反应性偶联物制造技术

本发明专利技术涉及用于化学修饰治疗性抗体或蛋白质的化合物(反应性偶联物)。这些化合物能够在一个单一步骤中将有效负载区域选择性地附接至抗体或抗体片段，从而产生修饰抗体或修饰抗体片段，该修饰抗体或修饰抗体片段可以用于诊断、监测、成像或治疗疾病。成像或治疗疾病。成像或治疗疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】反应性偶联物


[0001]本专利技术涉及用于治疗性抗体的化学修饰的化合物(下文有时称为“反应性偶联物”)。这些化合物能够在一个单一步骤中将有效负载区域选择性附接至抗体或抗体片段，从而产生修饰抗体或修饰抗体片段，该修饰抗体或修饰抗体片段可以用于诊断、监测、成像或治疗疾病。

技术介绍

[0002]传统的癌症治疗(例如，化学疗法)不仅是非常艰辛的(因为它们的毒性会引起严重的副作用)，而且也可能是非常偶然的，治疗对一个患者有效，而对另一个患者完全无效。因此，开发新的毒性更小和/或更有效的治疗是始终存在的需求，监测治疗效果的能力也是始终存在的需求，例如能够区分“应答者”和“非应答者”患者。
[0003]为了对这些需求进行应答，出现了称为抗体
‑
药物偶联物(Antibody
‑
drug
‑
conjugates，ADC)的新型治疗剂。ADC利用抗体(例如，单克隆抗体(Monoclonal antibodies，mAb))的靶向能力，将有效负载(例如，细胞毒素剂或标记剂)直接递送至癌细胞。癌细胞的靶向性能够使有效负载的治疗效果最大化，而使对健康细胞的毒性作用最小化。根据有效负载，ADC可以实现各种作用，例如诊断、监测和/或治疗。
[0004]ADC可以通过多种方法来制备。然而，大多数所述方法导致化学性质不同ADC的异质混合物，该异质混合物具有不同有效负载(药物)抗体比率(payload(drug)antibody ratios，DAR)和偶联位点。这种异质性会使制造复杂化，从而导致批次间(batch to batch)的高度变化性，并且有时会导致不可预测的安全性和功效。因此，可以制备得到均质混合物的方法(例如，区域选择性或位点特异性偶联方法)越来越受到关注。此类方法可以显着提高DAR和有效负载(药物)结合位点的可预测性，并且可以用于简化具有更可预测的安全性或功效的、更明确的ADC产品的开发和制造。
[0005]已经开发了几种方法来用于有效负载与抗体的区域特异性和位点特异性偶联。然而，通常已知的方法需要抗体的修饰/工程改造，例如通过掺入非天然氨基酸或通过修饰碳水化合物部分来进行修饰/工程改造。这种修饰可能负面地影响相应ADC的治疗功效/安全性，例如，因为与抗体的活性、靶向、代谢和/或排泄、以及对抗体的免疫应答相关的不期望的影响。其他方法涉及多个步骤，例如WO2018/199337中列出的方法。这种多步骤方法可能成本高昂和/或费力，使其不太有吸引力，甚至不适合期望快速且简单的抗体修饰过程的应用(例如，用于护理点诊断应用)。
[0006]因此，仍然需要寻找用于有效负载与抗体或抗体片段的区域或位点特异性偶联的替代方法，特别是需要在此之前无需对抗体或抗体片段进行工程改造的方法。此外，需要寻找以尽可能少的步骤(优选在一个单一步骤)中制备抗体药物偶联物的方法。
[0007]鉴于上述情况，本专利技术的一个目的是提供化合物(反应性偶联物)，使得能够在一个单一步骤中将有效负载区域选择性偶联至抗体或抗体片段，而在此之前无需工程改造和/或修饰抗体或抗体片段。另一个目的是提供包含这种化合物的试剂盒。
[0008]本专利技术的又一个目的是提供一种用于制备修饰抗体或修饰抗体片段(例如，ADC)的方法，该修饰抗体或修饰抗体片段可以在诊断、监测、成像或治疗疾病的方法中使用。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了一种化合物，该化合物能够将有效负载区域选择性附接至抗体(例如，治疗性抗体)或任选掺入Fc
‑
融合蛋白中的抗体片段。这种区域选择性附接可以在一个单一步骤中完成。得到的修饰抗体或修饰抗体片段(例如，ADC或抗体
‑
放射性核素偶联物)可以在诊断、监测、成像或治疗疾病(特别是癌症)的方法中使用。
[0010]本专利技术的化合物(反应性偶联物)可以由下式(1)表示：
[0011]P
‑
Y
‑
S
‑
V
ꢀꢀ
(1)
[0012]其中，
[0013]P为有效负载；
[0014]Y为能够与氨基酸(例如，赖氨酸或半胱氨酸)的侧链反应的反应性部分，优选为能够与赖氨酸的侧链反应的部分；
[0015]V为载体，该载体能够与抗体或其片段的可结晶片段(fragment crystallizable，Fc)区域相互作用，该抗体片段任选地掺入至Fc
