本发明专利技术涉及一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒及核酸提取方法，属于分子生物学领域。本发明专利技术提供了一种可简单、快速提取人类粪便脱落细胞核酸的提取试剂盒，包括以下成分：粪便保存液、裂解液、洗涤液1、洗涤液2和磁珠。采用本发明专利技术公开的粪便肠道脱落细胞核酸提取试用剂盒及核酸提取方法，在保证得到DNA质量的同时，简化了操作步骤，缩短了操作时间，市场应用前景广阔，对粪便肠道脱落细胞核酸自动化提取流程的研发具有重要意义。提取流程的研发具有重要意义。提取流程的研发具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒及核酸提取方法
[0001]本专利技术涉及一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒及核酸提取方法，属于分子生物学领域。
技术介绍
[0002]粪便自肠道形成，在排出体外的过程中会带有很多肠道脱落细胞，正常人每克粪便样本中存在约106肠道脱落细胞，而结直肠癌患者其脱落细胞更多。因此对粪便进行肠道脱落细胞DNA提取，提取得到的DNA进行相关marker的检测可预示人体健康状况，如是否有患结直肠癌的风险。DNA检测方法很多，但是检测的准确度与粪便的采集及提取方法息息相关。从粪便中有效提取DNA是进行下游检测的基础，只有得到高质量的粪便肠道脱落细胞DNA才能确保后续的检测实验。但是粪便成分复杂，里面除了含有肠道脱落细胞外，还有腐殖酸、微生物、蛋白质、无机盐、脂肪及未消化的食物纤维，从如此复杂的成分里提取得到肠道脱落细胞DNA并不容易。
[0003]目前市场上常用粪便脱落细胞核酸试剂盒和提取方法，提取得到的DNA质量参差不齐，其中一些组分偏粘稠在操作的过程中，极易黏附于枪头上。而且把DNA从磁珠洗脱的过程中，不易洗脱。提取组分偏粘稠造成在提取过程中大大拉长提取时间，不易实现自动化提取。因为这样的组分会造成，最后一步洗脱DNA的时候，会有大量磁珠残留，影响后续实验。
技术实现思路
[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，使用该试剂盒可以简单、快速地从粪便中提取肠道脱落细胞的DNA。
[0005]本专利技术还提供了使用该粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒的核酸提取方法，操作简便，节省时间，对粪便粪便肠道脱落细胞核酸自动化提取流程的研发具有重要意义。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，包括以下成分：粪便保存液、裂解液、洗涤液1、洗涤液2和磁珠；粪便保存液包括如下工作浓度的组分：1
‑
5M硫氰酸胍、0.05
‑
0.1M Tris
‑
HCl、0.15M NaCl、2
‑
10mM EDTA、0.1
‑
1％ TritonX
‑
100、0.1％
‑
1％ Tween
‑
20。
[0008]该粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒在保证提取得到的DNA质量的同时，对一些组分进行了调整，提取流程中各组分都不粘稠，这样就保证了实验流程的顺畅，不会出现溶液黏附于枪头，不易吹打的现象。在进行人工提取时，便于操作，节约时间。
[0009]优选地，所述的粪便保存液的pH为7.5
±
0.5。
[0010]优选地，所述的裂解液包括如下工作浓度的组分：5％
‑
10％ SDS、2
‑
4mM EDTA。
[0011]进一步优选地，所述的裂解液的pH为7.50
±
0.50。
[0012]优选地，所述的洗涤液1包括如下工作浓度的组分：60％
‑
80％(v/v)乙醇、0.05M Tris
‑
HCl、0.15M NaCl。
[0013]具体地，60％
‑
80％(v/v)乙醇可以在使用前加入。
[0014]优选地，所述的洗涤液2包括如下工作浓度的组分：0.05
‑
0.1M Tris
‑
HCl、60
‑
70％(v/v)乙醇。
[0015]具体地，60
‑
70％(v/v)乙醇可以在使用前加入。
[0016]一种采用粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒的核酸提取方法，具体操作步骤如下：
[0017]步骤1)粪便样本保存在粪便保存液中，离心取上清于洁净离心管中；
[0018]步骤2)向上清液中加入裂解液、磁珠，混匀后70
‑
90℃孵育8～12min；
