靶向白蛋白的嵌合抗原受体及其使用方法技术

本公开提供了一种对白蛋白具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)。本公开还提供了包含CAR的组合物、编码CAR的多核苷酸、包含编码CAR的多核苷酸的载体、包含CAR的工程细胞及其使用方法。法。

【技术实现步骤摘要】
靶向白蛋白的嵌合抗原受体及其使用方法


[0001]本公开大体上涉及细胞疗法领域。特别地，本公开涉及用于在白蛋白存在下扩增免疫细胞并刺激免疫反应的组合物和方法。

技术介绍

[0002]哺乳动物的免疫系统能够识别和消除已被感染或受损的细胞以及那些已癌变的细胞。在癌症的情况下，免疫细胞如细胞毒性T细胞可以与癌细胞表面上的特定抗原(癌症抗原)结合并杀死癌细胞。利用免疫系统的这种天然能力，已开发出过继性细胞疗法，也称为细胞免疫疗法，以对抗癌症。根据细胞的来源和基因工程的方法，细胞免疫疗法可分为肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、工程T细胞受体(TCR)疗法、嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法和自然杀伤(NK)细胞疗法。
[0003]癌症患者体内天然存在的T细胞通常能够靶向癌细胞。然而，仅这些T细胞的存在并不总是足以保证它们能够消除肿瘤。一个潜在的障碍是这些T细胞必须首先被激活，然后将活性保持足够长的时间以维持有效的抗肿瘤反应。为了解决这些问题，TIL疗法收获了已经浸润患者肿瘤的天然存在的T细胞，然后将其激活并扩增。然后将大量这些激活的T细胞重新注入患者体内，以摧毁肿瘤。
[0004]TIL疗法的一个问题是，并非所有患者都具有已经识别其肿瘤的T细胞。为了解决这个问题，TCR疗法从患者获取T细胞，并为T细胞配备新的T细胞受体，其使T细胞能够靶向特定的癌症抗原。
[0005]TIL和TCR疗法都只能靶向和消除通过主要组织相容性复合体(MHC)呈递其抗原的癌细胞。为了克服这一限制，科学家们已经工程改造T细胞或NK细胞来表达与癌细胞表面上表达的抗原特异性结合的CAR，即使这些抗原没有通过MHC呈递在表面上。
[0006]当前细胞免疫疗法涉及激活和/或扩增从人类受试者分离的免疫细胞的步骤，这些步骤是昂贵且耗时的。因此，免疫细胞的离体激活和/或扩增已成为阻碍细胞免疫疗法广泛实施的主要障碍之一。因此，需要开发用于激活和/或扩增用于细胞免疫疗法的免疫细胞的新方法。