‑
融合蛋白中；
[0016]S为具有长度Z的间隔子，其中Z为使得当载体V与抗体或其片段的Fc区域相互作用时、反应性部分Y能够在所述抗体或抗体片段上与氨基酸残基的侧链反应的长度。
[0017]本专利技术还涉及用于对抗体或抗体片段进行区域选择性修饰的试剂盒，该抗体片段任选地掺入至Fc
‑
融合蛋白中，其中，所述试剂盒包含如上文所述的化合物和缓冲液，该化合物任选地固定至固相基质上(例如，珠)。
[0018]此外，本专利技术涉及一种用于对抗体或抗体片段进行区域选择性修饰的方法，该抗体片段任选地掺入至Fc
‑
融合蛋白中，其中所述方法使用上文所述的化合物。
[0019]此外，本专利技术涉及一种修饰抗体或修饰抗体片段(例如，由上文所述的方法可获得或获得)，该抗体片段任选地掺入至Fc
‑
融合蛋白中，该修饰抗体或修饰抗体片段用于在诊断、监测、成像和/或治疗疾病(尤其是癌症)的方法中使用，。
[0020]本专利技术特别包括以下实施方案(“项目”)：
[0021]1.一种由下式(1)表示的化合物：
[0022]P
‑
Y
‑
S
‑
V
ꢀꢀ
(1)
[0023]其中，
[0024]P为有效负载；
[0025]Y为能够与氨基酸的侧链反应的反应性部分，优选为能够与赖氨酸的侧链反应的部分；
[0026]V为载体，该载体能够与抗体或其片段的可结晶片段(Fc)区域相互作用，所述抗体片段任选地掺入Fc
‑
融合蛋白中；
[0027]S为具有长度Z的间隔子，其中Z为使得当载体V与抗体或其片段的Fc区域相互作用时、反应性部分Y能够在所述抗体或抗体片段上与氨基酸残基的侧链反应的长度。
[0028]2.根据项目1的化合物，其中所述有效负载包含选自以下的部分、以及所述部分的放射性同位素和/或所述部分的药学上可接受的盐：
[0029](i)选自以下的部分：
[0030]·
标记部分，该标记部分可以包括放射性核素，优选为螯合剂，该螯合剂诸如为1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷
‑
1,4,7,10
‑
四乙酸(1,4,7,10
‑
tetraatacyclododecane
‑
1,4,7,10
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种由下式(1)表示的化合物：P
‑
Y
‑
S
‑
V
ꢀꢀꢀꢀ
(1)其中，P为有效负载；Y为能够与氨基酸的侧链反应的反应性部分，优选为能够与赖氨酸的侧链反应的部分；V为载体，所述载体能够与抗体或抗体片段的片段可结晶(Fc)区域相互作用，所述抗体片段任选地掺入至Fc
‑
融合蛋白中；S为具有长度Z的间隔物，其中Z为使得当所述载体V与所述抗体或抗体片段的所述Fc区域相互作用时、所述反应性部分Y能够在所述抗体或抗体片段上与氨基酸残基的侧链反应的长度；2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述有效负载包括选自以下的部分、以及所述部分的放射性同位素和/或所述部分的药学上可接受的盐：(i)选自以下的部分：
·
标记部分，所述标记部分可以包括放射性核素，所述标记部分优选为螯合剂，所述螯合剂诸如为1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷
‑
1,4,7,10
‑
四乙酸(DOTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、环己基二亚乙基三胺五乙酸(CH
‑
X
‑
DTPA)、3,6,9,15
‑
四氮杂双环[9.3.1]十五烷
‑
1(15),11,13
‑
三烯
‑
3,6,9
‑
三乙酸(PCTA)或去铁胺(DFO)，其中所述螯合剂任选地螯合放射性核素；
·
发色团；
·
荧光团，诸如荧光素或罗丹明；以及
·
含有诸如
125
I、
123
I、
131
I、
18
F、
11
C、
15
O、
18
F的放射性核素的标记部分，例如，衍生自含有诸如
125
I、
123
I或
131
I的放射性核素的4
‑
羟基苯丙酸酯的部分；(ii)选自包含偶联基团的部分的部分，所述包含偶联基团的部分包括任选取代的共轭二烯、任选取代的四嗪(TZ)、任选取代的炔烃或叠氮化物、任选取代的二苯并环辛炔(DBCO)、任选取代的反式
‑
环辛烯(TCO)、任选取代的双环[6.1.0]壬炔(BCN)、任选取代的醛、任选取代的酮、以及任选取代的肼；(iii)衍生自选自以下的药物的部分
·
抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂诸如为DNA
