一种抗体药物偶联物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗体药物偶联物的制备方法。具体地，该制备方法包括如下步骤：(a)提供一种包含两个反应基团的突变抗体，其中，所述反应基团一个为游离巯基(

【技术实现步骤摘要】
一种抗体药物偶联物的制备方法


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种双功能抗体药物偶联物的制备方法。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是种高致死性疾病。传统的癌症治疗方式包括外科手术，化学治疗和物理治疗，治疗效果不太理想，肿瘤细胞容易产生耐药性且一旦复发转移其后果更为严重。靶向小分子药物和单克隆抗体是近年来兴起的肿瘤治疗方式，但是治疗病症相对局限以及长期使用易出现耐药现象而导致治疗效果下降。肿瘤免疫治疗是一种全身性治疗方法，其原理是通过外界的条件性辅助，增强患者体内免疫系统对功能，从而达到杀伤肿瘤细胞，缓解病症的目的。但是对于产生免疫耐受的肿瘤也常常收效甚微。由于当前任何一种疗法单一使用都有一定的局限性。
[0003]抗体偶联型药物(antibody drug conjugates,ADCs)就是集化疗药物的高效毒性和抗体免疫治疗的高度特异性而对病人进行高效低毒治疗的一类新型药物。ADCs是将具有抗肿瘤毒性的小分子抗癌药物和具有靶向特异性的单克隆抗体利用连接子共价偶联形成的复合药。这种免疫偶联物融合了小分子药物(300
‑
1000Da,IC
50
在nmol以下)的高效抗肿瘤活性和单克隆抗体的高度选择性，稳定性和良好的药代动力特性。在选择好合适靶点后，就需要制备对该靶点有良好亲和力的抗体。但抗体150KD的分子量使ADCs很难透过毛细血管内皮层以及细胞外的间隙，导致其进入实体肿瘤部位的量远小于给药的剂量，因此早期的ADCs主要是针对血液瘤。为了使ADCs可以用于治疗实体瘤，目前尝试在保证抗体与抗原特异性结合的能力的前提下去除一些非必需的片段，降低ADCs的分子量，之后再与高效的小分子化合物偶联，从而达到治疗实体瘤的目的。至今为止，随着临床研究的不断深入，ADCs在长期使用中也会渐渐出现了耐药的状况。
[0004]因此，肿瘤靶向治疗领域需要提供新的用于耐药性降低、药效提高的治疗药物及其制备方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种耐药性降低、药效提高的抗肿瘤药物及其制备方法。
[0006]本专利技术第一方面，提供了一种抗体药物偶联物的制备方法，包括步骤：
[0007](a)提供一种包含两个反应基团的突变抗体，其中，所述反应基团一个为游离巯基(
‑
SH)，另一个为烃酰基芳基
[0008](b)按任意先后顺序，将所述突变抗体与带有羟胺(
‑
O
‑
NH2)基团或修饰有羟胺基团的药物分子A和带有马来酰亚胺基团或修饰有马来酰亚胺基团的药物分子B反应，从而得到所述抗体药物偶联物；
[0009]其中，当所述突变抗体与带有羟胺基团或修饰有羟胺基团的药物分子A反应时，反
应温度T1为37
±
10℃且pH为3
‑
5；且
[0010]当所述突变抗体与带有马来酰亚胺基团或修饰有马来酰亚胺基团的药物分子B反应时，反应温度T2为4
±
10℃且pH为5.1
‑
6.5。
[0011]在另一优选例中，所述抗体选自下组：全长抗体、抗原结合片段、双特异性抗体或纳米抗体。
[0012]在另一优选例中，所述抗体选自下组：所述抗体选自靶向以下靶点的抗体：CCR4、CD3、CD19、CD20、CD30、CD22、EGFR、EpCAM、HER2、PD
‑
1、PD
‑
L1，VEGF、VEGFA、VEGFR2、C5蛋白、CD2、IL
‑
5、PCSK9、RSVF、血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、RANK、DLL3、EDAR、CLL1、BMPR1B、E16、STEAP1、0772P、MPF、NaPi2b、Sema 5b、PSCA hlg、ETBR、MSG783、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、B7
‑
H4、HER2、NCA、MDP、IL20Rα、Brevican、EphB2R、ASLG659、PSCA、GEDA、BAFF
‑
R、CD22、CD79a、CXCR5、HLA
‑
DOB、P2X5、CD72、LY64、FcRH1、IRTA2、TENB2、PMEL17、TMEFF1、GDNF
‑
