具有改变的表面残基的经设计的锚蛋白重复结构域制造技术

本发明专利技术涉及了具有改变的表面残基的经设计的锚蛋白重复结构域，以及包含此类经设计的锚蛋白重复结构域的蛋白质、编码此类结构域或蛋白质的核酸、制备此类蛋白质的方法、包含此类蛋白质或核酸的药物组合物，以及此类蛋白质、核酸或药物组合物在治疗疾病中的用途。核酸或药物组合物在治疗疾病中的用途。核酸或药物组合物在治疗疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改变的表面残基的经设计的锚蛋白重复结构域
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年12月11日提交的EP19215433.4；2019年12月11日提交的EP19215434.2；2019年12月11日提交的EP19215435.9；2019年12月11日提交的EP19215436.7；2020年3月4日提交的EP20161059.9；以及2020年6月19日提交的EP20181234.4的优先权的权益。这六项专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文用于所有目的。


[0003]本专利技术涉及了具有改变的表面残基的经设计的锚蛋白重复结构域，以及包含此类经设计的锚蛋白重复结构域的蛋白质、编码此类结构域或蛋白质的核酸、制备此类蛋白质的方法、包含此类蛋白质或核酸的药物组合物，以及此类蛋白质、核酸或药物组合物在治疗疾病中的用途。

技术介绍

[0004]经设计的锚蛋白重复结构域可用于创建候选药物(WO2002020565；WO2011135067；WO2016156596；WO2018054971)以用于治疗疾病。包含在此类候选药物中的经设计的锚蛋白重复结构域通常以高亲和力结合靶标分子，从而药效地作用在该靶标上，例如拮抗靶标活性。为了基于经设计的锚蛋白重复结构域来实现候选药物的长系统半衰期，该候选药物通常需要包含具有长半衰期的部分，这可通过以下项来实现：例如，通过用聚乙二醇(PEG；WO2011135067)进行化学修饰，或通过包含一个或多个在基因上融合的对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域(WO2012069654)。使用后一种方式，生成并描述了具有长终末半衰期的候选药物(WO2016156596；WO2018054971)。对血清白蛋白具有结合特异性的此类经设计的锚蛋白重复结构域可延长蛋白质的终末半衰期，例如，与血清白蛋白的终末半衰期类似的终末半衰期(Steiner等人，Protein Eng Des Sel.第30卷第9期：第583
‑
591页(2017年))。然而，如下文所详述的，申请人观察到，一些经设计的锚蛋白重复结构域表现出快速的清除率，并且因此使终末半衰期变短，尽管事实上这些经设计的锚蛋白重复结构域在基因上与对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域进行融合。生物药物的良好药代动力学特性的重要性是本领域熟知的(例如参见，Strohl，BioDrugs第29卷：第215
‑
239页(2015年))。
[0005]因此，仍然需要改善蛋白质的药代动力学特性(包括延长终末半衰期)的新方法或方式，诸如经设计的锚蛋白重复结构域和包含一个或多个经设计的锚蛋白重复结构域的蛋白质。

