗或预防与病理性血管发生相关的病症的用途。疗或预防与病理性血管发生相关的病症的用途。

【技术实现步骤摘要】
VEGF结合分子及其用途
[0001]序列表
[0002]本公开包含序列表，并且其全部内容通过引用并入本文。


[0003]本公开一般而言涉及分子生物学领域。具体地，本公开涉及VEGF结合分子。更具体地，本公开涉及与VEGF特异性结合的抗体分子例如纳米抗体、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0004]正常的血管生成对生物体有着非常重要的作用，能够将营养物质和氧气等运输至身体的各个组织器官，同时将代谢废物运送至代谢器官，从而自体内清除。然而，异常的血管生成和多种疾病的发生发展相关，包括实体肿瘤和血管增生相关的眼病。实体肿瘤的发展和转移，则离不开新生血管的不断形成，为快速增殖的肿瘤细胞提供足够的营养物质和氧气，为肿瘤细胞的浸润转移提供渗透性高的血管系统；老年黄斑变性(AMD)、糖尿病黄斑水肿(DME)等都是由于血管异常增生引起的眼部疾病，针对这两类疾病的药物都有巨大的市场需求(Apte,R.S.,et al.(2019)."VEGF in Signaling and Disease:Beyond Discovery and Development."Cell 176(6):1248
‑
1264.)。因此，对于具有病理性血管增生的疾病，抑制新生血管生成，使血管正常化，能够达到治愈或者延缓疾病进展的效果。
[0005]促进血管生成关键的细胞因子为血管内皮生长因子(Vascular Endothelial
‑
derived Growth Factor，VEGF)。VEGF的受体包括VEGFR1和VEGFR2等，其表达于血管内皮细胞。VEGFR2为介导血管生成主要的受体酪氨酸激酶受体，VEGF激活VEGFR2促进血管内皮细胞有丝分裂和血管渗透性增加，从而促进新血管出芽。因此，靶向VEGF或者VEGFR2能够有效抑制异常的血管生成。
[0006]抗
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VEGF的单克隆抗体——贝伐珠单抗(Bevacizumab)，在临床上被证实在肿瘤治疗和血管异常增生相关的眼病治疗中，都具有较好的疗效和靶点安全性。
[0007]虽然目前已经有靶向VEGF靶点的单克隆抗体药物，但作为治疗剂，仍有继续开发药效更好的靶向VEGF的抗体的迫切需要。本领域希望开发新的靶向VEGF的抗体，特别是特异性识别VEGF的单结构域抗体。

