禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测试剂及检测方法技术

本发明专利技术公开了禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测试剂及检测方法。具体地公开了用于检测禽呼肠孤病毒的引物组合物，所述引物组合物可由引物ARV

【技术实现步骤摘要】
禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测试剂及检测方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及禽呼肠孤病毒分子信标LAMP检测试剂及检测方法。

技术介绍

[0002]禽呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)是一类重要的禽类致病病原体，已在我国各地广泛流行，并呈现逐渐扩大的趋势。ARV主要感染鸡、火鸡以及野鸟等，可引起病毒性关节炎、慢性呼吸道疾病和矮小综合征等，还可引起机体免疫系统的损伤，引发多种病原体的混合感染，最终导致鸡群报酬率降低，死亡率升高，造成严重的经济损失。ARV对环境的耐受性较强，且传播方式较为复杂，主要以粪
‑
口途径和呼吸道感染进行传播，也可通过鸡蛋的垂直传播和破损皮肤感染等途径进行传播，ARV的这些特性为疾病防控带来很大困难，为了进行有效的ARV防控，亟需建立一种简便、快速、准确的诊断方法。
[0003]目前针对ARV的检测方法有：实时荧光定量PCR、RT
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PCR、荧光抗体试验、ELISA等，但以上检测方法均存在试验周期长、操作繁琐、特异性不强、试验器材昂贵等缺点。环介导等温扩增技术(loop
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me
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diated isothermal amplification，LAMP)是Notomi等人专利技术的一种恒温条件下的核酸扩增技术，该方法具有操作简单、特异性强、结果可视化等优势，在疾病检测中具有广泛的应用前景。分子信标是一种灵敏度高、特异性好、具有茎环结构的双标记核酸探针，其通过与靶标特异性结合而使空间构象发生改变，从而呈现相应的荧光信号，已被广泛用于DNA/RNA的定量分析、病原体检测以及活动成像等领域。分子信标相较于传统的荧光染料具有更强的特异性，将分子信标引入LAMP反应体系，整个试验流程无需开盖，可有效避免气溶胶污染，真正做到了简便、快速、准确，ARV分子信标LAMP检测方法的建立对ARV的快速诊断及有效防控具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何简便、快速、准确和/或可视化地检测禽呼肠孤病毒，所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于检测禽呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)的引物组合物，所述引物组合物可由引物ARV
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F3、引物ARV
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B3、引物ARV
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FIP、引物ARV
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S1
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BIP、引物ARV
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S1
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FLOOP和引物ARV
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S1
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BLOOP组成，所述引物ARV
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S1
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F3可为核苷酸序列是SEQ ID No.1的单链DNA；所述引物ARV
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S1
‑
B3可为核苷酸序列是SEQ ID No.2的单链DNA；所述引物ARV
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S1
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FIP可为核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA；所述引物ARV
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S1
‑
BIP可为核苷酸序列是SEQ ID No.4的单链DNA；所述引物ARV
‑
S1
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FLOOP可为核苷酸序列是SEQ ID No.5的单链DNA；所述引物ARV
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S1
‑
BLOOP可为核苷酸序列是SEQ ID No.6的单链DNA。
[0006]所述引物组合物是基于LAMP设计的引物组合物，其中所述引物ARV
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S1
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F3和引物
ARV
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S1
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B3为外引物，所述引物ARV
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S1
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FIP和引物ARV
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BIP为内引物，所述引物ARV
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FLOOP和引物ARV
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S1
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BLOOP为环引物。
[0007]本专利技术还提供了用于检测禽呼肠孤病毒的组合物，所述组合物包括所述引物组合物和探针ARV
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S1
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MB，所述探针ARV
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S1
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MB的核苷酸序列可如SEQ ID No.7所示。
[0008]上述组合物中，所述探针ARV
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S1
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MB的5
’
端可标记荧光基团，3
’
端可标记淬灭基团。
[0009]进一步地，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、TRT、CY3、CY5、ROX、JOE、FITC、TET、NED、TAMRA、LC RED640、LC RED705、Quasar705或Texas Red中的至少一种。
[0010]进一步地，所述淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB、Dabcy1中的至少一种。
[0011]上述组合物中，所述探针ARV
‑
S1
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MB的5
’
端可标记CY5，3
’
端可标记BHQ
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3(BHQ3)。
[0012]所述探针ARV
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S1
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MB为特异性检测ARV的探针，即本专利技术所述分子信标。所述分子信标(探针ARV
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S1
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MB)的核苷酸序列为：5
’‑
CGCACTGAGAACAGAAGTAGGGGTCCATGTGCG
‑3’
，所述分子信标左右两端为茎环序列(下划线部分)，并在5
′
端标记CY5荧光基团，3
′
端标记BHQ
‑
3淬灭基团，形成分子信标。在无靶标存在的情况下，分子信标的茎环结构使得荧光基团发出的荧光信号被淬灭基团所吸收，仪器检测不到荧光信号。随着恒温扩增反应的进行，分子信标的环序列与靶序列特异性结合，茎环结构打开呈链状，荧光基团与淬灭基团分开，荧光基团所发出的荧光不再为淬灭基团所吸收，从而通过检测仪接收、检测荧光信号。
[0013]本专利技术还提供了所述引物组合物或任一所述组合物的下述任一种应用：
[0014]A1)在检测禽呼肠孤病毒或制备用于检测禽呼肠孤病毒的产品中的应用；
[0015]A2)在制备诊断或辅助诊断禽呼肠孤病毒感染所引起的疾病的产品中的应用；
[0016]A3)在制备筛查或辅助筛查禽呼肠孤病毒感染所引起的疾病的产品中的应用；
[0017]A4)在禽呼肠孤病毒防控中的应用。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测禽呼肠孤病毒的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物由引物ARV
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S1
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F3、引物ARV
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S1
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B3、引物ARV
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S1
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FIP、引物ARV
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BIP、引物ARV
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S1
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FLOOP和引物ARV
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S1
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BLOOP组成，所述引物ARV
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F3为核苷酸序列是SEQ ID No.1的单链DNA；所述引物ARV
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B3为核苷酸序列是SEQ ID No.2的单链DNA；所述引物ARV
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FIP为核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA；所述引物ARV
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BIP为核苷酸序列是SEQ ID No.4的单链DNA；所述引物ARV
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FLOOP为核苷酸序列是SEQ ID No.5的单链DNA；所述引物ARV
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BLOOP为核苷酸序列是SEQ ID No.6的单链DNA。2.用于检测禽呼肠孤病毒的组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的引物组合物和探针ARV
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S1
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MB，所述探针ARV
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S1
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MB的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述探针ARV
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S1
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MB的5
’
端标记荧光基团，3
’
端标记淬灭基团。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，任红玉，王盛，万丽军，谢丽基，谢志勤，邓显文，范晴，罗思思，张艳芳，黄娇玲，曾婷婷，张民秀，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：