一种促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽及其应用。本发明专利技术所述牛骨胶原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽及其应用
[0001]本申请是本申请人于2021年03月23日提交的，申请号为202110308414.0，专利技术名称为“一种促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽及其应用”的专利技术申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及活性肽
更具体地，涉及一种促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽及其应用。

技术介绍

[0003]骨重塑一直贯穿人的一生。骨重塑主要包括骨形成和骨吸收两个过程。一旦骨形成的速度小于骨吸收的速度，就可能会导致骨质疏松的发生。骨质疏松是一种以骨密度减少为特征的一种全身性疾病。骨的矿化过程可以对骨密度的多少产生直接的影响。因此，寻找高效的有利于骨矿化过程的多肽对于抗骨质疏松药物或者食品的开发有着非常重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的在于提供活性高、毒性小的促进成骨细胞矿化的牛骨胶原肽。
[0005]本专利技术的第二个目的在于提供上述牛骨胶原肽在促进成骨细胞矿化，预防和/治疗骨质疏松方面的应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
[0007]根据本专利技术的第一个目的，本专利技术提供一种牛骨胶原肽，所述牛骨胶原肽的氨基酸序列包括如下序列中的一种或多种：
[0008]LPGIDGRPGPIGPAG，其中，2位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸，如SEQ ID NO:1所示；
[0009]GLTGPIGPPGPAG，其中，9位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸，如SEQ ID NO:2所示；
[0010]LPGIDGRPGPIGPAG，其中，2位和8位的脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸，如SEQ ID NO:3所示；
[0011]APGPVGPVG，其中，2位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸，如SEQ ID NO:4所示；
[0012]GPAGPSGPAG，如SEQ ID NO:5所示；
[0013]GAPGSPGPAG，如SEQ ID NO:6所示。
[0014]可选的，所述牛骨胶原肽还可以是与上述任一牛骨胶原肽的氨基酸序列具有80％及以上同源性的活性肽，该牛骨胶原肽和上述牛骨胶原肽的功能相同或相似。例如，所述牛骨胶原肽的氨基酸序列可以是与上述任一牛骨胶原肽的氨基酸序列具有85％，90％，95％或97％同源性的序列。
[0015]本专利技术还提供了编码上述牛骨胶原肽的多核苷酸。
[0016]在已知牛骨胶原肽的氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以根据对于牛骨胶原肽表达的需要，基于密码子的简并性原则和不同物种对于密码子的使用偏好性，设计具有不同核苷酸序列的牛骨胶原肽的编码基因。
[0017]在本专利技术中，示例性的，上述牛骨胶原肽的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:7
‑
SEQ ID NO:12所示。
[0018]进一步的，本专利技术提供一种融合多肽，所述融合多肽包含上述的牛骨胶原肽中的一种。所述的融合多肽可以是通过化学结合、酶切或者物理断裂方法获得。例如将多肽与卵清白蛋白或者牛血清白蛋白形成的蛋白复合体。
[0019]本专利技术的牛骨胶原肽可以从牛骨胶原蛋白酶解产物中经过分离纯化获得，也可以通过本领域已知的其他方法制备得到，例如固相合成的方法、生物工程的方法等等。
[0020]根据本专利技术的第二个目的，本专利技术提供所述牛骨胶原肽在促进成骨细胞矿化的药物或食品中的应用。进而提供所述牛骨胶原肽在制备预防和/或治疗骨质疏松的药物或食品中的应用。
[0021]本专利技术进一步涉及一种药物或一种食品，其中含有本专利技术的牛骨胶原肽，例如LPGIDGRPGPIGPAG(2位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸)，GLTGPIGPPGPAG(9位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸)，LPGIDGRPGPIGPAG(2位和8位的脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸)，APGPVGPVG(2位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸)，GPAGPSGPAG，GAPGSPGPAG中的一种或多种。
[0022]本专利技术的药物可以制成本领域常见的各种形式，包括但不限于，适于口服的散剂、片剂(包括各种包衣片剂、缓释或控释片剂)、锭剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、颗粒剂、丸剂、可分散粉末、水性或油性混悬剂、水性或油性溶液剂、乳剂、酏剂、糖浆剂等等，适于局部使用的霜剂、软膏剂、凝胶、水性或油性溶液剂、水性或油性混悬剂等等；适于吸入使用的粉末或液体气雾剂；适于经胃肠外给药的静脉内、皮下或肌内注射用无菌水性或油性的注射剂或冻干粉针剂、栓剂等等。
[0023]本专利技术的药物中可以进一步含有常规的各种辅料和/或其他活性成分。合适的辅料包括但不限于赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、水溶性聚合物、无机盐、溶剂、溶解助剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲液、防腐剂、抗氧剂、着色剂、甜味剂、酸味剂、起泡剂和调味剂等等。
[0024]本专利技术的有益效果如下：
[0025]本专利技术以促进成骨细胞矿化为活性筛选指标，依次采用反相硅胶柱层析、离子交换柱层析、凝胶柱层析，最终筛选到活性最强的组分，并采用高效液相色谱质谱联用仪对活性最强的组分进行氨基酸序列的鉴定。本专利技术获得牛骨胶原肽可以有效促进成骨细胞矿化，预防和/或治疗骨质疏松，减轻骨质疏松患者的痛苦，这些多肽具有高效低毒的特点。
附图说明
[0026]下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。
[0027]图1示出超滤组分CP1的快速反相柱层析色谱图。
[0028]图2示出超滤组分经过快速反相硅胶柱层析得到的6个组分的成骨细胞矿化活性测试结果。
[0029]图3示出快速反相硅胶柱层析组分CP1
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5离子交换色谱图
[0030]图4示出离子交换柱层析组分CP1
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1凝胶柱层析色谱图
[0031]图5示出离子交换柱层析组分CP1
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2凝胶柱层析色谱图
[0032]图6示出CP1
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1和CP1
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2组分经过凝胶柱层析得到的4个组分的成骨细胞矿化活性测试结果。
[0033]图7示出本专利技术6种牛骨胶原肽的成骨细胞矿化沉积测试结果。
[0034]图8示出本专利技术6种牛骨胶原肽的成骨细胞上清骨钙素含量测试结果。
具体实施方式
[0035]为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例和附图对本专利技术做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。
[0036]实施例1牛骨胶原肽制备
[0037]依据中国专利申请CN 105586379 A“一种具有抑制癌细胞增殖作用的胶原蛋白活性肽的制备方法”公开的内容，获得超滤组分CP1，即完成该专利申请中所公开的制备方法的步骤(1)
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(8)。
[0038]反相硅胶柱层析：将超滤组分CP1样品溶解于1mL超纯水中，配制成10mg/mL溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牛骨胶原肽，其特征在于，所述牛骨胶原肽的氨基酸序列为APGPVGPVG；其中，2位脯氨酸被羟基化修饰形成羟脯氨酸。2.一种多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1所述的任一牛骨胶原肽。3.一种融合多肽，其特征在于，其包含权利要求1所述的牛骨胶原肽。4.根据权利要求3所述的融合多肽，其特征在于，所述的融合多肽是将权利要求1所述的牛骨胶原肽与载体蛋白连接形成的蛋白复合体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佳宁，郭燕川，张兵，王颖，王富荣，刘芳，
申请(专利权)人：包头东宝生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：