Argonaute介导的一锅法microRNA检测体系及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种Argonaute介导的一锅法microRNA检测体系及检测方法。本发明专利技术提供了一种microRNA检测方法，其包括将待测核酸样本、指数扩增反应体系和microRNA检测体系混合，形成混合反应体系，进行反应，获得反应物中的荧光信号，实现microRNA的检测；microRNA检测体系包括向导DNA、Argonaute核酸酶和检测探针，且指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物作为向导DNA。本发明专利技术的体系及方法首次建立了EXPAR扩增与Ago特异性剪切一体化的一锅法检测，实现在单个反应体系中同时扩增、剪切和单个或多个目标物检测，避免气溶胶污染，操作便捷、方法高效。方法高效。方法高效。

【技术实现步骤摘要】
Argonaute介导的一锅法microRNA检测体系及检测方法


[0001]本专利技术涉及microRNA检测的
，具体涉及一种Argonaute介导的一锅法microRNA检测体系及检测方法；更具体地，涉及可编程Argonaute核酸特异性剪切酶介导的一锅法microRNA检测/分子诊断体系及方法。

技术介绍

[0002]MicroRNA(miRNA)是一类短链非编码RNA，miRNA通过靶向mRNA，进而抑制转录后的基因表达，在调控基因表达方面起着重要作用(Cell,2004,116(2):281
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297)。miRNA丰度水平的升高或降低与疾病的发生密切相关，被作为疾病诊断、监测的重要标志物之一。例如过去几十年的研究表明，miRNA的异常水平与肿瘤的发生、发展、转移等密切相关，被认为是肿瘤诊断和预后的重要标志物(Nature reviews cancer,2006,6(4):259
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269.)。由于肿瘤本身的复杂性，肿瘤标志物的敏感性和特异性较差，目前肿瘤的早期精准诊断一直是困扰着人类的一个难本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种microRNA检测方法，其包括：将待测核酸样本、指数扩增反应体系和microRNA检测体系混合，形成混合反应体系，进行反应，获得反应物中的荧光信号，实现microRNA的检测；其中，所述microRNA检测体系包括向导DNA、Argonaute核酸酶和检测探针，且所述指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物作为所述向导DNA。2.根据权利要求1所述的microRNA检测方法，其中，所述Argonaute核酸酶选自来自产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的CpAgo核酸酶、来自巴特勒肠杆菌(Intestinibacter bartlettii)的IbAgo核酸酶、来自格氏嗜盐碱杆菌(Natronobacterium gregoryi)的NgAgo核酸酶中的一种或多种；优选地，所述Argonaute核酸酶为来自产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的CpAgo核酸酶。3.根据权利要求1或2所述的microRNA检测方法，其中，在所述混合反应体系中，所述Argonaute核酸酶的含量为0.01
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200nM。4.根据权利要求1～3中任一项所述的microRNA检测方法，其中，所述的指数扩增反应体系包括扩增模板、DNA聚合酶、切口酶、dNTP、RNase抑制剂和酶缓冲液。5.根据权利要求4所述的microRNA检测方法，其中，所述的DNA聚合酶为Vent(exo
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)DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶；和/或，所述的切口酶为限制性核酸内切酶或切口核酸内切酶；优选的，所述的切口酶为限制性核酸内切酶；更优选的，所述限制性核酸内切酶为Nt.BstNBI。6.根据权利要求4或5所述的所述的microRNA检测方法，其中，所述的酶缓冲液包括反应缓冲液和NEBuffer
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r3.1中的一种或多种。7.根据权利要求1～6中任一项所述的microRNA检测方法，其中，所述的检测探...

【专利技术属性】
技术研发人员：林秋媛，陈惠，孔继烈，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：