病毒清除性能的评价方法技术

一种评价病毒去除介质的病毒清除性能的方法，所述方法包括如下工序：(a)将含病毒衣壳液体添加至纯化对象溶液中的工序；(b)使添加了含病毒衣壳液体的纯化对象溶液与病毒去除介质接触，回收经纯化的溶液的工序；和(c)对纯化前的纯化对象溶液中的总病毒衣壳和经纯化的溶液中的总病毒衣壳进行定量的工序。的溶液中的总病毒衣壳进行定量的工序。的溶液中的总病毒衣壳进行定量的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】病毒清除性能的评价方法


[0001]本专利技术涉及病毒去除膜的病毒清除性能的评价方法。

技术介绍

[0002]含生物物质的制剂有从血液中纯化的血浆分级制剂、通过生物技术生产的生物制剂。这些含生物物质的制剂存在混入病毒的风险。通常含生物物质的制剂对病毒方面必须保证安全性。因此，在含生物物质的制剂的制造中，需要预先进行充分地去除或灭活含生物物质的制剂中包含或有可能包含的病毒的工序、即病毒去除工序(例如，参照非专利文献1。)。在含生物物质的制剂的主制造之前在按比例缩小的系统中评价/研究病毒去除工序的病毒去除或灭活能力。将这种评价/研究称为病毒清除试验。
[0003]含生物物质的制剂的制造工序中，被称为稳健的病毒去除工序的是低pH处理或利用病毒去除介质的处理工序(例如，参照非专利文献2。)。利用病毒去除膜等病毒去除介质的处理工序在能够对所有病毒实施而与是否具有包膜无关这点上是优异的。
[0004]通常，含生物物质的制剂的制造工序中的病毒清除试验在任意制造工序的前后测定病毒浓度，例如通过计算其对数降低率(LRV)来评价病毒清除能力(例如，参照非专利文献1。)。此时，在病毒去除工序前的含生物物质的溶液中添加含病毒液体(病毒加标)，测定使含生物物质的溶液与病毒去除介质接触之前及接触之后的病毒浓度，从而评价病毒去除工序的病毒清除能力。
[0005]关于评价病毒清除能力时使用的病毒的种类，在ICH(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use：日美欧药品监管协调国际会议)的q5a中记载了准则，作为有用的非特异性模型病毒的例子，可列举出“动物细小病毒”(例如，参照非专利文献1。)。其中，在许多引用了ICH
‑
q5a的病毒清除试验中，含生物物质的制剂的病毒清除试验中，以特别高的频率使用了小鼠细小病毒(MVM)和猪细小病毒(PPV)。作为用于测定这些病毒浓度的方法，主要使用包括终点方式测定法、局部焦点计算方式测定法在内的感染滴度测定法、或定量PCR(Quantitative
‑
Polymerase Chain Reaction：qPCR)法(例如，参照非专利文献2、3。)。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：国际公开第2014/080676A1号
[0009]专利文献2：美国专利申请公开第2012/0088228号说明书
[0010]专利文献3：日本专利第4024041号公报
[0011]非专利文献
[0012]非专利文献1：Virul Safety Evalation of Biotechnology Product Derived from Celline of Human or Animal Origin Q5A(R1)
[0013]非专利文献2：Note For Guidance On Virus Validation Studies:The Design,
Contribution And Interpretation Of Studies Validating The Inactivation and Removal Of Viruses
[0014]非专利文献3：关于确保血浆分级制剂的病毒安全性的指南(平成11年8月30日医药发第1047号医药安全局长通知)
[0015]非专利文献4:Raphael Wolfisberg et al.,Journal of Virology(2016)
[0016]非专利文献5:Beatriz Maroto et al.,JOURNAL OF VIROLOGY(2004)
[0017]非专利文献6：病毒实验学分论、丸善出版、国立卫生研究所学友会编pp22
‑
23
[0018]非专利文献7:V.Hutornojs at.al(2012)Env,Exp.Biol.10:pp.117
‑
123
[0019]非专利文献8:Anthony M.D
’
Abramo Jr.et al.,2005 Virology
[0020]非专利文献9:Joshua C Grieger et al.,Molecular Therapy 2015
[0021]非专利文献10:Pavel Plevka et al.,JOURNAL OF VIROLOGY(2011)
[0022]非专利文献11:PETER TATTERSALL et al.,JOURNAL OF VIROLOGY(1976)

