一种裂解昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液和裂解方法技术

本发明专利技术提供一种昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液、裂解液获取方法及细胞裂解方法，通用性地对含AAV1～13等多种血清型的细胞中进行高效原位裂解，宿主细胞包括昆虫细胞和哺乳动物细胞，收率95%以上，全程操作无需转移料液或离心等，细胞裂解后，经过深层过滤或切向流过滤获得AAV细胞澄清液，具有收率高的特点，获得AAV细胞澄清液还可用于后续层析提纯，该方法可用于生产上大规模线性放大的收获rAAV细胞澄清液。胞澄清液。

【技术实现步骤摘要】
一种裂解昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液和裂解方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种裂解昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液和裂解方法。

技术介绍

[0002]重组腺病毒相关病毒(rAAV)是一类单链线状DNA缺陷型微小病毒，具有良好的安全性，低免疫原性，高特异性，高稳定性，作用时间持久的特点，现已经成为体内基因治疗递送的主要工具。不论是昆虫细胞还是HEK293哺乳动物细胞表达的rAAV，都主要存在于细胞内，从细胞收获液中高效便捷的提取含AAV的细胞澄清液以成为亟需解决的问题。传统裂解细胞方法以反复冻融，低pH为主，需要经过离心，才能收集细胞澄清液，存在处理时间长，操作繁琐，裂解不充分，容易造成产品的聚集，收率较低。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是：为了克服现有技术中的不足，本专利技术提供一种昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液、裂解液获取方法及裂解方法。
[0004]本专利技术解决其技术问题所要采用的技术方案是：一种昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液，所述裂解液的组分包括Tris、MgCl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解液，其特征在于：所述裂解液的组分包括Tris、MgCl2、Tween20和NaCl，配制的裂解液中各组分为：Tris
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HCL
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50mMMgCl2
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5 mMNaCl
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0.3
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0.6MTween 20
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0.5
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2%配制的裂解液pH值为7.6
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8.3。2.一种昆虫细胞及哺乳动物细胞裂解液的获取方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：选取多种经典裂解试剂配制含有不同组分、不同浓度的缓冲体系裂解液；步骤2：将含有腺相关病毒的细胞收获液加入到不同组分的缓冲体系裂解液中进行裂解，控制料液的转速、温度和pH值，在裂解过程的不同时段进行取样；步骤3：检测裂解前后料液的细胞活率、浊度和AAV滴度，根据检测结果选取出对细胞裂解具有促进作用裂解试剂作为配制裂解液的初选组分；步骤4：改变初选组分中不同裂解试剂的浓度，进行裂解效果的比较，检测裂解后料液的细胞活率、密度、滴度、pH和电导，根据检测结果进一步筛选，并且确定出不同裂解试剂的摩尔浓度；其中，腺相关病毒选自AAV1~13中任意一种或多种。3.如权利要求2所述的昆虫细胞及哺乳动物细胞裂解液的获取方法，其特征在于：步骤1中选取的经典裂解试剂包括Tris 、Tween20、Poloxamer188、NaCl、Sodium deoxycholate、MgCl2、Triton X
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100中的一种或几种。4.如权利要求2所述的昆虫细胞及哺乳动物细胞裂解液的获取方法，其特征在于：步骤3中的特征参数包括细胞活率、浊度、AAV滴度、细胞密度、pH值、电导中的一种或多种。5.一种昆虫细胞及哺乳动物细胞的裂解方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：裂解前取样20ml含有腺相关病毒的细胞收获液检测初始细胞活率、浊度和细胞密度；步骤2：将细胞收获液定量；步骤3：打开超净工作台的照明与通风开关，在超净工作台中用电动移液枪添加裂解液与核酸酶到细胞收获液中，在37℃，100
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【专利技术属性】
技术研发人员：章成昌，张骥，孙永越，李杰，张雅，张劲松，孔令洁，钱浩，
申请(专利权)人：苏州博腾生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：