技术实现思路

[0006]申请人意外地观察到，一些经设计的锚蛋白重复结构域表现出快速的清除率，并且因此使终末半衰期变短，尽管事实上这些经设计的锚蛋白重复结构域在基因上与对血清
白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域进行融合(例如参见，实施例6和图5中的蛋白质#24、#27、#31和#35)。为了理解这一观察结果，专利技术人惊奇地发现，改变经设计的锚蛋白重复结构域的N
‑
末端封端模块和/或C
‑
末端封端模块中的某些氨基酸残基，导致该经设计的锚蛋白重复结构域和包含该经设计的锚蛋白重复结构域的蛋白质的药代动力学特性(包括延长的终末半衰期)得到改善。经改变的氨基酸残基主要是表面暴露的残基。因此，本专利技术提供了导致经设计的锚蛋白重复结构域和包含该经设计的锚蛋白重复结构域的蛋白质的药代动力学特性得到改善的氨基酸序列。
[0007]本专利技术提供了包含新型氨基酸序列的经设计的锚蛋白重复结构域。在一个实施方案中，所述经设计的锚蛋白重复结构域包含选自由SEQ ID NO:75至81、88至94和107至111组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。在一个实施方案中，所述经设计的锚蛋白重复结构域包含：(i)选自由SEQ ID NO:75至81和107至111组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸；和(ii)选自由SEQ ID NO:88至94组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。在一个实施方案中，所述经设计的锚蛋白重复结构域包含：(i)氨基酸序列SEQ ID NO:78，其中X表示任何氨基酸；和(ii)氨基酸序列SEQ ID NO:91，其中X表示任何氨基酸。在一个实施方案中，所述经设计的锚蛋白重复结构域包含选自由SEQ ID NO:95至102组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。本专利技术还提供了包含以下项的蛋白质：(i)本专利技术的至少一个经设计的锚蛋白重复结构域；和(ii)至少一个半衰期延长的部分。在一个实施方案中，所述半衰期延长的部分是对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域。在一个实施方案中，所述对血清白蛋白具有结合特异性的锚蛋白重复结构域包含与SEQ ID NO:4至8中的任一者具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述蛋白质还包含至少一个多肽接头。在一个实施方案中，所述多肽接头是富含甘氨酸
‑
丝氨酸(GS)的接头或富含脯氨酸
‑
苏氨酸(PT)的接头，其中优选地，所述多肽接头具有氨基酸序列SEQ ID NO:2或3或它们的变体。在一个实施方案中，所述蛋白质是重组结合蛋白。本专利技术还提供了包含以下项的蛋白质：(i)本专利技术的至少一个、两个或三个经设计的锚蛋白重复结构域；和(ii)至少一个或两个对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域，其中优选地，所述对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域中的每个对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域独立地包含与SEQ ID NO:4至8中的任一者具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述蛋白质是重组结合蛋白。图1进一步示意性地示出了本专利技术。本专利技术还提供了编码本专利技术的经设计的锚蛋白重复结构域或本专利技术的蛋白质的核酸。本专利技术还提供了包含以下项的药物组合物：本专利技术的经设计的锚蛋白重复结构域、本专利技术的蛋白质或本专利技术的核酸。本专利技术还提供了治疗医学病症的方法，该方法包括向需要此类治疗的患者施用治疗有效量的本专利技术的药物组合物的步骤。本专利技术还提供了用于制备蛋白质的方法，该方法包括以下步骤：(A)制备在一个开放阅读框中编码的核酸，(i)本专利技术的至少一个经设计的锚蛋白重复结构域，和(ii)至少一个对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域；以及(B)将所述核酸转移到表达宿主中。在一个实施方案中，该表达宿主是大肠杆菌(E.coli)。
附图说明
[0008]图1.本专利技术的示意图。(a)本专利技术的经设计的锚蛋白重复结构域的示意图。该经设计的锚蛋白重复结构域(矩形)在限定位置处(由竖直黑线示出)包含某些氨基酸。(b)比较器设计的锚蛋白重复结构域的示意图。该比较器设计的锚蛋白重复结构域在对应位置中包含与(a)不同的氨基酸。例如，(a)可包含SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经设计的锚蛋白重复结构域，其中所述经设计的锚蛋白重复结构域包含选自由SEQ ID NO:75至81、88至94和107至111组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。2.根据权利要求1所述的经设计的锚蛋白重复结构域，其中所述经设计的锚蛋白重复结构域包含：(i)选自由SEQ ID NO:75至81和107至111组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸；和(ii)选自由SEQ ID NO:88至94组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。3.根据权利要求1至2中任一项所述的经设计的锚蛋白重复结构域，其中所述经设计的锚蛋白重复结构域包含：(i)氨基酸序列SEQ ID NO:78，其中X表示任何氨基酸；和(ii)氨基酸序列SEQ ID NO:91，其中X表示任何氨基酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的经设计的锚蛋白重复结构域，其中所述经设计的锚蛋白重复结构域包含选自由SEQ ID NO:95至102组成的组的氨基酸序列，其中X表示任何氨基酸。5.一种蛋白质，所述蛋白质包含：(i)至少一个根据权利要求1至4中任一项所述的经设计的锚蛋白重复结构域；和(ii)至少一个半衰期延长的部分。6.根据权利要求5所述的蛋白质，其中所述半衰期延长的部分是对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复结构域。7.根据权利要求6所述的蛋白质，其中对血清白蛋白具有结合特异性的所述经设计的锚蛋白重复结构域包含与SEQ ID NO:4至8中的任一者具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：分子合作伙伴股份公司，
类型：发明
国别省市：