技术实现思路

[0023]专利技术要解决的问题
[0024]本专利技术的课题之一在于，提供能够更准确地评价病毒去除介质在去除溶液中的病毒的工序中的病毒清除性能的方法。
[0025]用于解决问题的方案
[0026]根据本专利技术人等的见解，病毒加标中使用的含病毒液体有时含有两种病毒，即：具有核酸且具有感染性的病毒或具有核酸但不具有感染性的病毒。进而，含病毒液体有时含有既没有核酸也没有感染性的中空病毒颗粒(例如，参照非专利文献4、5)。中空病毒颗粒也称为空衣壳(empty capsid)或者病毒样颗粒(virus
‑
like particle)。需要说明的是，“不具有感染性的病毒”或“非感染性病毒”是指：可以具有侵入细胞的能力和在细胞内扩增的能力，但对于侵入后的宿主细胞，不会引发细胞病变效应(Cytopathic Effect)和伴随细胞死亡的病毒释放，是利用感染滴度测定法无法检测的病毒。具有感染性的病毒、不具有感染性的病毒、和中空病毒颗粒均为病毒衣壳。含有这些病毒和/或中空病毒颗粒的液体在本公开中称为含病毒衣壳液体。
[0027]感染滴度测定法虽能够检测具有感染性的病毒，但检测不到不具有感染性的病毒和中空病毒颗粒。另外，定量PCR法虽能够检测具有核酸且具有感染性的病毒及具有核酸但不具有感染性的病毒，但检测不到不具有核酸的中空病毒颗粒。本专利技术人等首次发现：含病毒衣壳液体中存在利用现有的病毒清除性能评价方法无法定量的病毒或中空病毒颗粒，存在这些的情况下会对病毒清除性能评价产生影响，即产生病毒去除介质的病毒去除/灭活能力被低估或未得到正确评价这样严重的问题。
[0028]例如，本专利技术人等发现：使用含有中空病毒颗粒的含病毒衣壳液体时，利用定量PCR法无法检测到的中空病毒颗粒加快病毒去除介质的通过，与仅负载具有核酸的病毒的情况相比，原本应检测到的具有核酸的病毒在早期从病毒去除介质中泄漏出来，存在病毒去除介质的病毒清除能力被低估这样的问题。本专利技术人等进行了深入研究，结果发现：通过使用中空病毒颗粒已被去除的含病毒衣壳液体，从而有时能够更准确地评价病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种评价病毒去除介质的病毒清除性能的方法，所述方法包括如下工序：(a)将含病毒衣壳液体添加至纯化对象溶液中的工序；(b)使添加了所述含病毒衣壳液体的纯化对象溶液与病毒去除介质接触，回收经纯化的溶液的工序；和(c)对所述纯化前的纯化对象溶液中的总病毒衣壳数和所述经纯化的溶液中的总病毒衣壳数进行定量的工序。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述(b)工序中，使添加了所述含病毒衣壳液体的所述纯化对象溶液通过所述病毒去除介质，回收经纯化的所述溶液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，向所述纯化对象溶液中添加的所述含病毒衣壳液体中，中空病毒颗粒已被去除，所述(c)工序中，对所述纯化前的纯化对象溶液中的病毒所具有的核酸和所述经纯化的溶液中的病毒所具有的核酸进行定量。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述中空病毒颗粒通过离心分离而去除。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述中空病毒颗粒通过密度梯度超速离心分离而去除。6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中，所述中空病毒颗粒通过使用了碘克沙醇的密度梯度超速离心分离而去除。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：粥川太贵，柳田恒一郎，
申请(专利权)人：旭化成医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：