‑
烷化剂，所述DNA
‑
烷化剂例如为多卡霉素；
·
拓扑异构酶抑制剂，例如多柔比星；
·
RNA
‑
聚合酶II抑制剂，例如α
‑
鹅膏蕈碱；
·
DNA裂解剂，例如卡利奇霉素；
·
抗有丝分裂剂或微管干扰剂，例如紫杉烷、澳瑞他汀或美登醇；
·
抗代谢物；
·
激酶抑制剂，例如帕他色替；
·
免疫调节剂；
·
抗感染性疾病剂；3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，所述有效负载是任选螯合放射性核素的螯合剂，所述螯合剂优选是衍生自以下的部分：DTPA、CH
‑
X
‑
DTPA、DFO、1
‑
(1,3
‑
羧丙基)
‑
4,7
‑
羧甲基
‑
1,4,7
‑
四乙酸(NODAGA)、1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷
‑1‑
戊二酸
‑
4,7,10
‑
三乙酸
(DOTAGA)、2,2'
‑
(1,4,7
‑
三氮杂环壬烷
‑
1,4
‑
二基)二乙酸盐(酯)(NO2A)、DOTA、1,4,7
‑
三氮杂环壬烷
‑
1,4,7
‑
三乙酸(NOTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺二乙酸、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、1,4,8,11
‑
四氮杂环十四烷(CYCLAM)、1,4,8,11
‑
四氮杂环十四烷
‑
1,4,8,11
‑
四乙酸(TETA)、1,4,8,11
‑
四氮杂双环[6.6.2]十六烷
‑
4,11
‑
二乙酸(CB
‑
TE2A)、2,2',2
”‑
(1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷
‑
1,4,7
‑
三基)三乙酰胺(DO3AM)、1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷
‑
1,7
‑
二乙酸(DO2A)、1,5,9
‑
三氮杂环十二烷(TACD)、(3a1s,5a1s)
‑
十氢
‑
3a,5a,8a,10a
‑
四氮杂(顺
‑
乙二醛
‑
环拉胺)、1,4,7
‑
三氮杂环壬烷(TACN)、1,4,7,10
‑
四氮杂环十二烷(轮环藤宁)、三(羟基吡啶酮)(THP)、3
‑
(((4,7
‑
双((羟基(羟甲基)磷酰基)甲基)
‑
1,4,7
‑
三唑烷
‑1‑
基)甲基)(羟基)磷酰基)丙酸(NOPO)、PCTA、2,2',2”,2”'
‑
(1,4,7,10
‑
四氮杂环十三烷
‑
1,4,7,10
‑
四基)四乙酸(TRITA)、2,2',2”,2”'
‑
(1,4,7,10
‑
四氮杂环十三烷
‑
1,4,7,10
‑
四基)四乙酰胺(TRITAM)、2,2',2
”‑
(1,4,7,10
‑
四氮杂环十三烷
‑
1,4,7
‑
三基)三乙酰胺(TRITRAM)、反式
‑
N
‑
二甲基环拉胺、2,2',2
”‑
(1,4,7
‑
三氮杂环壬烷
‑
1,4,7
‑
三基)三乙酰胺(NOTAM)、氧环拉胺、二氧环拉胺、1,7
‑
二氧杂
‑
4,10
‑
二氮杂环十二烷、交联桥环拉胺(CB
‑
环拉胺)、三氮杂环壬烷亚膦酸盐(酯)(TRAP)、双吡哆酸基二磷酸盐(酯)(DPDP)、内消旋
‑
四(4
‑
磺酰基苯基)卟吩(TPPS4)、亚乙基双羟基苯基甘氨酸(EHPG)、六亚甲基二胺四乙酸、二甲基膦基甲烷(DMPE)、亚甲基二磷酸、二巯基琥珀酸(DMPA)或其衍生物；更优选衍生自DTPA、DOTA、DFO、NOTA、PCTA、CH
‑
X
‑
DTPA、NODAGA或DOTAGA的部分。4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中，所述放射性核素选自
124
I、
131
I、
86
Y、
90
Y、
177
Lu、
111
In、
188
Re、
55
Co、
64
Cu、
67
Cu、
68
Ga、
89
Zr、
203
Pb、
212
Pb、
212
Bi、
213
Bi、
72
As、
211
At、
225
Ac、
223
Ra、
97
Ru、
149
Tb、
152
Tb、
161
Tb、
99
mTc、
226
Th、
227
Th、
201
Tl、
89
Sr、
44/43
Sc、
47
Sc、
153
Sm、
133
Xe和Al
18
F，优选选自
89
Zr、
111
In、
64
Cu、
177
Lu、
