【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学检测领域，具体地涉及用于检测宫颈癌甲基化的试剂盒。
技术介绍
1、宫颈癌是女性最常见的癌症之一，多发生于宫颈鳞柱交界处(移行带)。在全球范围内，估计2018年有57万例新发病例，占所有癌症死亡妇女的7.5％。而中国的宫颈癌病例占全球的28％以上，高发年龄为50-55岁。近年来，中国宫颈癌的发病率和死亡率一直呈上升趋势。其中85-90％为鳞状细胞癌，余下的10-15％中多数为腺癌。宫颈癌的临床表现多不明显，或仅有类似宫颈炎的症状，容易造成漏诊；一旦出现症状，多已发展到晚期，从而丧失了最佳的治疗窗口。
2、多项大型研究表明，定期接受宫颈癌筛查是预防宫颈癌的最佳方法。常用的宫颈癌筛检方式主要有两种，一种是常见的宫颈细胞学检查，包括传统的巴氏涂片(pap test)和液基薄层细胞技术(tct)两种方式，通过观察子宫颈部的分泌物而筛查可能发生癌变的非典型细胞，以早期侦测宫颈癌。然而，巴氏涂片法因取材、制片、阅片过程中存在的问题以及传统的巴氏五级分类法等都是导致它敏感性低的原因，故临床上假阴性者多见；液基薄层细胞技术因相关设备及检查耗材价格昂贵，导致它难以普及。
3、另一种则为人类乳突病毒检测(hpv testing)，即观察宫颈脱落细胞中是否存在高危hpv亚型的感染。人类乳突病毒检测虽然具有高敏感度，却容易造成高的假阳性，会导致临床上的过度治疗和增加病人的负担。
4、因此，本领域迫切需要开发具有快速、简便、高灵敏度和高特异性等优点的宫颈癌早期检测技术的出现。
1、本专利技术的目的就是提供一种具有快速、简便、高灵敏度和高特异性等优点的宫颈癌早期检测技术。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂，所述检测试剂包括：
3、第一引物探针组合，所述第一引物探针组合用于检测pcdhgb7甲基化基因的引物探针组合，所述第一引物探针组合选自下组：(a1)、(a2)、(a3)、或其组合；
4、其中，(a1)如seq id no.1所示的上游引物、如seq id no.2所示的下游引物和如seq id no.3所示的荧光探针；
5、(a2)如seq id no.4所示的上游引物、如seq id no.5所示的下游引物和如seq idno.6所示的荧光探针；
6、(a3)如seq id no.7所示的上游引物、如seq id no.8所示的下游引物和如seq idno.9所示的荧光探针。
7、在另一优选例中，所述检测试剂还包括选自下组的引物探针组合：
8、(b)第二引物探针组合，所述第二引物探针组合用于检测sox1甲基化基因的引物探针组合，所述第二引物探针组合选自下组：(b1)、(b2)、(b3)、或其组合；
9、其中，(b1)如seq id no.10所示的上游引物、如seq id no.11所示的下游引物和如seq id no.12所示的荧光探针；
10、(b2)如seq id no.13所示的上游引物、如seq id no.14所示的下游引物和如seqid no.15所示的荧光探针；
11、(b3)如seq id no.16所示的上游引物、如seq id no.17所示的下游引物和如seqid no.18所示的荧光探针；和/或
12、(c)第三引物探针组合，所述第三引物探针组合用于检测pax1甲基化基因的引物探针组合，所述第三引物探针组合选自下组：(c1)、(c2)、(c3)、或其组合；
13、其中，(c1)如seq id no.19所示的上游引物、如seq id no.20所示的下游引物和如seq id no.21所示的荧光探针；
14、(c2)如seq id no.22所示的上游引物、如seq id no.23所示的下游引物和如seqid no.24所示的荧光探针；
15、(c3)如seq id no.25所示的上游引物、如seq id no.26所示的下游引物和如seqid no.27所示的荧光探针。
16、在另一优选例中，所述荧光探针的5'端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团选自下组：fam、hex、ned、rox、tet、joe、tamra、cy3、cy5、vic。
17、在另一优选例中，所述荧光探针的3'端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团选自下组：mgb、bhq-1、bhq-2、bhq-3。
18、在另一优选例中，所述荧光探针的一端标记有荧光报告基团，另一端标记有荧光淬灭基团。
19、在另一优选例中，所述荧光淬灭基团为mgb。
20、在另一优选例中，引物探针组合选自下组：
21、(z1)引物探针组合3,5和8，即(a3)、(b2)和(c2)；
22、(z2)引物探针组合1,3和7，即(a1)、(a3)和(c1)；
