一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，包括以下组分：裂解液、磁珠、蛋白酶k溶液、清洗液I、清洗液II、洗脱液。本发明专利技术通过试剂配方的优化，提高了全血基因组DNA的提取效率。本发明专利技术将裂解液与蛋白酶k溶液加在同一孔位中，盐酸胍、异硫氰酸胍等在裂解血液蛋白结构的同时，结合液异丙醇沉淀基因组DNA，使基因组DNA快速的吸附在磁珠上。组DNA快速的吸附在磁珠上。组DNA快速的吸附在磁珠上。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。
[0003]目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。
[0004]但是现有磁珠法基因组DNA提取试剂盒对全血基因组DNA的适配度低，提取率还有待提高。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种能够高效提取全血基因组DNA的磁珠法核酸提取试剂盒，具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，包括裂解液、磁珠、蛋白酶k溶液、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：
[0007]所述裂解液的成分和含量如下：
[0008][0009]所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；
[0010]所述清洗液I的成分和含量如下：
[0011][0012]所述清洗液II为70％乙醇；
[0013]所述洗脱液的成分和含量如下：
[0014]缓冲液
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0.04
‑
0.05mol/L
[0015]亚氨基二琥珀酸四钠
ꢀꢀꢀ
0.004
‑
0.04mol/L；
[0016]所述蛋白酶k溶液的成分和含量如下：
[0017]蛋白酶k
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
20mg/ml。
[0018]进一步的，所述非离子表面活性剂为NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton
‑
X100中的至少一种。
[0019]进一步的，所述缓冲液为pH7.0
‑
8.0Tris
‑
HCl、磷酸缓冲液中的一种。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0021]1.本专利技术的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒添加多聚腺苷酸，极大提高所提取核酸纯度和稳定性，A260/A280为1.8
‑
2.0，A260/A230>2.0，有利于PCR、southern、RFLP等下游实验的顺利进行。
[0022]2.使用亚氨基二琥珀酸四钠可以更高效破坏细胞膜结构，并更加高效、快速的螯合金属离子。在含有表面活性剂的体系中，加入一定含量的卡波姆2020，增加溶液的稳定性，可以提高配方的耐电解性和高pH值适应性。
[0023]3.本专利技术的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒可以快速、简单、通用的从血液、唾液、鼻液、真菌，动物组织，细菌等样本中分离纯化核酸，实现多体系通用提取，克服了现有试剂盒适配度低，提取率低等问题。
附图说明
[0024]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0025]图1为本专利技术的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒中实施例1从血液中提取基因组DNA产物的电泳胶图以及对照组取基因组DNA产物的电泳胶图(孔道1：Marker，孔道2
‑
6：实施例1，5个平行，孔道7
‑
11：对照组，5个平行)；
[0026]图2为本专利技术的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒以及对照组中实施例1提取的健康人血液DNA作为模板，扩增人内参RP30基因片段的荧光扩增曲线图。
具体实施方式
[0027]为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
[0028]实施例1
[0029]本实施例的一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，其裂解液、清洗液I、清洗液II、洗脱液按以下配方配制，磁珠购自洛阳吉恩特生物科技有限公司。其中：
[0030]裂解液的成分和含量如下：
[0031][0032][0033]清洗液I的成分和含量如下：
[0034][0035]清洗液II为70％乙醇。
[0036]洗脱液的成分和含量如下：
[0037]PH7.0
‑
8.0Tris
‑
HCl
ꢀꢀꢀꢀ
0.04mol/L
[0038]亚氨基二琥珀酸四钠
ꢀꢀꢀ
0.01mol/L
[0039]所述蛋白酶k的成分和含量如下：
[0040]蛋白酶k
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20mg/ml
[0041]实验1：从人血液中提取基因组DNA
[0042]本实施例的样本准备过程如下：样本新鲜或冻存的人血，本专利技术所有试剂均使用1
‰
DEPC处理的超纯水配制，所有耗材均无DNA/RNA酶污染。
[0043]具体过程：取准备的人类血液加入到预分装的96深孔板中。
[0044]按以下表格预分装实施例1的试剂盒组分：
[0045]表1孔位组分分布
[0046][0047]分别添加200ul全血和20ul蛋白酶k溶液到A1～H1/A7～H7孔中，5个重复，使用山东博弘基因科技有限公司的BNP32核酸提取仪。提取程序如下：
[0048]表2提取步骤及参数设置
[0049][0050][0051]提取完成后，取A5～H5/A11～H11相应孔位的洗脱液得到血液基因组DNA。
[0052]对照组
[0053]上海尚宝生物科技有限公司全血基因组DNA提取试剂盒26238，按照其说明书相关说明进行相应操作提取，提取后的血液基因组DNA吸取到1.5ml离心管中备用。
[0054]用1.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测，琼脂糖购自全式金(货号GS201
‑
01)，荧光核酸染色试剂购自全式金(货号GS101
‑
01)，Marker，购自全式金(货号BM311
‑
01)，电压200V，电流150mA，运行45min。
[0055]结果表明：使用本专利技术提取的全血基因组DNA优于对照组的提取结果(图1)。
[0056]实验2：以人血液中提取基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、磁珠、蛋白酶k溶液、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：所述裂解液的成分和含量如下：所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；所述清洗液I的成分和含量如下：所述清洗液II为70％乙醇；所述洗脱液的成分和含量如下：缓冲液
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0.04
‑
0.05mol/L亚氨基二琥珀酸四钠
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0.004
‑
0.04mol/L；所述蛋白酶k溶液的成分和含量如下：
蛋白酶k
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10
‑
20mg/ml。2.根据权利要求1所述的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述非离子表面活性剂为NP
‑
40、Tween
‑
20、Triton

【专利技术属性】
技术研发人员：寇增强，刘盼，隋修磊，刘海龙，
申请(专利权)人：山东博弘基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：