无弹状病毒的Sf9-PT细胞及其应用制造技术

本申请提供了一株无弹状病毒的Sf9

【技术实现步骤摘要】
无弹状病毒的Sf9
‑
PT细胞及其应用


[0001]本申请涉及生物
，特别是涉及一株无弹状病毒的Sf9
‑
PT细胞及其应用。

技术介绍

[0002]杆状病毒
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昆虫细胞表达系统是重组蛋白表达的强大平台，已用于开发各种研究性生物制品和生产病毒疫苗。降低生物制品污染风险的综合策略仍然适用于产品安全，这包括产品制造中涉及的细胞系和细胞培养试剂等起始材料。由于昆虫在系统发育上与人类相距甚远，因此研究人员通常认为与使用哺乳动物细胞相比，使用昆虫来源的细胞系生产生物制品能更好地避免一些与外源病毒相关的安全问题。
[0003]Sf9细胞具有蛋白表达高、易于操作等优点，已成为真核蛋白表达应用最广泛的昆虫细胞系之一。然而，近年来美国生物制剂研究与评价中心发现，所有测试的Sf细胞均被一种新的外来病毒污染，即Sf
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弹状病毒(Spodoptera frugiperda rhabdovirus，Sf
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RV)。这一发现引起了人们对昆虫细胞
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杆状病毒表达载体系统生产的生物制剂安全性的担忧。虽然目前没有证据表明Sf
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RV病毒对人类或动物构成威胁，但是在生物制品制备过程中一旦发现任何外源病毒污染，都必须采取一切办法去除，保证生物制品的安全性。本实验室对Gibco来源的Sf9细胞进行了Sf
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RV病毒检测，结果表明也污染了这种病毒。
[0004]目前，中国专利技术专利申请CN110423726A提供了一株无弹状病毒污染的Sf9
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ZY细胞；中国专利技术专利申请CN114807009A涉及一株不依赖血清的无弹状病毒污染的Sf9
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RF细胞；现有的无弹状病毒污染的Sf9细胞在生长特性、增殖水平、杆状病毒扩增能力以及病毒包装稳定性等方面均与商品化Sf9细胞无明显差异。

技术实现思路

[0005]基于此，本申请提供了一株高密度培养、杆状病毒扩增能力更高、包装稳定性更持久的无弹状病毒污染的Sf9
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PT细胞。
[0006]根据本申请的一个方面，提供了一株无弹状病毒的Sf9
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PT细胞，该细胞已于2023年03月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C202334。
[0007]本申请还提供一种上述保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞的应用，具体技术方案如下：
[0008]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在构建毒理学、生理学、分子遗传学或发育生物学的生物研究模型中的应用。
[0009]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在昆虫杆状病毒表达系统中的应用。
[0010]在其中一些实施例中，所述Sf9
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PT细胞用于包装腺相关病毒。
[0011]在其中一些实施例中，所述Sf9
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PT细胞用于表达重组蛋白。
[0012]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在研究杆状病毒基因组的结构与功能中的应用。
[0013]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在研究真核基因表达调控机制中的应用。
[0014]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在制备生物制品中的应用。
[0015]保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9
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PT细胞在制备重组病毒疫苗中的应用。
[0016]在其中一些实施例中，所述病毒疫苗包括重组新型冠状病毒疫苗、流行性乙型脑炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和禽流感疫苗。
[0017]基于上述技术方案，本申请至少具有如下有益效果：
[0018](1)本申请筛选的Sf9
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PT细胞株未被弹状病毒污染，该细胞株能够作为改良的替代宿主，用于生物制品及疫苗的的开发和商业化生产，能够更加安全地规避Sf
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RV病毒污染造成的潜在危险；
[0019](2)具有高密度培养的特性，从而能够提高AAV的包装水平及外源蛋白表达量，降低成本；
[0020](3)重组杆状病毒在Sf9
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PT细胞株中具有更高的增殖水平；
[0021](4)Sf9
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PT细胞株包装AAV5病毒的能力能稳定到第30代。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为实施例1中凝胶电泳检测图，(a)为使用引物对G1/G2进行检测，(b)为使用引物对Mono1/Mono2进行检测，(c)为使用引物对Mono1i/Mono2i进行检测；
[0024]图2为实施例2中细胞生长曲线图，(a)为细胞活率，(b)为细胞密度，(c)为细胞直径，(d)为细胞倍增时间；
[0025]图3为实施例3中重组杆状病毒在Sf9细胞和Sf9
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PT细胞中增殖的感染滴度统计图；
[0026]图4为实施例4中Sf9细胞和Sf9
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PT细胞包装AAV5的基因组滴度统计图；
[0027]图5为实施例5中不同代次的Sf9
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PT细胞包装AAV5的基因组滴度统计图。
[0028]本申请提供了一株无弹状病毒的草地贪夜蛾Sf9细胞衍生系Sf9
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PT细胞，该细胞已于2023年03月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C202334。
具体实施方式
[0029]为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
[0030]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具
体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0031]本专利技术中，涉及到数值区间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株无弹状病毒的Sf9
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PT细胞，该细胞已于2023年03月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:C202334。2.如权利要求1所述的无弹状病毒的Sf9
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PT细胞在构建毒理学、生理学、分子遗传学或发育生物学的生物研究模型中的应用。3.如权利要求1所述的无弹状病毒的Sf9
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PT细胞在昆虫杆状病毒表达系统中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Sf9
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PT细胞用于包装腺相关病毒。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Sf9
...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆拓，陈慧，王丹丹，朱丽岩，韩贤舟，陈明骏，林群，
申请(专利权)人：苏州博腾生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：