技术实现思路

[0007]在一个方面，本公开提供了一种编码嵌合抗原受体(CAR)蛋白的多核苷酸。在一些实施例中，CAR包含(1)包含第一抗原结合域的胞外域，(2)跨膜域和(3)胞内信号传导域，其中第一抗原结合域与白蛋白特异性结合。
[0008]在一些实施例中，第一抗原结合域是单链可变片段(scFv)。在一些实施例中，scFv包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。在一些实施例中，VH区包含HCDR1，其具有如表1所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；HCDR2，其具有如表2所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及HCDR3，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一
性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。在一些实施例中，VL区包含LCDR1，其具有如表4所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；LCDR2，其具有如表5所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及LCDR3，其具有如表6所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0009]在一些实施例中，抗原结合域是单域抗体(SDAB)。在一些实施例中，SDAB包含CDR1，其具有如表1所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；CDR2，其具有如表2所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及CDR3，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0010]在一些实施例中，抗原结合域是纳米抗体。在一些实施例中，纳米抗体包含CDR1，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；CDR2，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及CDR3，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0011]在一些实施例中，CAR蛋白还包含信号肽。在一些实施例中，信号肽包含CD8α的信号肽。在一些实施例中，CD8α的信号肽包含SEQ ID NO:130的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0012]在一些实施例中，跨膜域包含CD8α的跨膜域。在一些实施例中，CD8α的跨膜域包含SEQ ID NO:132的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0013]在一些实施例中，胞外域通过铰链区连接至跨膜域。在一些实施例中，铰链区包含CD8α的铰链区。在一些实施例中，CD8α的铰链区包含SEQ ID NO:133的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0014]在一些实施例中，胞内域包含共刺激域和信号传导域。在一些实施例中，共刺激域包含CD137的胞内域。在一些实施例中，CD137的胞内域包含SEQ ID NO:134的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。
[0015]在一些实施例中，胞内域包含CD3ζ的信号传导域。在一些实施例中，CD3ζ的信号传导域包含SEQ ID NO:135的序列或与其具有至少90％同一性的序列。
[0016]在一些实施例中，CAR蛋白具有以下结构(从左至右为N末端到C末端)：S
‑
AB
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中S是信号肽，AB是抗原结合域，H是铰链区，TM是跨膜域并且IC是胞内信号传导域。在一些实施例中，CAR具有以下结构：S
‑
VH
‑
L
‑
VL
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中VH是重链可变区，L是连接子，VL是轻链可变区。在一些实施例中，CAR具有以下结构：S
‑
VL
‑
L
‑
VH
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中VH是重链可变区，L是连接子，VL是轻链可变区。
[0017]在一些实施例中，CAR蛋白具有以下结构：S
‑
SDAB
‑
TM
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IC，其中SDAB是单域抗体。
[0018]在一些实施例中，CAR蛋白具有以下结构：S
‑
N
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TM
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IC，其中N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，其中所述CAR包含(1)包含第一抗原结合域的胞外域，(2)跨膜域和(3)胞内信号传导域，其中所述第一抗原结合域与白蛋白特异性结合。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述第一抗原结合域是单链可变片段(scFv)。3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述scFv包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述VH区包含HCDR1，其具有如表1所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；HCDR2，其具有如表2所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及HCDR3，其具有如表3所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。5.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述VL区包含LCDR1，其具有如表4所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；LCDR2，其具有如表5所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及LCDR3，其具有如表6所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。6.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原结合域是单域抗体(SDAB)。7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述SDAB包含CDR1，其具有如表9所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；CDR2，其具有如表10所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及CDR3，其具有如表11所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。8.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原结合域是纳米抗体。9.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中所述纳米抗体包含CDR1，其具有如表13所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；CDR2，其具有如表14所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列；以及CDR3，其具有如表15所示的序列，或与其具有至少90％同一性的序列，或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。10.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原结合域包含SEQ ID NO:131的序列或与其具有至少90％同一性的序列。11.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述CAR还包含信号肽。12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述信号肽包含CD8α的信号肽。13.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述CD8α的信号肽包含SEQ ID NO:130的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3个氨基酸残基差异的序列。14.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述跨膜域包含CD8α的跨膜域。15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述CD8α的跨膜域包含SEQ ID NO:132的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。16.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外域通过铰链区连接至所述跨膜域。17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含CD8α的铰链区。
18.根据权利要求17所述的多核苷酸，其中所述CD8α的铰链区包含SEQ ID NO:133的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。19.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中胞内域包含共刺激域和信号传导域。20.根据权利要求19所述的多核苷酸，其中所述共刺激域包含CD137的胞内域。21.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述CD137的胞内域包含SEQ ID NO:134的序列或与其具有至少90％同一性的序列；或与其具有1、2、3、4或5个氨基酸残基差异的序列。22.根据权利要求19所述的多核苷酸，其中所述胞内域包含CD3ζ的信号传导域。23.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述CD3ζ的信号传导域包含SEQ ID NO:135的序列或与其具有至少90％同一性的序列。24.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述CAR具有以下结构：S
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AB
‑
H
‑
TM
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IC，其中S是信号肽，AB是抗原结合域，H是铰链区，TM是跨膜域并且IC是胞内信号传导域。25.根据权利要求24所述的多核苷酸，其中所述CAR具有以下结构：S
‑
VH
‑
L
‑
VL
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中VH是重链可变区，L是连接子，VL是轻链可变区。26.根据权利要求24所述的多核苷酸，其中所述CAR具有以下结构：S
‑
VL
‑
L
‑
VH
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中VH是重链可变区，L是连接子，VL是轻链可变区。27.根据权利要求24所述的多核苷酸，其中所述CAR具有以下结构：S
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SDAB
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中SDAB是单域抗体。28.根据权利要求24所述的多核苷酸，其中所述CAR具有以下结构：S
‑
N
‑
H
‑
TM
‑
IC，其中N是纳米抗体。29.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外域还包含与癌症抗原特异性结合的第二抗原结合域。30.根据权利要求29所述的多核苷酸，其中所述癌症抗原选自由以下组成的组：CD19、CD20、CAIX、CD33、CD44v7/8、CEA、EGP
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2、EGP
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40、erb
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B2、erb
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B3、erb
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B4、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、Her2/neu、IL
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13R
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a2、KDR、k轻链、LeY、LI细胞粘附分子、MAGE
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Al、间皮素、MUCl、KG2D配体、癌胚抗原(h5T4)、PSCA、PSMA、TAA、TAG
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72和VEGF
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R。31.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外域还包含与白蛋白特异性结合的第二抗原结合域，其中所述第一抗原结合域和第二抗原结合域结合白蛋白的不同表位。32.根据权利要求31所述的多核苷酸，其中所述胞外域还包含与癌症抗原特异性结合的第三抗原结合域。33.根据权利要求1至32中任一项所述的多核苷酸，其为DNA或RNA。34.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令洁，陈功，J，
申请(专利权)人：苏州博腾生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：