病毒核酸样本稀释剂、病毒核酸样本提取试剂盒和病毒核酸提取方法技术

本发明专利技术涉及分子检测技术领域，尤其是涉及病毒核酸样本稀释剂、病毒核酸样本提取试剂盒和病毒核酸提取方法。本发明专利技术提供的病毒核酸样本释放剂，能够兼容多种采样套装，同时通过调整组分的种类和比例，最大限度的降低所使用的表面活性剂的临界胶束浓度，既能保证对细胞和病原体的裂解也能减少对后续检测体系的抑制作用。本发明专利技术在添加离子交换树脂的情况下，能对样本中蛋白质和钙镁等对后续反应有影响的金属离子进行吸附，也能促进细胞和病毒裂解，增强体系的兼容性。本发明专利技术的检测体系兼容性较好，能同时兼容多种qPCR检测体系，也能用于等温RAA扩增体系。不仅适用于液体检测体系，也能用于样本量较大的干粉检测体系。用于样本量较大的干粉检测体系。

【技术实现步骤摘要】
病毒核酸样本稀释剂、病毒核酸样本提取试剂盒和病毒核酸提取方法


[0001]本专利技术涉及分子检测
，尤其是涉及病毒核酸样本稀释剂、病毒核酸样本提取试剂盒和病毒核酸提取方法。

技术介绍

[0002]分子检测技术得到了快速的发展。分子诊断技术是一种基于病原体核酸进行检测的技术，通过识别病原体的特异性核酸序列，对病原体进行检测。因此如何得到适于反应的核酸就成为了能否正确检测出病原体的关键步骤，核酸提取的速度也成为了限制检测速度的瓶颈。常规的离心柱法和磁珠法核酸提取，不仅需要匹配离心机、磁力架等特殊仪器，同时步骤也较为繁琐，都需要经过裂解、洗涤、洗脱等步骤。
[0003]在检测压力逐渐增大的情况下，家庭自检和快速检测的需求逐渐被人们关注。面对这种需求，要求核酸提取的步骤不依赖于仪器，同时具备一定的检测能力。但是市面上的样本核酸释放剂类产品，释放核酸后的效果不尽如人意，且大部分核酸释放剂产品仅针对一种检测方式，在可以快速扩增的等温检测体系中无法正常使用。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，针对现有核酸释放剂产品的不足，提供了一种更灵活，使用场景更加丰富的病毒核酸释放剂，期望所述的这种病毒核酸释放剂能在常温下使用，搭配适配的耗材还可以在无能源环境下进行加热使用，获得更好的核酸释放效果。
[0006]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供病毒核酸样本稀释剂，包括：阴离子表面活性剂、氢氧化钠、EDTA、海藻糖和离子交换树脂，按照质量体积比，所述EDTA 加入量为0～3％，优选为1％；所述阴离子表面活性剂的加入量为0.010％～0.050％，优选为0.02％；所述离子交换树脂加入量为0～5％，优选为2.5％。
[0008]在可选的实施方式中，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠或十八烷基硫酸钠，优选为十六烷基硫酸钠。
[0009]在可选的实施方式中，所述氢氧化钠的浓度为0.16～1.28mM，优选为 0.32mM。
[0010]在可选的实施方式中，还包括多元醇类、氯化钠或NP
‑
40中的一种或两种以上组合。
[0011]在可选的实施方式中，所述多元醇选自乙二醇或丙二醇。
[0012]优选地，按照质量体积比，所述多元醇为0～10％的丙二醇，进一步优选地，所述多元醇为5％的丙二醇。
[0013]优选地，按照质量体积比，所述NP
‑
40的浓度为1％～5％，优选为1％；
[0014]优选地，所述氯化钠的浓度为50～150mM，优选为100mM。
[0015]在可选的实施方式中，所述离子交换树脂选自chelex或bio
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rex 70，所述chelex的规格为50～400mesh。
[0016]优选地，所述离子交换树脂为bio
‑
rex 70。
[0017]在可选的实施方式中，所述海藻糖浓度为0.05～0.1mM，优选为0.075mM。
[0018]第二方面，本专利技术提供病毒核酸样本提取试剂盒，包括前述实施方式任一项所述的病毒核酸样本稀释剂。
[0019]优选地，还包括加热装置。
[0020]第三方面，本专利技术提供病毒核酸提取方法，将病毒样本与前述实施方式任一项所述的病毒核酸样本稀释剂混匀，反应完成后得到病毒核酸；
[0021]优选地，反应时间为5～15min。
[0022]在可选的实施方式中，病毒样本与前述实施方式任一项所述的病毒核酸样本稀释剂混匀后加热，反应完成后得到病毒核酸；
[0023]优选地，加热温度为90～110℃，反应时间为1～5min。