技术实现思路

[0008]广义而言，本公开提供新型抗体、制备方法、组合物和制品。本公开提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域。更具体而言，本公开提供了靶向VEGF的单结构域抗体，以及制备所述抗体的方法、用于表达所述抗体的表达载体和宿主细胞等。本公开的抗体提供了治疗或预防与血管生成异常相关的病症的方法及其应用。
[0009]本专利技术人发现了与VEGF特异性结合的分子，包括能够特异性结合人VEGF的VEGF结合分子(如靶向VEGF的单结构域抗体)。
[0010]本公开至少包括以下实施方案，其分别以“N”(其中“N”表示数字)的方式进行排序
和列举。以下列举非穷尽性的，并且本领域技术人员可对不同的技术方案进行组合。
[0011]1.VEGF结合分子，其中CDR1在氨基酸序列上与SEQ ID NO：7、24、25、26或27存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；CDR2在氨基酸序列上与SEQ ID NO：8、16、28、29或30存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；和/或CDR3在氨基酸序列上与SEQ ID NO：9、17、31或32存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异。
[0012]2.实施方案1中VEGF结合分子，其中所述VEGF结合分子是针对VEGF的抗体或其抗原结合片段。
[0013]3.前述实施方案中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域是VHH；例如，来自骆驼科动物(例如羊驼)的VHH。
[0014]4.前述实施方案中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：
[0015]i)如式GX1X2LDYYAIG所示的氨基酸序列的CDR1，其中X1为F、Q或H，且X2为T、G、R、K或A；
[0016]ii)如式CIGSSY1Y2Y3Y4Y5所示的氨基酸序列的CDR2，其中Y1为N、S或H，Y2为S、K或I，Y3为T或E，Y4为T或E，且Y5为N或T；和/或
[0017]iii)如式GSPLCLISLQZ1Z2Z3Z4LYEYDY所示的氨基酸序列的CDR3，其中Z1为D或V，Z2为M、H或P，Z3为D或Y，且Z4为S或G。
[0018]5.前述实施方案任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：
[0019]i)如式GX1X2LDYYAIG所示的氨基酸序列的CDR1，其中X1为F、Q或H，且X2为G、R或K；
[0020]ii)如式CIGSSY1Y2ETN所示的氨基酸序列的CDR2，其中Y1为S、N或H，Y2为K或I；和/或
[0021]iii)如式GSPLCLISLQZ1Z2YGLYEYDY所示的氨基酸序列的CDR3，其中Z1为D或V，Z2为H、M或P。
[0022]6.前述实施方案任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：
[0023]i)如SEQ ID NO：7、24、25、26或27所示的氨基酸序列的CDR1；
[0024]ii)如SEQ ID NO：8、16、28、29和30所示的氨基酸序列的CDR2；和/或
[0025]iii)如SEQ ID NO：9、17、31或32所示的氨基酸序列的CDR3。
[0026]7.前述实施方案中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：
[0027](a)如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列的CDR3；
[0028](b)如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3；
[0029](c)如SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列的CDR3；
[0030](d)如SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序
列的CDR2和如SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列的CDR3；
[0031](e)如SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3；或
[0032](f)如SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.VEGF结合分子，其包含至少一个免疫球蛋白单可变结构域，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中CDR1在氨基酸序列上与SEQ ID NO：7、24、25、26或27存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；CDR2在氨基酸序列上与SEQ ID NO：8、16、28、29或30存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异；和/或CDR3在氨基酸序列上与SEQ ID NO：9、17、31或32存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异。2.如权利要求1所述的VEGF结合分子，其中所述VEGF结合分子是针对VEGF的抗体或其抗原结合片段。3.前述权利要求中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域是VHH；例如，来自骆驼科动物(例如羊驼)的VHH。4.前述权利要求中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：i)如式GX1X2LDYYAIG所示的氨基酸序列的CDR1，其中X1为F、Q或H，且X2为T、G、R、K或A；ii)如式CIGSSY1Y2Y3Y4Y5所示的氨基酸序列的CDR2，其中Y1为N、S或H，Y2为S、K或I，Y3为T或E，Y4为T或E，且Y5为N或T；和/或iii)如式GSPLCLISLQZ1Z2Z3Z4LYEYDY所示的氨基酸序列的CDR3，其中Z1为D或V，Z2为M、H或P，Z3为D或Y，且Z4为S或G。5.前述权利要求任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：i)如式GX1X2LDYYAIG所示的氨基酸序列的CDR1，其中X1为F、Q或H，且X2为G、R或K；ii)如式CIGSSY1Y2ETN所示的氨基酸序列的CDR2，其中Y1为S、N或H，Y2为K或I；和/或iii)如式GSPLCLISLQZ1Z2YGLYEYDY所示的氨基酸序列的CDR3，其中Z1为D或V，Z2为H、M或P。6.前述权利要求任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：i)如SEQ ID NO：7、24、25、26或27所示的氨基酸序列的CDR1；ii)如SEQ ID NO：8、16、28、29和30所示的氨基酸序列的CDR2；和/或iii)如SEQ ID NO：9、17、31或32所示的氨基酸序列的CDR3。7.前述权利要求中任一项所述的VEGF结合分子，其中所述免疫球蛋白单可变结构域包含：(a)如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列的CDR3；(b)如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3；(c)如SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列的CDR3；(d)如SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的
CDR2和如SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列的CDR3；(e)如SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列的CDR2和如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3；或(f)如SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列的CDR1，如SEQ ID NO：30所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婵娟，郎国竣，闫鑫甜，闫闰，孔超，张文海，胡宇豪，周蕴华，许彩云，王立燕，顾佳惠，司远青，时霄霄，孙兴鲁，江茹兰，林紫绮，王文蓉，韩慢慢，戴珊珊，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：