68
Ga、
99m
Tc、
203
Pb、
72
As、
55
Co、
97
Ru、
201
Tl、
152
Tb、
133
Xe、
86
Y和Al
18
F，更优选地选自
89
Zr、
111
In、
64
Cu、
177
Lu、
68
Ga和
99m
Tc，特别是
111
In。5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，有效负载是衍生自以下的部分、或所述部分的放射性同位素和/或所述部分的药学上可接受的盐：依喜替康、PNU
‑
159682、鹅膏蕈碱、多卡霉素、澳瑞他汀、美登素、微管溶素、卡利奇霉素、SN
‑
38、紫杉醇、道诺霉素、长春碱、多柔比星、甲氨蝶呤、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯类纺锤体驱动蛋白(KSP)抑制剂、吲哚啉
‑
苯并二氮杂卓二聚体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中，P由下式(2)表示：P1‑
L
‑‑
*'
ꢀꢀꢀꢀ
(2)其中，P1为根据权利要求2至5中任一项所定义的有效负载；L为接头，优选为包含选自碳、氮、氧和硫的一个或多个原子的接头，所述接头任选地为可裂解的；*'指代共价附接至所述反应性部分(Y)。7.根据权利要求6所述的化合物，其中，所述接头选自：(a1)具有1至12个碳原子的亚烷基，优选具有2至6个碳原子的亚烷基，诸如为亚丙基；(b1)具有2或3个碳原子、且具有1至36个重复单元的聚环氧烷基；优选为由式
‑
NH
‑
(CH2CH2O)
n1
‑
CH2CH2–
表示的基团，其中n1为0至35的整数，n1例如为1至20的整数；(c1)具有2至12个氨基酸的肽基团。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，所述反应性部分由下式(3a)表示：**
‑‑
(F1
‑
RC
‑
F2)
‑‑
*
ꢀꢀꢀꢀ
(3a)其中，RC为反应中心，优选为亲电反应中心，并且更优选为选自C＝O和C＝S的基团；F1为单个共价键、原子或原子基团；优选为选自O和S的原子，或包含选自C、N、O和S的一个或多个原子的原子基团；更优选为选自O和S的原子；F2表示原子或原子基团；优选为选自O和S的原子，或包含选自C、N、O和S的一个或多个原子的原子基团；更优选为选自O和S的原子；*指代共价附接至所述间隔物(S)；并且**指代共价附接至所述有效负载(P)。9.根据权利要求8所述的化合物，其中所述反应性部分由下式(4a)至(4n)中的一者表示：其中，*指代共价附接至所述间隔物(S)，**指代共价附接至所述有效负载(P)。10.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，所述反应性部分由下式(3b)表示：**
‑‑
(F1
‑
RC
‑
F2)
‑
(M)
‑‑
*
ꢀꢀꢀ
(3b)其中，RC为反应中心，优选为亲电反应中心，且更优选为选自C＝O和C＝S的基团；F1是单个共价键、原子或原子基团；优选为选自O和S的原子，或包含选自C、N、O和S的一个或多个原子的原子基团；更优选为选自O和S的原子；F2表示原子或原子基团；优选为选自O和S的原子，或包含选自C、N、O和S的一个或多个
原子的原子基团；更优选为选自O和S的原子；M为能够调节F2的电子密度和稳定性的基团，优选为能够吸电子的基团；*指代共价附接至所述间隔物(S)；并且**指代共价附接至所述有效负载(P)。11.根据权利要求10所述的化合物，其中，能够调节F2的所述电子密度和稳定性的所述基团由下式(3c)表示：***'
‑‑
M'—B—C
‑‑
*
ꢀꢀꢀꢀ
(3c)其中，M'为分别具有6元环、10元环或14元环，和1个、2个或3个稠环的芳基；或具有5至20元环，1个、2个或3个稠环，和独立地选自N、O和S的1至4个杂原子的杂芳基；所述M'能够由一个或多个取代基取代；优选为能够由一个或多个取代基取代的苯基、萘基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基或苯并三唑基，各取代基优选选自
‑
F、
‑
Br、
‑
Cl、
‑
I、
‑
NO2、
‑
CN、
‑
C1‑6‑
烷基、
‑
C1‑6‑
烷氧基、诸如
‑
C(O)NH2的
‑
C1‑6‑
氨基、及它们的组合诸如
‑
CC...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥里金，
申请(专利权)人：德彪药业国际股份公司，
类型：发明
国别省市：