用于核酸扩增的微球制剂、扩增方法及在联合检测中的应用技术

本发明专利技术涉及分子诊断技术领域，尤其是涉及用于核酸扩增的微球制剂、扩增方法及在联合检测中的应用。本发明专利技术提供的用于核酸扩增的微球制剂能够在2～8℃下长期保存，并且，本发明专利技术提供的微球制剂在使用时，不额外添加溶剂，而是直接与待测样本混合，在不改变原有体系浓度的前提下，能够显著提高体系中模板含量，从而提高检测的灵敏度。将本发明专利技术提供的核酸扩增用的微球制剂用于RPA、RAA，或者在RPA或RAA基础上，联合第二反应构成的双重或者多重检测中，能够显著高提高灵敏度，同时保证扩增的特异性。同时保证扩增的特异性。同时保证扩增的特异性。

【技术实现步骤摘要】
150～151.19mg，ATP 0.15μmol，dNTP各0.01μmol，Tris
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Ac 0.5μmol。
[0013]优选地，所述微球制剂包括逆转录酶657.89～663.13μg。
[0014]在可选实施方式中，所述重组酶选自T4 UvsX蛋白、T6 UvsX蛋白或Rb69 UvsX蛋白。
[0015]优选地，所述辅助蛋白选T4 UvsY蛋白、T6 UvsY蛋白或Rb69 UvsY蛋白。
[0016]优选地，所述DNA聚合酶为链置换DNA聚合酶，选自金黄色葡萄球菌的DNA聚合酶I的大片段、枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I大片段、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段或T4噬菌体Klewnowexo
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聚合酶。
[0017]优选地，所述逆转录酶包括M
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MLV逆转录酶。
[0018]优选地，所述单链结合蛋白选自T4 GP32蛋白、T6 GP32蛋白或Rb69 GP32蛋白。
[0019]在可选实施方式中，所述微球制剂还包括第二微球，所述第二微球含有复溶剂PEG和/或镁盐激活剂。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于核酸扩增的微球制剂，其特征在于，所述微球制剂包括由扩增反应所需的混合试剂经冻干得到的反应微球，每克反应微球中含有：DNA聚合酶131.58～530.5μg，单链结合蛋白2.632～13.263mg，重组酶0.9867～3.316mg，辅助蛋白0.395～1.33mg，每种引物0.0075～0.02nmol，肌酸激酶657.89～663.13μg，ATP 0.1～0.2μmol，DTT 0.0026～0.015mmol，磷酸激酶0.1～0.5mmol，dNTP各0.008～0.012μmol,Tris
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Ac 0.5～2.5μmol，麦芽糖0～663.13mg，PEG 131.58～663.13mg。2.根据权利要求1所述的微球制剂，其特征在于，所述微球制剂用于RNA扩增体系，每克微球制剂中还包括逆转录酶394.74～795.76μg。3.根据权利要求1或2所述的微球制剂，其特征在于，所述微球制剂包括由扩增反应所需的混合试剂经冻干得到的反应微球，每克反应微球中含有：DNA聚合酶460.53～464.19μg，每种引物0.013nmol，单链结合蛋白10.53～10.61mg，重组酶1.71～1.72mg，辅助蛋白1.05～1.06mg，麦芽糖394.74～397.88mg，PEG 150～151.19mg，ATP 0.15μmol，dNTP各0.01μmol，Tris
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Ac 0.5μmol；优选地，所述微球制剂包括逆转录酶657.89～663.13μg。4.根据权利要求3所述的微球制剂，其特征在于，所述重组酶选自T4 UvsX蛋白、T6 UvsX蛋白或Rb69 UvsX蛋白；优选地，所述辅助蛋白选T4 UvsY蛋白、T6 UvsY蛋白或Rb69 UvsY蛋白；优选地，所述DNA聚合酶为链置换DNA聚合酶，选自金黄色葡萄球菌的DNA聚合酶I的大片段、枯草芽孢杆菌DNA聚合酶I大片段、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段或T4噬菌体Klewnowexo
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聚合酶；优选地，所述逆转录酶包括M
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MLV逆转录酶；优选地，所述单链结合蛋白选自T4 GP32蛋白、T6 GP32蛋白或Rb69 GP32蛋白。5.根据权利要求4任一项所述的微球制剂，其特征在于，所述微球制剂还包括第二微球，所述第二微球含有复溶剂PEG和/或镁盐激活剂；优选地，每克第二微球中含有PEG 960～980mg和/或镁盐265.0～265.5μmol。6.权利要求1～5任一项所述的微球制剂在RPA或RAA中的应用。7.微球制剂的制备方法，其特征在于，所述微球制剂包括权利要求1～5任一项所述微球制剂；所述制备方法包括，将微球制剂各组分混合均匀后，以不少于25s的时间间隔滴注于液氮中，微球在液氮中保存时间不低于1h后，转移至冻干机中进行冻干，按照冻干程序进行冻干干燥得到微球制剂；所述冻干程序为梯度升温冻干干燥方法，依次包括预冻步骤、主干燥步骤和终末干燥步骤；优选地，所述预冻步骤的温度为
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54℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李沛，赵百慧，李春燕，
申请(专利权)人：上海伯杰医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：