Ra1、Ly6E、TMEM46、Ly6G6D、LGR5、RET、LY6K、GPR19、GPR54、ASPHD1、酪氨酸酶、TMEM118、GPR172A、MUC16和CD33。
[0013]在另一优选例中，所述抗体选自靶向以下靶点的抗体：
[0014]CCR4、CD3、CD19、CD20、CD30、CD22、EGFR、EpCAM、HER2、PD
‑
1、PD
‑
L1，VEGF、VEGFA、VEGFR2。
[0015]在另一优选例中，所述烃酰基芳基具有式
[0016]其中，所述环A选自下组：取代或未取代的C6
‑
C10的芳基、取代或未取代的包括1
‑
3个选自O、N、S的5
‑
10元杂芳基；
[0017]且R选自下组：取代或未取代的C1
‑
C4烷基、取代或未取代的C2
‑
C4烯基、取代或未取代的C2
‑
C4炔基，
[0018]所述取代指基团上的一个或多个H独立地被选自下组的基团取代：卤素、C1
‑
C4烷基、C1
‑
C4烷氧基、C2
‑
C4烯基、C2
‑
C4炔基、
‑
NO2、
‑
CN或
‑
OH。
[0019]在另一优选例中，所述烃酰基芳基具有式其中，R为C1
‑
C4烷基，优选地，R为甲基、乙基或异丙基。
[0020]在另一优选例中，所述突变抗体为在野生型抗体中分别引入(替换或插入)能够产生游离巯基(
‑
SH)和烃酰基芳基的天然氨基酸或非天然氨基酸而获得。
[0021]在另一优选例中，所述突变抗体包括具有式(I)的氨基酸，从而提供巯基：
[0022][0023]其中，R1选自下组：巯基取代的C1
‑
C4烷基、巯基取代的C2
‑
C4烯基、巯基取代的C2
‑
C4炔基。
[0024]在另一优选例中，所述R1为
‑
CH2‑
SH或CH2CH2‑
SH。
[0025]在另一优选例中，产生所述游离巯基的氨基酸为半胱氨酸。
[0026]在另一优选例中，所述突变抗体包括具有式(II)的氨基酸，从而提供所述烃酰基芳基：
[0027][0028]所述A选自下组：取代或未取代的C6
‑
C10的芳基、取代或未取代的包括1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体药物偶联物的制备方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一种包含两个反应基团的突变抗体，其中，所述反应基团一个为游离巯基(
‑
SH)，另一个为烃酰基芳基(b)按任意先后顺序，将所述突变抗体与带有羟胺(
‑
O
‑
NH2)基团或修饰有羟胺基团的药物分子A和带有马来酰亚胺基团或修饰有马来酰亚胺基团的药物分子B反应，从而得到所述抗体药物偶联物；其中，当所述突变抗体与带有羟胺基团或修饰有羟胺基团的药物分子A反应时，反应温度T1为37
±
10℃且pH为3
‑
5；且当所述突变抗体与带有马来酰亚胺基团或修饰有马来酰亚胺基团的药物分子B反应时，反应温度T2为4
±
10℃且pH为5.1
‑
6.5。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述抗体选自下组：全长抗体、抗原结合片段、双特异性抗体或纳米抗体。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述烃酰基芳基具有式其中，所述环A选自下组：取代或未取代的C6
‑
C10的芳基、取代或未取代的包括1
‑
3个选自O、N、S的5
‑
10元杂芳基；且R选自下组：取代或未取代的C1
‑
C4烷基、取代或未取代的C2
‑
C4烯基、取代或未取代的C2
‑
C4炔基，所述取代指基团上的一个或多个H独立地被选自下组的基团取代：卤素、C1
‑
C4烷基、C1
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C4烷氧基、C2
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C4烯基、C2
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C4炔基、
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NO2、
‑
CN或
‑
OH。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述突变抗体包括具有式(I)的氨基酸，从而提供巯基：其中，R1选自下...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文元，王召印，张琳，
申请(专利权)人：中国科学院上海有机化学研究所，
类型：发明
国别省市：