[0019]步骤3)将离心管震荡混匀，冷却至室温后，置于磁力架上吸附1～2min，弃去上清；
[0020]步骤4)向离心管中加入洗涤液1，混匀后置于磁力架上吸附1～2min，弃去上清；
[0021]步骤5)向离心管中加入洗涤液2，混匀后置于磁力架上吸附1～2min，弃去上清；
[0022]步骤6)重复步骤5)；
[0023]步骤7)向离心管中加入无水乙醇，将磁珠
‑
乙醇混合物转移至新的洁净离心管中，置于磁力架上吸附1～2min，弃去上清；
[0024]步骤8)室温干燥数分钟，加入H2O震荡洗脱；
[0025]步骤9)将离心管置于磁力架上吸附1～2min，将上清液转移至新的离心管中，此上清即为提取获得的基因组DNA。
[0026]具体地，在实验中具体操作步骤中的吸附时间和最终洗脱体积(H2O)可以根据具体实验条件进行优化。
[0027]使用所述方法提取粪便中肠道脱落细胞DNA，在保证提取得到的DNA质量的同时，对提取流程进行简化整个提取流程简单、快捷，耗时较短，更利于自动化提取。
[0028]优选地，步骤1)中每1g粪便样本加入10ml粪便保存液。
[0029]优选地，步骤2)中每5ml上清液加入3ml裂解液和50μl磁珠。
附图说明
[0030]图1为本专利技术实验例1中荧光定量PCR的结果。
具体实施方式
[0031]下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。除特殊说明之外，各实施例、实验例及对比例中所用的设备和试剂均可从商业途径得到。
[0032]下述实施例及试验例中涉及到的部分生物材料、实验试剂、实验设备等情况简要介绍如下：
[0033]生物材料：
[0034]粪便样本来自本专利技术的专利技术人，实施例与对比例中提取所用的三份样本均为同一批次的相同样本。
[0035]实验试剂：
[0036]荧光定量PCR检测试剂购买自康为世纪，货号：CW0932M；对比例粪便核酸提取试剂盒购自海狸生物，货号：70411
‑
100。
[0037]实验仪器：
[0038]荧光定量PCR仪购买自上海宏石医疗科技有限公司；MVM25多管振荡器购买自大龙兴创实验仪器有限公司。
[0039]实施例1一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒及核酸提取方法
[0040]本实施例的粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，包括以下成分：粪便保存液、裂解液、洗涤液1、洗涤液2和磁珠，各组分配方如下：
[0041]粪便保存液各组分含量：2.5M硫氰酸胍、0.1M Tris
‑
HCl、0.15M NaCl、5mM EDTA、0.5％ TritonX
‑
100、0.5％％Tween
‑
20，pH为7.5；
[0042]裂解本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括以下成分：粪便保存液、裂解液、洗涤液1、洗涤液2和磁珠；所述的粪便保存液包括如下工作浓度的组分：1
‑
5M硫氰酸胍、0.05
‑
0.1M Tris
‑
HCl、0.15M NaCl、2
‑
10mM EDTA、0.1
‑
1％TritonX
‑
100、0.1％
‑
1％Tween
‑
20。2.如权利要求1所述的粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，其特征在于：所述的粪便保存液的pH为7.5
±
0.50。3.如权利要求1所述的粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，其特征在于：所述的裂解液包括如下工作浓度的组分：5％
‑
10％SDS、2
‑
4mM EDTA。4.如权利要求3所述的粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，其特征在于：所述的裂解液的pH为7.50
±
0.50。5.如权利要求1所述的粪便肠道脱落细胞核酸提取用试剂盒，其特征在于：所述的洗涤液1包括如下工作浓度的组分：60％
‑
80％(v/v)乙醇、0.05M Tris
‑
HCl、0.15M NaCl。6.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：史历历，孙玉玺，李凡璐，李三华，齐华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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