[0024]本专利技术提供的病毒核酸样本释放剂，能够兼容多种采样套装，同时通过调整组分的种类和比例，最大限度的降低所使用的表面活性剂的临界胶束浓度，既能保证对细胞和病原体的裂解也能减少对后续检测体系的抑制作用。本专利技术在添加离子交换树脂的情况下，能对样本中蛋白质和钙镁等对后续反应有影响的金属离子进行吸附，也能促进细胞和病毒裂解，增强体系的兼容性。
[0025]本专利技术在病毒核酸样本提供过程中，既可置于室温5min获得病毒核酸，还可以在95℃加热3min的条件下提取获得病毒核酸，所得核酸进行后续检测的结果与磁珠法核酸提取试剂提取结果接近，同时该提取方法也能直接用于处理拭子样本，而后进行核酸扩增。
[0026]本专利技术的检测体系兼容性较好，能同时兼容多种qPCR检测体系，也能用于等温RAA扩增体系。不仅适用于液体检测体系，也能用于样本量较大的干粉检测体系。
[0027]本专利技术配合自热耗材使用，可以在短时间内提供较好的核酸释放效果。
具体实施方式
[0028]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]在某次具体实施方式中，第一方面，本专利技术提供病毒核酸样本稀释剂，包括：阴离子表面活性剂、氢氧化钠、EDTA、海藻糖和离子交换树脂，按照质量体积比，所述EDTA加入量为0～3％，包括但不限于0.5％、1％、1.5％、 2％、2.5％或3％，优选为1％；所述阴离子表面活性剂的加入量为 0.010％～0.050％，包括但不限于0.010％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、 0.035％、0.04％、0.045％或0.050％，优选为0.02％；所述离子交换树脂加入量为0～5％，包括但不限于0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、 4.5％或5％，优选为2.5％。
[0030]市面上大部分核酸释放剂类产品，因为其成分中的裂解成分，大部分不能用于等温扩增或是干粉检测体系中，本产品通过降低裂解成分的临近胶束浓度，能够很好的解决
这一问题，在RAA检测方法和qPCR检测方法中均能取得较好的效果，并且能够用于上述检测技术的干粉检测体系中，进一步提高检测的灵敏度。
[0031]本专利技术中的EDTA作为常见的金属离子螯合剂，主要用于减弱样本和不同采样套装中可能存在的抑制物和金属离子，其理化性质稳定，并且除 Na离子外，不会引入其他特殊的金属离子，但是EDTA浓度过高，会螯合后续扩增反应中的镁离子，造成反应抑制。
[0032]本专利技术中的离子交换树脂主要起到辅助细胞和病毒的裂解，并且吸附杂质的作用。
[0033]在可选的实施方式中，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠或十八烷基硫酸钠，优选为十六烷基硫酸钠。
[0034]本专利技术优选十六烷基硫酸钠的原因在于：根据表面活性剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.病毒核酸样本稀释剂，其特征在于，包括：阴离子表面活性剂、氢氧化钠、EDTA、海藻糖和离子交换树脂，按照质量体积比，所述EDTA加入量为0～3％，优选为1％；所述阴离子表面活性剂的加入量为0.010％～0.050％，优选为0.02％；所述离子交换树脂加入量为0～5％，优选为2.5％。2.根据权利要求1所述的病毒核酸样本稀释剂，其特征在于，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠或十八烷基硫酸钠，优选为十六烷基硫酸钠。3.根据权利要求1所述的病毒核酸样本稀释剂，其特征在于，所述氢氧化钠的浓度为0.16～1.28mM，优选为0.32mM。4.根据权利要求1～3所述的病毒核酸样本稀释剂，其特征在于，还包括多元醇类、氯化钠或NP
‑
40中的一种或两种以上组合。5.根据权利要求4所述的病毒核酸样本稀释剂，其特征在于，所述多元醇选自乙二醇或丙二醇；优选地，按照质量体积比，所述多元醇为0～10％的丙二醇，进一步优选地，所述多元醇为5％的丙二醇；优选地，按照质量体积比，所述NP
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【专利技术属性】
技术研发人员：沈子明，赵百慧，李春燕，张春雷，
申请(专利权)人：上海伯杰医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：