一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，公开了一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，包括：步骤1：通过磷脂酶的酶解反应获得磷脂酰丝氨酸粗品；步骤2：对磷脂酰丝氨酸粗品多次醇洗，其中采用调节浓度和pH值后的乙醇进行醇洗；步骤3：对醇洗后的磷脂酰丝氨酸粗品进行干燥，直至到达磷脂酰丝氨酸产品的质量参数。本发明专利技术提供一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，利用不同浓度和不同pH值的乙醇纯化磷脂酰丝氨酸，获得纯度大于50％的磷脂酰丝氨酸，制备方法简单，实验条件温和，生产成本低，有利用规模化生产和推广。有利用规模化生产和推广。有利用规模化生产和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法


[0001]本专利技术涉及磷脂酰丝氨酸生产工艺，具体涉及一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法。

技术介绍

[0002]磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，英文简称PS)又名丝氨酸磷脂、二酰甘油酰磷酸丝氨酸、复合神经酸等，是一类普遍存在于细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞中的一种重要的膜磷脂。磷脂酰丝氨酸能够改善神经细胞功能，调节神经脉冲的传导，增进大脑记忆功能，因此是一种重要的新资源食品，而作为上述资源使用时，磷脂酰丝氨酸要求的纯度超过50％。
[0003]磷脂酰丝氨酸的制备可以分为化学法和生物酶法，生物酶法制备需投入过量丝氨酸，反应粗品常常存在大量的丝氨酸以及大量的磷脂类化合物。传统的分离方法包括有机溶剂萃取浓缩，柱层析，膜分离法；有机溶剂萃取法可能存在一定的试剂残留，而磷脂酰丝氨酸的应用范围将集中在普通食品以及保健食品，格外重视溶剂残留。因此国内部分学者将溶液体系以及纯化的研究转移到绿色低毒类溶剂的研究，比如2
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甲基四氢呋喃，乳酸乙酯，脂肪酸甲酯等，其他方法如柱层析，膜分离法分离效果虽好，但由于磷脂类化合物大多具有较强的黏性，纯化后的设备清洗工作较为繁琐，并且无法解决料液因粘度过高而导致收率过低的问题。
[0004]浙江大学的师维等人在《基于离子液体及聚离子液体的磷脂酰丝氨酸分离方法研究》中一文提到多种混合离子液体用于磷脂酰丝氨酸的纯化，可以提高目标产物溶液分配系数，但目前混合离子型溶剂萃取沉淀法所使用的溶剂还缺乏必要的行政许可。
[0005]申请号为CN201911346201.6文件，公开了一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，其中提到一种只用水进行后处理的除杂方法，除杂需要配合专业的均质和乳化设备，且对温度有严格要求，并不适用于工业化生产。