23、(z3)引物探针组合2,5和8，即(a2)、(b2)和(c2)；
24、(z4)引物探针组合3,5和7，即(a3)、(b2)和(c1)。
25、在另一优选例中，引物探针组合选自下组：
26、(n1)引物探针组合1,5和8，即(a1)、(b2)和(c2)；
27、(n2)引物探针组合3,5和8，即(a3)、(a2)和(c2)；
28、(n3)引物探针组合3,4和7，即(a3)、(b1)和(c7)；
29、(n4)引物探针组合1,3和7，即(a1)、(a3)和(c1)；
30、(n5)引物探针组合3,5和7，即(a3)、(b2)和(c1)。
31、本专利技术第二方面，提供了一种如本专利技术第一方面所述的检测试剂的用途，用于制备检测宫颈癌的试剂盒。
32、在另一优选例中，所述的检测宫颈癌包括宫颈癌筛查。
33、在另一优选例中，所述的检测宫颈癌为宫颈癌辅助筛查。
34、在另一优选例中，所述的试剂盒针对宫颈脱落细胞进行检测。
35、本专利技术第三方面，提供了一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括第一容器，所述第一容器含有如本专利技术第一方面所述的检测试剂。
36、在另一优选例中，所述第一容器包括多个第一容器，每个第一容器中分别含有不同的引物探针组合。
37、在另一优选例中，所述第一容器中为含有多个不同的引物探针组合的单个容器。
38、在另一优选例中，所述检测试剂盒进一步包括针对内标的引物对和探针。
39、在另一优选例中，所述针对内标的引物对和探针为针对内参基因β-actin的引物探针组合：如seq id no.28所示的上游引物、如seq id no.29所示的下游引物、和如seq idno.30所示的荧光探针。
40、在另一优选例中，所述检测试剂盒还本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括：
2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括选自下组的引物探针组合：
3.一种如权利要求1或2所述的检测试剂的用途，其特征在于，用于制备检测宫颈癌的试剂盒。
4.一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括第一容器，所述第一容器含有如权利要求1或2所述的检测试剂。
5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒进一步包括针对内标的引物对和探针。
6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述针对内标的引物对和探针为针对内参基因β-actin的引物探针组合：如SEQ ID NO.28所示的上游引物、如SEQ ID NO.29所示的下游引物、和如SEQ ID NO.30所示的荧光探针。
7.如权利要求4～6任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包含选自下组的一种或多种额外的实验试剂：
8.如权利要求4～7任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检
9.一种体外用于检测宫颈细胞甲基化基因的方法，其特征在于，所述方法包括：
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述待测样品需进行亚硫酸氢盐转化处理。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括：
2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括选自下组的引物探针组合：
3.一种如权利要求1或2所述的检测试剂的用途，其特征在于，用于制备检测宫颈癌的试剂盒。
4.一种用于检测宫颈细胞甲基化基因的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括第一容器，所述第一容器含有如权利要求1或2所述的检测试剂。
5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒进一步包括针对内标的引物对和探针。
6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述针对内标的引物对和探针为...
【专利技术属性】
技术研发人员：林协，朱兆奎，涂火林，王琪，
申请(专利权)人：上海伯杰医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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