技术实现思路

[0006]本专利技术意在提供一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，以解决现有技术中磷脂酰丝氨酸需要专业化分离纯化设备和料液黏度过高导致收率过低的问题。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，包括：
[0008]步骤1：通过磷脂酶的酶解反应获得磷脂酰丝氨酸粗品；
[0009]步骤2：对磷脂酰丝氨酸粗品多次醇洗，其中采用调节浓度和pH值后的乙醇进行醇洗；
[0010]步骤3：对醇洗后的磷脂酰丝氨酸粗品进行干燥，直至到达磷脂酰丝氨酸产品的质量参数。
[0011]优选的，所述步骤1中具体包括：进行磷脂酶的酶解反应后，进行固液分离，并收集固体物得到磷脂酰丝氨酸粗品。
[0012]优选的，作为一种改进，所述步骤2中磷脂酰丝氨酸粗品和乙醇的料液比为1:200g/L。
[0013]优选的，作为一种改进，所述醇洗的乙醇浓度为70％
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90％(v/v)。
[0014]优选的，作为一种改进，所述醇洗的乙醇pH为5.0
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8.0。
[0015]基于上述磷脂酰丝氨酸的纯化方法，本方案还提供了一种简单易行的酶催化生产磷脂酰丝氨酸的方法，具体包括以下步骤：
[0016]步骤(1)：将大豆卵磷脂、水、醋酸盐
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醋酸钠缓冲液、L
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丝氨酸、氯化钙、磷脂酶D混合，在40℃下搅拌反应24h；其中，所述大豆卵磷脂的添加量为200
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250g/L水的体积，所述L
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丝氨酸的加入量为250
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320g/L水的体积，所述氯化钙的加入量为10
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20g/L水的体积，所述磷脂酶D的加入量为25
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40U/g天然磷脂；
[0017]步骤(2)：待步骤(1)的反应结束后，进行固液分离，收集固体物，得反磷脂酰丝氨酸粗品；
[0018](3)向步骤(2)得到的反应粗品中加入乙醇溶液，混合均匀后进行固液分离，收集固体物，真空干燥后即得磷脂酰丝氨酸产品，其中乙醇溶液的pH在5.0
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8.0之间，浓度控制在70％
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90％(v/v)之间。
[0019]优选的，作为一种改进，所述磷脂酶D通过生物发酵制得。
[0020]优选的，作为一种改进，所述步骤(1)的反应过程中全程氮气保护。
[0021]本专利技术提供一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，利用不同浓度和不同pH值的乙醇纯化磷脂酰丝氨酸，获得纯度大于50％的磷脂酰丝氨酸，制备方法简单，实验条件温和，生产成本低，有利用规模化生产和推广。本专利技术所选用的溶剂均为常见反应溶剂，已经广泛用于磷脂类化合物的纯化工作；无需专业化分离纯化设备，操作简便，并且所获得的磷脂酰丝氨酸粉末粗品，经过恒温真空干燥后，产品纯度可以满足国家发布的新食品原料的要求，为后续推广打下重要基础。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例4中用HPLC测定得到的磷脂酰丝氨酸的谱图。
具体实施方式
[0023]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0024]以下实施例将对本专利技术作出进一步的说明。
[0025]实施例1：
[0026]选用大豆卵磷脂，L
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丝氨酸，氯化钙，醋酸盐，磷脂酶等进行转酯反应，其中，大豆卵磷脂的添加量为200
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250g/L水的体积，本实施例优选为200g/L水的体积，L
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丝氨酸的加入量为250
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320g/L水的体积，本实施例优选为250g/L水的体积，氯化钙的加入量为10
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20g/L水的体积，本实施例优选为10g/L水的体积，磷脂酶D的加入量为25
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40U/g天然磷脂，本实施例优选为25U/g天然磷脂，所获得的反应粗品，按照反应粗品与乙醇的质量体积比料为1:200g/L，置于体积分数范围为70％到95％，pH的参数范围在5
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8的乙醇溶液，进行恒温水浴震荡，离心并收集沉淀，60℃过夜真空干燥后得到淡黄色粉末状磷脂酰丝氨酸；其中本实施例中乙醇洗涤步骤的参数如下：乙醇溶液的浓度为70％(v/v)，pH为5.0，用于调节溶液pH的
冰醋酸(0.1mol/L)，氨水(质量体积分数为20％),所获得的磷脂酰丝氨酸粉末送HPLC，检测其中磷脂酰胆碱PC，磷脂酰丝氨酸PS含量(％)。
[0027]实施例2：
[0028]选用大豆卵磷脂，L
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丝氨酸，氯化钙，醋酸盐，磷脂酶等进行转酯反应，其中，大豆卵磷脂的添加量为200
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250g/L水的体积，本实施例优选为200g/L水的体积，L
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丝氨酸的加入量为250
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320g/L水的体积，本实施例优选为300g/L水的体积，氯化钙的加入量为10
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20g/L水的体积，本实施例优选为10g/L水的体积，磷脂酶D的加入量为25
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40U/g天然磷脂，本实施例优选为25U/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，包括：步骤1：通过磷脂酶的酶解反应获得磷脂酰丝氨酸粗品；步骤2：对磷脂酰丝氨酸粗品多次醇洗，其中采用调节浓度和pH值后的乙醇进行醇洗；步骤3：对醇洗后的磷脂酰丝氨酸粗品进行干燥，直至到达磷脂酰丝氨酸产品的质量参数。2.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，其特征在于：所述步骤1中具体包括：进行磷脂酶的酶解反应后，进行固液分离，并收集固体物得到磷脂酰丝氨酸粗品。3.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，其特征在于：所述步骤2中磷脂酰丝氨酸粗品和乙醇的料液比为1:200g/L。4.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，其特征在于：所述步骤2中醇洗的乙醇浓度为70％
‑
90％。5.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸的纯化方法，其特征在于：所述醇洗的乙醇pH为5.0
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8.0。6.一种利用如权利要求1所述纯化方法的酶催化生产磷脂酰丝氨酸的方法，具体包括以下步骤：步骤(1)：将大豆卵磷脂、水、醋酸盐
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醋酸钠缓冲液、L
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【专利技术属性】
技术研发人员：林颖珺，林秀芬，张倩，韩尧跃，方建华，赵坐都，张慧兰，林嘉扬，
申请(专利权)人：厦门蓝湾科技有限公司，
类型：发明
国别省市：